乙型肝炎患者血清HBV－DNA水平與肝纖維化指標的相關性分析

胡 凱，鄧 文

（景德鎮第二人民醫院檢驗科，江西 333000）

乙型肝炎患者血清HBV－DNA水平與肝纖維化指標的相關性分析

胡 凱，鄧 文

（景德鎮第二人民醫院檢驗科，江西 333000）

目的分析乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒（HBV）DNA水平與肝纖維化指標之間的相關性。方法采用實時熒光定量PCR法、化學發光法分別檢測乙型肝炎患者和健康體檢者血清HBV－DNA載量和肝纖維化指標：透明質酸（HA）、Ⅲ型前膠原N端肽（PⅢNP）、層粘連蛋白（LN）、Ⅳ型膠原（Ⅳ－C），并統計分析HBV－DNA載量和肝纖維化指標的相關性。結果血清HBV－DNA載量取對數值（lg）后平均水平為5.49±1.39，HA為（166.95±148.20）ng/mL，PⅢNP為（12.14±7.37）ng/mL，Ⅳ－C為（65.29±45.48）ng/mL，LN為（59.52±35.67）ng/mL。患者組肝纖維化指標與對照組比較差異均有統計學意義（P＜0.05），血清HBV－DNA載量只與LN呈正相關性（r＝0.284，P＝0.015）。結論乙型肝炎患者血清HBV－DNA水平與多數肝纖維化指標沒有直線相關關系，但乙型肝炎患者在抗病毒治療的同時應加強抗纖維化的治療。

乙型肝炎； HBV－DNA； 肝纖維化； 相關性

中國是乙型肝炎病毒（HBV）感染大國，乙型肝炎在長期病毒感染的慢性發展中部分會演變為肝硬化，進一步發展形成肝癌。眾多研究資料表明，肝纖維化是慢性乙型肝炎向肝硬化發展的必經之路［1］，如能早期發現并及時合理治療，使病情得到有效的控制，尚有逆轉的可能。肝纖維化指標血清透明質酸（HA）、Ⅲ型前膠原肽（PⅢNP）、Ⅳ型膠原（Ⅳ－C）、層粘連蛋白（LN）能反映肝纖維化及肝細胞實質性損傷程度，有利于全面反映乙型肝炎的診斷、肝纖維化的發展變化及治療效果的監測；血清HBV－DNA水平是乙型肝炎患者HBV感染的直接證據，也是反映體內HBV復制增殖水平的可靠指標和評估臨床治療效果的重要依據［2］。因此，筆者對血清HBV－DNA與肝纖維化指標之間的相關性進行了分析，旨在為乙型肝炎的臨床診斷、治療和預后觀察等提供參考依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年7月至2013年4月于景德鎮第二人民醫院就診的門診及住院乙型肝炎患者99例作為患者組，其中男54例、女45例，平均年齡為（50.4±14.5）歲，均由感染科醫生以2000年9月西安第十次全國病毒性肝炎及肝病學術會議討論修訂的病毒性肝炎防治方案中的診斷標準［3］經綜合分析后確診，排除其他臟器有急慢性病史的患者。根據HBV－DNA水平將患者分為HBV－DNA＜103IU/mL組（n＝ 26），HBV－DNA：103～＜106IU/mL組（n＝47），HBV－DNA≥106IU/mL組（n＝26）組。另外，選取同期于景德鎮第二人民醫院進行健康體檢且合格者55例作為對照組（HBV－DNA＜103IU/mL），男29例、女26例，平均年齡（40.4±11.7）歲，均無急慢性肝病史及其他臟器急慢性病史。

1.2 方法 上述人群于清晨空腹抽取靜脈血5mL，離心分離后取血清于－20℃保存待檢。采用實時熒光定量PCR法檢測血清HBV－DNA載量，儀器為美國ABI公司PE－5700自動熒光定量PCR儀，試劑由廣州中山醫科大學達安基因診斷中心提供。采用化學發光法檢測反映肝纖維化程度的指標，儀器為鄭州安圖生物工程有限公司LUMO化學發光儀，試劑由鄭州安圖生物工程有限公司提供。操作嚴格按照儀器標準化操作規程和試劑說明書進行。

1.3 統計學處理 采用SPSS18.0軟件包進行統計學分析，計量資料以表示，兩組比較采用成組設計的雙側t檢驗，多組均數比較采用單因素方差分析，相關性分析采用直線相關系數r。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 2組間檢測指標總體水平的比較 將HBV－DNA檢測的原始數據進行對數處理，反映肝纖維化程度的指標HA、PⅢNP、LN、Ⅳ－C的水平見表l，患者組與對照組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 不同HBV－DNA載量的患者間HA、PⅢNP、LN、Ⅳ－C水平的比較 不同HBV－DNA載量患者組間HA、PⅢNP、LN、Ⅳ－C水平進行比較三組同時比較，經方差分析，除Ⅳ－C外，其余各項指標的差異均有統計學意義（P＜0.05），兩兩比較中見表2。

表1 2組間HBV－DNA載量、HA、PⅢNP、LN、Ⅳ－C水平的比較（）

組別 n HBV－DNA（對數值） HA（ng/mL） PⅢNP（ng/mL） LN（ng/mL） Ⅳ－C（ng/mL）±35.67 65.29±45.48對照組 55 1.23±0.02 60.20±25.85 8.34±2.80 32.12±19.70 34.76±18.08 t 6.663 7.883 5.152 8.024 7.485 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05患者組 99 5.49±1.39 166.95±148.20 12.14±7.37 59.52

表2 患者組組間HA、PⅢNP、LN、Ⅳ－C水平的比較（）

＊：P＜0.05，與＜103IU/mL組比較；△：P＜0.05，與103～＜106IU/mL組比較；#：P＜0.05，與≥106IU/mL組比較。

HBV－DNA水平分組 n HA（ng/mL） PⅢNP（ng/mL） LN（ng/mL） Ⅳ－C（ng/mL）66.35±28.37 103～＜106IU/mL組 47 242.50±184.14＊12.83±6.21 75.92±39.42#103.21±38.56≥106IU/mL組 26 267.95±266.12＊18.61±11.64△105.55±56.16 80.32±38.42 F 4.169 3.764 3.956 1.003 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＞＜103IU/mL組 26 155.22±59.42 16.46±5.71△75.99±36.96#0.05

2.3 血清HBV－DNA載量與HA、PⅢNP、LN、Ⅳ－C的相關性血清HBV－DNA載量與HA、PⅢNP、LN、Ⅳ－C的相關系數r見表3，HBV－DNA與LN呈正相關（r＝0.284，P＜0.05），HBV－DNA載量與LN水平存在直線相關關系。血清HBVDNA載量與HA、PⅢNP、Ⅳ－C不存在直線相關關系。

2.4 血清HBV－DNA載量與HA、PⅢNP、LN、Ⅳ－C散點圖 血清HBV－DNA載量與HA、PⅢNP、LN、Ⅳ－C相關性分析的散點圖見附圖1～4（見《國際檢驗醫學雜志》網站主頁“論文附件”）。附圖1、2、4表明血清HBV－DNA載量與HA、PⅢNP、Ⅳ－C散點圖近似圓形，血清HBV－DNA載量與HA、PⅢNP、Ⅳ－C水平間不存在直線相關關系。圖3表明血清HBV－DNA載量與LN散點圖趨近橢圓形，兩者間存在直線相關關系，但不是很明顯。

3 討 論

肝纖維化表現為肝內結締組織增生和肝臟彌漫性，過量的細胞外基質沉積，是對各種原因所致肝損傷的創傷愈合反應，將改變正常肝組織的結構和功能［4］。HA、PⅢNP、LN及Ⅳ－C均為細胞外基質，PⅢNP、Ⅳ－C是參與組成膠原纖維的成分，HA及基質成分LN在肝纖維化的發展過程中均有明顯增加。本研究中，99例乙型肝炎患者血清肝纖維化指標與對照組比較有明顯的增高。有研究表明，HA、PⅢNP、LN及Ⅳ－C水平變化可以密切反映肝纖維化的活動水平及肝損傷程度［5］。

HBV感染慢性化是導致肝纖維化的重要原因，病毒的持續復制增殖可以是肝纖維化的誘因，然而，HBV－DNA復制水平降低并不能阻止肝纖維化的持續進行，因為機體通過免疫系統對病毒的清除，同樣也引發了機體的免疫病理反應，導致肝細胞損傷、破壞，隨之發生的是肝臟組織的修復及纖維化［6］。本研究顯示：血清HBV－DNA水平與HA、PⅢNP、Ⅳ－C并無明顯相關性，與蔡文品等［7］的報道結果相一致。而血清HBVDNA水平與LN存在直線相關性，但不明顯，與蔡文品等［7］的報道結果不符，可能與實驗條件或樣本量有關，還有待于進一步實驗分析。

HBV－DNA水平高低與肝纖維化指標水平的相關性并不十分明顯。其原因可能是：乙型肝炎發病機制很復雜，病毒復制不是病理損傷的唯一原因，還應考慮機體自身免疫因素、肝功能以及肝炎標志物的轉變等。病毒復制和肝纖維化反映了疾病過程和發病機制的不同階段，比如在免疫耐受期，病毒復制活躍但肝臟損傷不明顯。而在免疫清除期，肝臟炎癥活動嚴重，部分病毒被清除，可血清HBV－DNA水平卻不高。蔡文品等［7］指出，某些因素導致肝星狀細胞活化及肝臟細胞外基質合成增加和降解減少從而引起細胞外基質過度沉積是肝纖維化的關鍵步驟。可見，HBV的持續復制可能只是肝臟炎癥、損傷、纖維化的始動因子，與纖維化進程無明顯相關性。

HBV所致的肝臟炎癥壞死及其所致的肝纖維化是疾病進展的主要病理學基礎［8］。慢性乙型肝炎治療的最終目的是控制HBV的復制，誘導HBeAg血清轉換，使肝功恢復正常，改善肝組織學，緩解癥狀和體征，防止向慢性化發展［9］。隨著慢性乙型肝炎聯合治療臨床證據的不斷增加，聯合治療由抗病毒藥物間的聯合逐步擴展到抗病毒藥物與抗纖維化藥，抗病毒藥物與免疫調節藥物間的聯合。有研究表明，經IFN－或核苷（酸）類似物抗病毒治療后，從肝組織病理學可見纖維化甚至肝硬化有所減輕。因此，抗病毒治療是抗纖維化治療的基礎［10］。

通過臨床治療追蹤發現，對于滿足抗病毒治療且超聲提示肝組織受損的早期乙型肝炎患者，給予一定療程的抗病毒聯合抗纖維化藥物后，定期檢測HbsAg定量、ALT、HBV－DNA、肝纖維化指標均有明顯降低，超聲也顯示肝組織稍有改善。可見，有效控制乙型肝炎患者HBV－DNA病毒載量可能是控制肝纖維化進展的重要因素［11］，但在使用抗病毒藥物抑制HBV復制改善患者肝功能的同時，如何盡早發現肝纖維化并及時合理地選擇抗纖維化治療，將肝纖維化在早期逆轉從而阻斷肝硬化的形成，是保護肝臟功能，改善乙型肝炎患者的生活質量及預后的重要手段。因此，血清HBV－DNA與肝纖維化指標相關性分析提示慢性乙型肝炎患者在抗病毒治療的同時也應加強抗纖維化的治療，對早期肝纖維化患者顯得尤為重要。

［1］ 曾小輝，沙衛紅，李瑜元，等.血清肝纖維化指標對慢性肝病的臨床價值［J］.中國臨床實用醫學，2010，4（2）：87－88.

［2］張泓.乙型肝炎血清標志物模式及HBV－DNA與肝纖維化指標的關系［J］.中國民康醫學，2009，21（16）：1916.

［3］ 中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會，肝病學分會.病毒性肝炎防治方案［J］.中華內科雜志，2001，40（1）：62－68.

［4］ 陳洪濤，賀春民，趙翠林，等.血清肝纖維化指標在慢性肝病中的應用研究［J］.河南醫學研究，2003，12（1）：28－29.

［5］ 李文全，曹春曉，楊琦，等.血清肝纖維化指標在慢性肝病中的臨床分析［J］.中國當代醫藥，2009，16（14）：50－51.

［6］楊紹基，任紅.病毒性肝炎的發病機制與病理解剖［M］.7版.北京：人民衛生出版社，2007：30－31.

［7］蔡文品，趙春，吳惠潔，等.慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平與肝纖維化指標的相關性［J］.實用醫學雜志，2009，25（1）：72－73.

［8］甘平，彭芳.乙型肝炎治療研究進展［J］.醫學綜述，2010，16（5）：720－721.

［9］ 中華醫學會肝病學分會，中華醫學會感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南2010年更新版［J］.中華實驗和臨床感染病雜志：電子版，2011，5（1）：79－100.

［10］慢性乙型肝炎聯合治療專家委員會.慢性乙型肝炎聯合治療專家共識［J］.中國肝臟病雜志：電子版，2012，4（1）：39－46.

［11］王遠馳，黃金偉.慢性乙型肝炎患者血清HBV－DNA病毒載量與血清肝纖維化指標變化［J］.放射免疫學雜志，2009，22（3）：222－224.

Analysis of the relationship between serum HBV－DNA And hepatic fibrosis

Hu Kai，Deng Wen
（Department of Clinical Laboratory，Jingdezhen Second People｀s Hospital，Jingdezhen，Jiangxi 333000，china）

ObjectiveTo analyze the relationship between serum HBV－DNA and hepatic fibrosis in patients with hepatitis B.MethodsSerum HBV－DNA load and hepatic fibrosis hyaluronic acid（HA），Ⅲprocollagen N terminal peptide（PⅢNP），laminin（LN），Ⅳcollagen（Ⅳ－C）of 154cases were detected by real－time fluorescence quantitative PCR and chemiluminescence method.Statistical analysis of the correlation between HBV－DNA load and hepatic fibrosis indicator was performed.ResultsThe data of HBV－DNA load after taking lg value was 5.49±1.39；The serum concentration of hepatic fibrosis HA was（166.95±148.20）ng/mL，PⅢNP was（12.14±7.37）ng/mL，Ⅳ－C was（65.29±45.48）ng/mL，LN was（59.52±35.67）ng/mL.The difference between experimental group and control group in hepatic fibrosis was significant（P＜0.05）.Serum HBV－DNA only correlated with LN（r＝0.284，P＝0.015）.ConclusionThere is no significant correlation between serum HBV－DNA and hepatic fibrosis in hepatitis B patients.Anti－fibrosis treatment should also be strengthened for hepatitis B patients in the course of antiviral treatment.

hepatitis B； HBV－DNA； hepatic fibrosis； relationship

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.03.017

A

1673－4130（2015）03－0326－03

2014－11－08）

胡凱，男，副主任技師，主要從事臨床免疫學與檢驗的研究。