底泥中除草劑滅草松殘留量的測定

孫秀梅，李晉成，嚴忠雍，陳 思，方 益，金衍健，郝 青，郭遠明

(1．浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術研究重點實驗室，浙江舟山316012;2．中國水產(chǎn)科學研究院，北京100141)

滅草松是觸殺型的苯脲除草劑，主要用于芽后雜草的防除，在我國被廣泛用于玉米、大豆、水稻及牧場等除草。由于該類型除草劑及其代謝產(chǎn)物存在一定的毒性和致癌性，其殘留會對生態(tài)環(huán)境和人體健康構成潛在威脅。滅草松除草劑的方法多為氣相色譜法，但它需要衍生。該方法反應條件嚴格，重復性差，且試劑毒性大［1－4］。近年新發(fā)展起來的高效液相色譜技術恰好能彌補氣相色譜法的不足，可對80%的有機物進行分離和分析，且不需要衍生，尤其適用于極性較強、沸點高、分子量大的化合物［5－6］。目前，僅有少量文獻報道土壤中滅草松殘留的分析檢測，且大多是高效液相色譜法［7－8］。筆者利用實驗室現(xiàn)有的超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，選用合適的色譜柱，通過改變流動相的類型和配比來尋找合適的分析測試條件，為滅草松在底泥中的識別和定量化研究提供科學方法。

1 材料與方法

1．1 儀器 超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜(Waters ACQUITY UPLC)，配電子轟擊電離(ESI)離子源，氮吹濃縮儀器(美國LABCONCO公司)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi)，渦輪混合器，高速離心機(德國Eppendorf)。

1．2 試驗條件

1．2．1 液相色譜條件。色譜柱為BEH C18柱(50 mm×2．1 mm，1．7μm)，柱溫為40℃。以水溶液(A相)和乙腈(B相)流動相進行線性梯度洗脫，具體梯度洗脫條件見表1。

表1 液相色譜梯度洗脫程序

1．2．2 質(zhì)譜條件。離子源為電噴霧離子源(ESI)，掃描方式為負離子掃描;檢測方式為多反應監(jiān)測(MRM)模式;離子源溫度為120℃;霧化溫度380℃;霧化氣流速600 L/h;錐孔氣流速50 L/h;滅草松定量離子對(m/z)238．9/131．9，定性離子對238．9/197．0，其碰撞電壓分別為 28、20 V;滅草松 －D7定量離子對245．9/131．9，其碰撞電壓為28 V。

2 結果與分析

2．1 樣品前處理條件的優(yōu)化 一般采用的前處理方法有索氏提取、超聲萃取和加速溶劑萃取，其中加速溶劑萃取操作簡便、綠色環(huán)保，有利于批量處理，但受儀器條件的限制，加速溶劑萃取的普及性有局限，超聲萃取部分除草劑的萃取效率低。因此，采用索氏提取對底泥中除草劑進行提取。該研究考察了提取溶劑、溫度、時間等因素對提取效果的影響，發(fā)現(xiàn)萃取溶劑為丙酮+二氯甲烷(1∶2，V/V)混合有機溶劑，索氏抽提12 h。在凈化程序上，分別考察了3種固相萃取柱C18、佛羅里土柱和硅膠柱的凈化效果，發(fā)現(xiàn)當采用C18固相萃取柱凈化時，基線平穩(wěn)且雜質(zhì)較好，回收率高，效果好。因此，采用C18固相萃取柱對樣品進行凈化處理。

2．2 液相色譜和質(zhì)譜方法優(yōu)化 分別考察了BEH C18柱(100 mm ×2．1 mm，1．7 μm)和 BEH C18柱(50．0 mm ×2．1 mm，1．7μm)對除草劑的分析性能。研究表明，100 mm的C18柱待測物保留時間過長，不適合大批量樣品的快速測試，而50 mm的C18柱可以在較短時間內(nèi)全部出峰完畢，且峰形良好，因此選擇50 mm的C18柱進行分析。為了達到最佳的色譜分離和質(zhì)譜檢測效果，考察了以乙腈－水、乙腈－水(2 mmol/L乙酸銨)和乙腈－水(2 mmol/L乙酸銨+濃度0．1%甲酸)為流動相時的分離情況。研究表明，水中加入2 mmol/L乙酸銨+濃度0．1%甲酸，能改善除草劑峰形，說明加緩沖液后更有利于化合物的離子化，因此選擇含2 mmol/L乙酸銨+濃度0．1%甲酸溶液作為流動相的水相。采用選擇離子掃描模式(MRM)，可避免待測物之間的相互干擾和雜質(zhì)干擾，使得定性與定量分析更準確。

2．3 線性關系與檢出限 在確定的最佳分析條件下，將不同濃度標準溶液進行LC-MS/MS分析。以待測物濃度為橫坐標，以待測物峰面積為縱坐標，采取不加權最小二乘法進行回歸運算，求得除草劑的線性回歸方程。結果表明，滅草松在1．5～150．0 ng/ml的濃度范圍內(nèi)線性關系良好，相關系數(shù)(r)均大于0．998，滿足定量分析的要求。以S/N≥3確定方法的檢出限為0．3μg/kg。

2．4 回收率和精密度 取底泥樣品，分別制得濃度為1．0、10．0和20．0μg/kg添加水平的加標樣品，按照優(yōu)化的方法進行樣品的提取和凈化，采取外標法和內(nèi)標法定量計算，每個濃度水平重復測定6次。研究表明，當添加濃度水平為1．0～20．0μg/kg時，在魚肉中滅草松回收率為 82% ～116%，RSD為3．6% ～9．7%。該方法顯示出較好的回收率和精密度，滿足底泥中滅草松殘留檢測的要求。

3 結論

該研究建立了一種能對底泥中滅草松除草劑快速分析的超高效液相色譜－三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜分析方法。該方法能有效地消除底泥樣品中復雜基質(zhì)的干擾，保證分析檢測的準確性，方法靈敏度高，可以滿足實際樣品測試的需要。

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