早發2型糖尿病和糖尿病前期患者Pax6基因突變/變異的臨床特點*

韓仰東

西安市第一醫院老年科內分泌病區(西安 710002)

早發2型糖尿病和糖尿病前期患者Pax6基因突變/變異的臨床特點*

韓仰東

西安市第一醫院老年科內分泌病區(西安 710002)

目的：探討早發2型糖尿病和糖尿病前期Pax6基因突變/變異的特點。方法：選早發2型糖尿病(A組)、糖尿病前期(B組)和非糖尿病(對照組)共260例患者，篩查Pax6基因突變/變異，分析臨床特點。結果：A組和B組各檢出Pax6基因外顯子6的Arg67Arg(A-G)/7的Thr166Thr(T-C)突變。結論：Pax6基因突變/變異可引發和推進早發2型糖尿病和糖尿病前期的發展。

據相關研究結果顯示，早發2型糖尿病或糖尿病前期患者中可能存在Pax6基因的突變/變異，從而推進糖尿病的發展[1]。本研究選105例早期2型糖尿病、35例糖尿病前期以及120例非糖尿病，篩查Pax6基因外顯子，分析Pax6基因突變的臨床表型及可能引發早發2型糖尿病和糖尿病前期的致病機制。

資料與方法

1 一般資料 選我院2011年2月至2012年2月收治的105例早發2型糖尿病患者(A組)和35例糖尿病前期患者(B組)，均為常染色體顯性遺傳，谷氨酸脫羧酶抗體(GAD抗體)和胰島素自身抗體(IA2抗體)均呈陰性，發病年齡均低于40歲；120例非糖尿病患者(對照組)，無家族遺傳病，年齡高于50歲。所有患者均知情同意參與本次研究，兩組一般資料比較，見表1。

2 方 法

2.1 收集資料:收集3組患者的臨床資料和各項臨床指標，包括性別、年齡、發病年齡、發病病程、體質量指數、吸煙、收縮壓、舒張壓、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血清三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)、空腹胰島素(FINS)、空腹C肽(FCP)、餐后2h胰島素(2hINS)、餐后2hC肽(2hCP)。

表1 3組患者臨床資料對比分析

2.2 基因檢測:以PCR產物直接測序法篩查A組、B組與對照組患者Pax6基因突變/變異，抽取2ml外周靜脈血，利用苯酚/氯仿法抽提基因組DNA，選取Pax6基因中14個外顯子和外顯子-內含子拼接區基因片段，用PCR法擴增合成PCR反應引物，反應物體積為20μL[2]。分別在95℃、68℃、72℃下對目的片段依次進行PCR擴增，每次時間為30s，共循環30次[3]。使用12%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離處理擴增后PCR產物，并用溴乙錠染色，觀察結果。純化回收處理PCR產物，同時測序和判斷所有個體基因型。

3 統計學方法 本次所有研究資料均采用SPSS18.0統計學軟件處理，計量資料采用均數±標準差表示，計數資料采用χ2檢驗，組間對比采用t檢驗，P<0.05為差異具有顯著性，具有統計學意義。

結 果

A組可見Pax6基因外顯子6的Arg67Arg(A-G)突變，突變型等位基因G的頻率為1.5%，野生型A頻率為98.5%，其中突變型3例(AG基因型)，野生型102例(AA基因型)；AG基因型患者的2hINS低于AA基因型，差異比較有統計學意義(P<0.05)； B組可見Pax6基因外顯子7的Thr166Thr(T-C)突變，突變型等位基因C的頻率為4.3%，野生型等位基因T的頻率為95.7%，其中突變型3例(TC基因型)，野生型32例(TT基因型)，TC基因型患者的2hCP和2hINS低于TT基因型，差異有統計學意義(P<0.05)，對照組中未觀察到以上2種基因突變,如表2所示。

表2 A組與B組內突變位點基因型分組

討 論

人類11號染色體短臂中含有Pax6基因，該基因包含外顯子(14個)和內含子(13個)[4]。Pax6轉錄因子包含同源結構域和配對結構域等2個DNA結合區域[5]。根據相關研究報道，Pax6基因在胰島β細胞分化與成熟中的作用非常重要，除此之外，其在α細胞的分化和成熟中會調控髙血糖素的轉錄，起到一定的調節作用[6]。本次研究結果發現，A組患者中可觀察到Pax6基因外顯子6的Arg67Arg(A-G)突變，AG基因型患者的2hINS低于AA基因型；B組患者可觀察到Pax6基因外顯子7的Thr166Thr(T-C)突變，并且TC基因型患者的2hCP和2hINS低于TT基因型，這說明突變基因會抑制胰島素基因轉錄與表達，從而降低胰島素的分泌，造成糖代謝發生障礙，從而使糖尿病前期患者和早發2型糖尿病患者發生糖調節受損。而研究中兩組突變基因發生位置均與氨基酸相關，這提示了Pax6調控糖代謝相關的靶基因兩種突變基因起到抑制該基因的轉錄與表達。

[1] 沈 潔,尹立雪,陸 景,等.超聲血流向量成像評價糖尿病前期左心室舒張期流場狀態[J].中華超聲影像學雜志,2012,21(2):93-98.

[2] 莊前玲,郭桂芳,李湘萍,等.糖尿病前期的臨床研究進展[J].中華護理雜志,2011,46(8):832-834.

[3] 趙 娜,曹永吉,師愛香,等.2型糖尿病周圍神經病變的早期診斷[J].臨床合理用藥雜志,2013,6(22):18-20.

[4] 魏洪軍,程 飛.2型糖尿病患者慢性并發癥臨床特點及相關因素分析[J].河北醫藥,2011,33(18):2742-2743.

[5] 王曉春,葛慶峰,王蔓莉,等.2型糖尿病合并高血壓前期患者頸動脈內膜中層厚度的變化[J].中國綜合臨床,2011,27(8):815-816.

[6] 曾龍驛,鄒麗媛.從多重危險因素管理看阿司匹林在糖尿病患者心血管一級預防中的作用[J].中華糖尿病雜志,2013,5(1):55-57.

(收稿：2014-09-09)

*西安市衛生局科研項目(J2011003)

糖尿病，非胰島素依賴型 @Pax6基因 對比研究

R587.1

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.04.018