BDNF rs6265和COMT rs4680與廣西壯族散發性帕金森病的相關性研究*

胡才友 黃東挺 周博峰 黃春麗 余天智 唐鳳川 葛 琳 潘尚領 彭均華

廣西壯族自治區江濱醫院(南寧530021) 梁慶華 龐國防 呂澤平△

BDNF rs6265和COMT rs4680與廣西壯族散發性帕金森病的相關性研究*

胡才友 黃東挺 周博峰 黃春麗 余天智 唐鳳川 葛 琳▲潘尚領▲彭均華▲

廣西壯族自治區江濱醫院(南寧530021) 梁慶華 龐國防 呂澤平△

目的：探討腦源性神經營養因子(BDNF) rs6265和兒茶酚胺氧位甲基轉移酶(COMT )rs4680的多態性與廣西壯族散發性帕金森病(PD)的相關性。方法：使用PCR-RFLP法對112例壯族散發性PD患者的rs6265和rs4680位點進行基因分型，并與156例健康壯族老年人比較，分析這兩個多態與PD的相關性。結果：除PD早發亞組rs6265基因型GG的頻率高于同年齡段對照組(P<0.05)，兩組間的等位基因及基因型頻率均無統計學差異(P>0.05)。兩位點A等位基因罹患PD的風險與正常人群無異，OR分別為1.212(P= 0.572)和0.985(P= 0.427)。結論：rs6265和rs4680與廣西壯族散發性PD的遺傳易感缺乏關聯性。

帕金森綜合征( PD)是一種復雜的中樞神經退行性疾病，遺傳因素可能在其發病中起重要作用。因此，對PD易感位點的篩查是其研究熱點之一。腦源性神經營養因子(BDNF)基因位于11p13，第196位核酸的G > A單核苷酸替換會導致其第66位纈氨酸(Val)變為蛋氨酸(Met)，即Val66Met(dbSNP: rs6265)。此多態可改變神經元BDNF的分泌及其在細胞內的定位，與PD關系密切[1]。兒茶酚胺氧位甲基轉移酶(COMT)基因位于22q11，可催化DA的降解。DA的失衡導致前額葉皮質執行能力缺陷及認知障礙。COMT基因的472G>A(dbSNP: rs4680)，使158位的氨基酸Val變成Met，酶活性降低約40%。理論上Val攜帶者可較快地降解腦內源性DA，認知能力相對差，而Met攜帶者認知則較好。已證實Val與白種人PD發病密切相關[2]。rs6265和rs4680與PD的關聯研究已在白人及主要東亞群體中進行，但目前尚未得到一致性的結論[1～4]。本研究擬了解這兩個多態與壯族PD的關聯。

對象與方法

1 研究對象 ①PD組：為2011年5月至2013年12月我院收治的壯族散發PD患者，無家族史，共112例(男59例，女53例)，年齡64.29 ± 12.93，以50歲為界分為早發及晚發亞組。②對照組：健康壯族中老年人，156例(男84例，女72例)，年齡62.85 ± 11.62歲。研究對象知情并同意。

2 研究方法

2.1 標本采集： 空腹采靜脈血8ml，其中3ml以ACD抗凝血用于DNA提取，余5ml用于提取血清及血脂測定。

2.2 DNA提取：采用經典的酚-氯仿法。

2.3 血脂測定：總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)采用酶法，高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)采用酶聯免疫一步法。

2.4 SNP基因分型：rs4680采用PCR-RFLP方法，PCR引物、分型方法及結果判讀見文獻[2]。rs6265采用ARMS-PCR方法。詳見文獻[5]。

3 統計學方法 采用SPSS 13.0軟件。基因頻率用直接計數法計算。兩組計量資料的組間比較采用t檢驗，兩組以上比較采用方差分析。分類資料組間比較采用卡方檢驗。

結 果

1 研究對象的基本特征 PD組和對照組在性別及年齡構成方面無明顯差異(P>0.05)。PD組飲酒者的比例、BMI、收縮壓、TC、TG、及LDL均明顯高于對照組(P均< 0.05)，而吸煙者的比例小于對照組(P<0.05)。

2 基因分型結果 2個SNP的等位基因及基因型頻率分布見附表。校正混雜因素后，除了PD早發亞組rs6265基因型GG的頻率高于同年齡段對照組，兩組間(包括總體、早發、晚發亞組)的等位基因及基因型頻率均無統計學差異。關聯分析顯示，兩位點A等位基因攜帶者罹患PD的風險與正常人群無異，OR分別為1.212(95%CI: 0.845-1.346，P= 0.572)和0.985(95%CI: 0.776-1.231，P= 0.427)。

附表 廣西壯族散發性PD rs6265

注：與對照組相應亞組的相同基因型或等位基因比較，*P<0.05

討 論

BDNF主要參與認知過程。影像學顯示，正常美國白人中Met攜帶者海馬的體積比非Met攜帶者小11%，伴記憶功能下降[1,4]。Guerini等[3]發現rs6265 AA純合子在意大利PD患者中的頻率明顯高于一般人群，并伴有認知障礙。但本研究沒發現rs6265在壯族PD患者和對照組之間的差異及其與PD的相關性。

COMT Val可較快地降解前額葉內源性DA，執行能力及認知能力就相對差，而進化而來的Met個體的認知能力則好得多。使用COMT抑制劑，可以增強工作記憶，進一步支持了其在認知中的重要作用[2]。另外，該多態目前僅出現于人類，可以解釋為何人類具有其他生物無以倫比的認知能力。AD、PD等患者攜帶Val的頻率比自然人群高，而認知良好的老年人則攜帶Met比較多。然而，相反的結果認為低活性的Met等位基因增加了PD的風險。而在最近的一項Meta分析中，作者既沒發現rs4680是PD的高危因素，也與PD的各臨床表型無關[2,6]。本研究結果沒發現rs4680與壯族PD的相關性，進一步說明該位點對PD的影響輕微。

綜合上述，盡管有數據表明BDNF rs6265 和COMT rs4680對個體的認知有著深刻的影響，而且PD的發生可能存在一定的遺傳背景，但目前尚缺乏強有力的依據闡明這兩個多態位點與PD之間的關聯性。

[1] Egan MF, Kojima M, Callicott J,etal. The BDNF val66met polymorphism affects activity-dependent secretion of BDNF and human memory and hippocampal function [J]. Cell, 2003, 112(2), 257-269.

[2] Chen J, Lipska BK, Halim N,etal. Functional analysis of genetic variation in catechol-O-methyltransferase (COMT): effects on mRNA, protein, and enzyme activity in postmortem human brain [J]. Am J Hum Genet, 2004, 75(5): 807-821.

[3] Guerini F, Beghi E, Riboldazzi G,etal. BDNF Val66Met polymorphism is associated with cognitive impairment in Italian patients with Parkinson’s disease [J]. Eur J Neurol, 2009, 16 (11):1240-1245.

[4] Lee YH, Song GG. BDNF 196 G/A and 270 C/T polymorphisms and susceptibility to Parkinson's disease: a meta-analysis [J]. J Mot Behav, 2014, 46(1):59-66.

[5] 梁慶華，龐國防，韋 勇，等. BDNF Val66Met多態性與長壽群體代謝綜合征危險因素的相關性研究[J].臨床檢驗雜志，2014，32(10)：736-740.

[6] Jiménez-Jiménez FJ, Alonso-Navarro H, García-Martín E,etal. COMT gene and risk for Parkinson's disease: a systematic review and meta-analysis[J]. Pharmacogenet Genomics, 2014, 24(7):331-339.

(收稿：2014-12-20)

Association study between rs6265 and rs4680 on sporadic Parkinson’s disease in Zhuang population

Liang QinghuaPang Gufang Lv Zhepinget al

Department of Neurology, Jiangbin Hospital (Nanning 530021)

Objectives: To investigate the correlation between BDNF rs6265 and COMT rs4680 on sporadic Parkinson’s disease (PD) in Zhuangs. Methods: PCR-RFLP was employed to genotype rs6265 and rs4680 for 112 sporadic PD patients and 156 controls. Results: No difference on allelic and genotypic frequencies was found between the two groups (allP>0.05) under any genetic models except that the GG genotype of rs6265 was higher in the early-onset PD subgroup as compared to controls (P<0.05). Similar PD risk for A and non-A allele carriers was found on both SNP (rs6265: OR = 1.212,P= 0.572; rs4680: OR = 0.985,P= 0.427). Conclusions: No association between rs6265 and rs4680 and the susceptibility of sporadic PD in Zhuangs.

Parkinson disease Brain-derived neurotrophic factor @COMT

*國家自然科學基金項目(31160209)

廣西自然科學基金項目(2011GXNSFA018278)

帕金森病 腦源性神經營養因子 @兒茶酚胺氧位甲基轉移酶

R742.5

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.04.015

△通訊作者

▲廣西醫科大學病理生理學教研室