超聲輔助提取金果欖中總多酚的工藝研究

楊忠飛

(銅仁學院生物與農林工程學院，貴州銅仁554300)

中藥金果欖為防己科青牛膽屬植物青牛膽Tinospora sagittata(Oliv.)Gagnep的塊根，別名金牛膽、地苦膽、九蓮子、青牛膽、金線吊葫蘆。性寒，味苦，歸肺、大腸經，具有清熱解毒，利咽，消腫止痛之功，常用于咽喉腫痛、癰疽疔毒、泄瀉、痢疾、脘腹疼痛［1］，臨床上用于治療咽喉炎［2］、扁桃體炎［3］、靜脈炎［4］等癥。現代藥理學研究表明，金果欖有抗菌、抗腫瘤及抗癌等功效［5－7］。

貴州的金果欖分布較廣，民間采用醋磨涂敷患處治療潰瘍面，利用程度較低。金果欖的化學成分研究較少，主要藥理活性成分為藥根堿和防己堿，還含有揮發油、萜類、甾酮類等其他成分［8］，金果欖中總多酚的研究鮮見報道。超聲波具有用時短的特點，能縮短提取時間。金果欖作為民間治療咽喉炎、胃炎的特效藥，其有效活性部位的化學成分和藥理作用需進一步研究，為此，該試驗采用微波輔助提取金果欖中總多酚，在單因素試驗的基礎上，通過正交試驗確定金果欖中總多酚超聲提取的最佳工藝，以期為金果欖的開發利用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 金果欖，購于銅仁市民生藥房，經銅仁學院魯道旺副教授鑒定為植物青牛膽Tinospora sagittata(Oliv.)Gagnep。碳酸鈉、福林酚、乙醇等試劑分析純均為國產市售，沒食子酸為國家標準品。

1.2 儀器與設備 AR124CN電子天平(奧豪斯儀器上海有限公司)，RE-52型旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)，T6新世紀紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)，SG-5200HPT型超聲波提取儀(上海冠特超聲儀器有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 材料預處理。原料→恒溫干燥→粉碎→石油醚脫酯→干燥備用。

1.3.2 標準曲線的制作。配制濃度為0.1 mg/ml的沒食子酸標準品，分別取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml的標準品于25 ml的棕色容量瓶中，以不加標準液的溶液為空白對照，分別加入2 ml福林酚試劑，混勻，再加入4 ml質量分數為15%的碳酸鈉溶液，混勻后加蒸餾水定容。室溫下避光放置1 h，在波長750 nm處測定吸光度，每個樣品平行測定3次，在750 nm處測定吸光度，以質量濃度(C)和吸光度(A)進行線性回歸(圖1)，線性回歸方程為 A=0.692 5C+0.002 0(R2=0.999 0)。

1.3.3 最佳提取條件的確定。精密稱取樣品1.000 g(n=3)，根據金果欖中總多酚的理化性質的影響，在其他3個因素條件恒定情況下，分別以超聲功率(80、100、120、140、160 W)、料液比(1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50)、乙醇質量濃度(30%、40%、50%、60%、70%)、提取時間(30、45、60、75、90 min)4 個因素作為變量進行提取，通過正交軟件設計正交試驗(表1)。提取液過濾、離心后減壓濃縮，按“1.3.2”項下方法測定吸光度，由回歸方程計算出供試樣品中總多酚的含量。

1.3.4 金果欖中總多酚含量計算。總多酚=CV/M，式中，C是根據標準曲線讀出樣品中沒食子酸的量(mg)，V為待測液體積，M為樣品重量(g)。

表1 微波提取金果欖中總多酚L 9(34)正交試驗因素及水平

2 結果與分析

2.1 不同因素對金果欖中總多酚提取的影響

2.1.1 提取時間。從不同超聲提取時間對金果欖中總多酚提取的影響(圖2)可看出，提取時間在30～60 min時，隨著提取時間的增多，總多酚提取率顯著增大，而提取時間＞60 min后總多酚提取率呈緩慢下降的趨勢，可能是因為提取時間在60 min時多酚類物質浸出已經很充分，繼續提取多酚類物質易被氧化。因此，選擇金果欖超聲提取時間為60 min。

2.1.2 超聲功率。由不同超聲功率對金果欖中總多酚提取的影響(圖3)可見，隨著超聲功率的增大，金果欖中多酚類物質的提取率增大，功率為120 W時達最大，當功率＞120 W時，總多酚的提取量反而下降，因此，選擇金果欖超聲功率為120 W。

2.1.3 乙醇濃度。從圖4可看出，隨乙醇濃度的增加，總多酚的提取率增加，提取率達最大值時乙醇的濃度為50%，濃度高于50%時，總多酚的提取量卻隨乙醇的增加而下降，可能因該溶劑與總多酚極性的差異增大。因此，選擇50%的乙醇提取金果欖中總多酚。

2.1.4 料液比。從不同料液比對金果欖中總多酚提取的影響(圖5)可看出，隨著提取溶劑量的增加，金果欖多酚類物質的提取率增大，料液比為1∶40時達最大值，料液比為1∶40以后，總多酚的提取量反而下降，可能是因為多酚類物質的溶出已基本達到飽的原因。因此，選擇金果欖超聲提取料液比為 1∶40。

2.2 正交試驗設計確定提取最佳條件 由4個因素的極差(R)大小(表2)可知，金果欖中總多酚提取的影響因素大小依次為料液比＞提取時間＞乙醇濃度＞超聲功率。4個試驗因素中，料液比對金果欖中總多酚提取的影響最顯著，而提取時間次之，乙醇濃度影響較小，超聲功率影響最小。正交試驗優化后，金果欖中總多酚最佳提取工藝條件為:以50%乙醇為溶劑，提取功率為100 W，超聲提取時間60 min，料液比1∶40。

表2 微波提取金果欖中總多酚正交試驗結果

2.3 驗證試驗 稱取金果欖粉末1.00 g，共3份，按最佳提取工藝條件提取，進行驗證試驗，測得金果欖中平均總多酚含量為25.078 2 mg/g(表3)，可見該工藝穩定可行。

表3 金果欖中總多酚驗證性試驗結果

3 結論

在考查金果欖中總多酚提取影響因素的正交試驗中，4個因素對提取效果影響的主次順序為料液比＞提取時間＞乙醇質量濃度＞超聲功率。通過驗證試驗得出金果欖中總多酚最佳提取條件為50%乙醇為溶劑，提取功率為100 W，超聲提取時間60 min，料液比1∶40，此條件下金果欖中總多酚的含量為25.078 2 mg/g。

通過該試驗可知，在微波提取金果欖中總多酚試驗中，因素料液比的影響最為顯著，在今后生產中，應嚴格控制好;超聲提取時間的影響小于料液比，正交試驗優化后最佳時間為60 min，時間過長提取量反而減少，所以在今后生產中對時間的控制可根據實際情況適當調整;乙醇濃度的影響小于超聲提取時間，影響最小的因素是超聲功率，在今后采用超聲輔助提取法提取金果欖中總多酚時，試驗中可根據具體情況對這些因素進行適當的調整，以提高提取效率和節約提取成本。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(第一部)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010.

［2］高麗華，姜海英，支艷，等.清咽湯治療急性咽炎［J］.時珍國醫國藥，2000，11(7):650 －655.

［3］侯愛風，于豪.中藥吹喉配合點刺治療小兒急性扁桃體炎105例［J］.安徽中醫臨床雜志，2000，12(5):425 －427.

［4］張青云.金果欖酒濕敷治療輸液后靜脈炎［J］.河南中醫，2001，21(4):13－15.

［5］殷崎，宋勤，楊永東.民族藥地苦膽膠囊的藥理學研究［J］.中國民族民間醫藥雜志，1998，33(4):30 －34.

［6］SINGH R P，BANERJEE S，KUMAR P V S，et al.Tinospora cordifolia induces enzymes of carcinogen/drug metabolism and antioxidant system，and inhibits lipid peroxidation in mice［J］.Phytomedicine，2006，13(1):74 －84.

［7］張學梅，粱文波.心葉青牛膽的免疫調節和抗腫瘤作用［J］.國外醫藥植物藥分冊，2000，15(3):123.

［8］趙成剛.青牛膽屬植物化學成分及藥理研究進展［J］.銅仁學院學報，2013(4):136－139.