微小RNA－222參與非小細(xì)胞肺癌發(fā)病的作用機(jī)制研究*

毛凱平， 沈 毅， 譚 林

(1.山東省青島市市立醫(yī)院胸外科， 山東 青島 266000 2.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胸外科， 山東 青島 266000)

肺癌是臨床較為常見的惡性腫瘤之一。有文獻(xiàn)提示NSCLC約占肺癌的80%，是肺癌高發(fā)類型。21世紀(jì)初期，有相關(guān)研究報(bào)道首次提出微小核糖核酸(microRNA、miRNA)表達(dá)水平的異常與腫瘤進(jìn)展存在一定的相關(guān)性［1，2］。此后也有大量研究報(bào)道證實(shí)，微小核酸在腫瘤的產(chǎn)生與進(jìn)展過程中起到重要的影響作用，目前已有研究證實(shí)miR－21在肝癌、甲狀腺頭狀癌等惡性腫瘤中表達(dá)水平有明顯提升，同時(shí)與腫瘤分級(jí)表現(xiàn)呈明顯正相關(guān)表現(xiàn)，但臨床上對(duì)miRNA－222與NSCLC 的研究報(bào)道較少［3，4］。基于此，為進(jìn)一步分析微小RNA－222參與NSCLC發(fā)病的作用機(jī)制，本研究對(duì)100例NSCLC病理標(biāo)本進(jìn)行了研究，現(xiàn)整理報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:收集自2011年1月至2013年12月我院經(jīng)手術(shù)切除的100例非小細(xì)胞肺癌病理標(biāo)本作為研究對(duì)象，同時(shí)采集所有病例癌旁肺組織，所有納入研究對(duì)象術(shù)后均經(jīng)病理檢查證實(shí)為NSCLC，且術(shù)前未接受靶向治療、放療及化療。其中男70例，女30例;年齡38～81 歲，平均年齡(58.6±1.4)歲;腺癌 46 例，鱗癌54例;腫瘤分期:I期38例，Ⅱ期47例，Ⅲ期15例;分化程度:低分化33例，中、高分化67例;腫瘤直徑＞3cm者60例，≤3cm 40例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移65例。

1.2 方法:采用qRT－PCR法對(duì)100例病例標(biāo)本微小RNA－222表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。采用Trizol試劑提取病理標(biāo)本中總RNA，以U6小RNA作為參考依據(jù)，以相對(duì)CT值表示檢測(cè)值。嚴(yán)格按照試劑操作說明進(jìn)行檢測(cè)。術(shù)后0.5h內(nèi)獲得患者病理標(biāo)本，清除被污染瘤細(xì)胞后，采用液氮速凍后，放置于－80℃環(huán)境下保存待測(cè)。提取病理組織RNA，后實(shí)施cDNA逆轉(zhuǎn)錄。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)上述數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，以P＜0.05為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 NSCLC組織及癌旁肺組織中微小RNA－222表達(dá)水平對(duì)比:NSCLC病理組織中miRNA－222相對(duì)表達(dá)值為(20.12±6.37)，明顯高于癌旁肺組織中表達(dá)量，兩者對(duì)比差異顯著(P＜0.05)，如表1。

表1 NSCLC組織及癌旁肺組織中微小RNA－222表達(dá)水平對(duì)比(±s)

表1 NSCLC組織及癌旁肺組織中微小RNA－222表達(dá)水平對(duì)比(±s)

組別 n miRNA－222相對(duì)表達(dá)值NSCLC 組織 100 20.12±6.37癌旁肺組織 100 17.84±6.23 t－2.774 P － ＜0.05表2 NSCLC患者臨床病理特征與miRNA－222表達(dá)水平關(guān)系(x±s)病理特征 n miRNA－222相對(duì)表達(dá)值t P病理類型腺癌 46 20.72±6.77 0.613 ＞0.05鱗癌 54 19.06±7.04腫瘤分期I+Ⅱ期 85 19.72±6.82 2.782 ＜0.05Ⅲ期 15 20.45±6.56分化程度低分化 33 21.26±6.55 2.066 ＜0.05中、高分化 67 18.71±7.11腫瘤直徑＞3cm 60 19.53±6.39 1.014 ＞0.05≤3cm 40 20.73±6.56淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有65 21.37±6.28 2.363 ＜0.05無35 18.49±7.05

2.2 NSCLC患者臨床病理特征與miRNA－222表達(dá)水平關(guān)系:病理類型與腫瘤直徑長(zhǎng)度與NSCLC患者病理組織中miRNA－222表達(dá)量并無明顯意義(P＞0.05);但腫瘤分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素均與組織miRNA－222 相對(duì)表達(dá)水平相關(guān)(P＜0.05)，如表2。

3 討 論

伴隨著人類基因組計(jì)劃研究的開展，超過99%的基因組非編碼序列引起了醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的廣泛關(guān)注，其中以miRNA為代表［5］。miRNA是單鏈小分子 RNA中的一種，常見于高等哺乳動(dòng)物、病毒、植物中。早在20世紀(jì)90年代初期有研究者發(fā)現(xiàn)首個(gè)非編碼RNA以來，截止到21世紀(jì)初期目前已發(fā)現(xiàn)miRNA超過500種，可能調(diào)節(jié)基因組中超過30%的基因編碼［6］。當(dāng)前認(rèn)為miRNA主要作為人體基因表達(dá)的負(fù)調(diào)控因子，參與細(xì)胞的凋亡及增值過程，影響細(xì)胞分化及代謝功能，但目前臨床上對(duì)其確切的生物功能及靶點(diǎn)尚未明確。有相關(guān)文獻(xiàn)提示，miRNA可作為癌基因、抑癌基因參與腫瘤的進(jìn)展過程［7］。其中miRNA－222主要位于人體染色體的脆性部分，目前已證實(shí)在肝癌患者的基因中有較高的表達(dá)，有明顯的癌基因作用［8］。

有研究通過基因芯片檢測(cè)方法得出結(jié)論，在非小細(xì)胞肺癌患者病理組織中有超過40種miRNA基因存在異常表達(dá)現(xiàn)象，其中miRNA－222表達(dá)水平升高比較明顯。有學(xué)者對(duì)不吸煙肺癌患者病理組織中檢出miRNA－222水平呈過高表達(dá)。本組研究中，NSCLC組織中miRNA－222表達(dá)水平明顯高于癌旁肺組織，與早期研究報(bào)道內(nèi)容一致，證實(shí)miRNA－222存在癌基因作用。但早期部分研究并未對(duì)miRNA－222表達(dá)水平與NSCLC患者的發(fā)病及作用機(jī)制展開研究。本組研究結(jié)果提示，NSCLC患者腫瘤分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素均與miRNA－222表達(dá)水平存在一定的相關(guān)性，提示NSCLC患者組織中miRNA－222高表達(dá)水平可能預(yù)示患者預(yù)后水平較差或腫瘤進(jìn)展。

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