Survivin 、MMP-2及 P16蛋白在卵巢上皮癌中的表達及其臨床意義

劉嗣超 鄔晉芳

西安交通大學(西安 710061)

·臨床病理·

Survivin 、MMP-2及 P16蛋白在卵巢上皮癌中的表達及其臨床意義

劉嗣超△鄔晉芳

西安交通大學(西安 710061)

目的:探討存活素(Survivin)、基質金屬蛋白酶(MMP-2)及P16蛋白在人卵巢癌組織中的表達及臨床意義。方法：選擇85例卵巢腫瘤上皮性腫瘤(良性20例、惡性上皮癌65例)及20例正常卵巢組織石蠟標本，運用免疫組化法檢測其中Survivin 、MMP-2及 P16蛋白的表達情況，分析三指標間及與卵巢上皮癌病理特征的關系。結果：在卵巢癌、良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織中urvivin的陽性表達率分別為75.4%、20%、5%，MMP-2陽性率分別為72.3%、15%、10%P16陽性率分別為33.8%、60%、80%。Survivin、MMP-2與臨床分期、組織分級有顯著正相關性(P<0.05)，P16與臨床分期、組織分級呈顯著負相關性(P<0.05)。結論：Survivin、MMP-2、與P16蛋白在卵巢癌中異常表達在腫瘤的發生發展起重要作用。

卵巢癌占女性生殖系統腫瘤第三位，其中卵巢上皮性惡性腫瘤占85%～90%。由于其原發部位在盆腔，缺乏早期癥狀，發現時多為晚期。直接蔓延、腹腔種植及淋巴道轉移是上皮性卵巢癌轉移的主要途徑，廣泛的盆腹腔種植轉移使手術難以切除干凈。卵巢上皮性惡性腫瘤早期診斷率低，確診時有60%～70%患者己屬于晚期。因此，早期診斷及篩查在卵巢癌中尤為重要。

資料與方法

1 一般資料 選取西北婦女兒童醫院(陜西省婦幼保健院)病理科存檔2011年5月至2014年4月收治65例卵巢上皮惡性腫瘤患者手術切除標本，術前均未行放療、化療，年齡30～70歲，平均53歲，50歲前發病24例，50歲后(包括50歲)發病25例。按照國際婦產科聯盟(FIGO)2000年手術和病理分期標準進行手術分期和病理分級,漿液性癌30例(61.2%)，黏液性癌19例(38.8%),I～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期31例；組織學分型采用1988年國際婦產科病理學會組織學分型標準進行。高中分化癌(G1,-G2級)21例，低分化癌(G3級)28例。術后證實有淋巴結轉移者27例，無淋巴結轉移者22例。選取同期存檔卵巢良性上皮性腫瘤20例，年齡24～57歲，平均38．5歲。卵巢漿液性囊腺瘤11例，粘液性囊腺瘤9例。正常卵巢組織20例，年齡42～68歲，平均48．4歲。三組一般資料無統計學差異(P>0.05)。

2 實驗方法 105例石蠟標本均為我院病理科存檔，10%福爾馬林固定，常規石蠟包埋，3μm連續切片。采用通用性兩步免疫組化染色方法，嚴格按照說明書實驗步驟進行操作。石蠟切片脫蠟至水，3%雙氧水室溫10滅活內源性酶，拘椽酸鹽緩沖液微波抗原修復，正常山羊血清封閉20，滴加一抗、二抗，DAB顯色，蘇木素復染，脫水，透明，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察。用PBS代替一抗作為陰性對照。結果判定標準：Survivin、MMP-2采用半定量的方法，在光鏡下進行分析，排除非特異性染色的前提下，胞漿或胞膜出現黃色，棕黃色顆粒或棕褐色顆粒為陽性染色。16陽性染色為胞核或胞核、胞漿均有棕黃色顆粒沉著。

3 統計學方法 采用SPSS15.0對三指標間及臨床病理學特征間差異卡方檢驗，三指標間與及病理學特征的關系采用Sperman相關分析法，以P<0.05為差別有顯著性意義。

結 果

1 Survivin、MMP-2、與P16蛋白表達 在卵巢癌、良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織中Survivin的陽性率分別為75.4%、20%、5%,MMP-2陽性率為72.3%、15%、10%P16陽性率分別為33.8%、60%、80%。Survivin 與MMP-2在卵巢癌的陽性表達率明顯高于良性腫瘤與正常組織，且良性腫瘤高于正常組織的表達水平，三者之間的陽性表達率具有統計學(P<0.05)。與之相反，P16在正常組織的陽性表達率高于其他組織，差異具有統計學意義(P<0.05)。

2 Survivin、MMP-2、與P16蛋白表達與卵巢癌臨床病理學特征的關系 Survivin、MMP-2在Ⅲ-Ⅳ期陽性表達率高于Ⅰ-Ⅱ期，G1～G2高于G3，有淋巴結轉移高于無淋巴結轉移。臨床分期、組織分級有顯著正相關性(P<0.05)，相反，P16與臨床分期、組織分級呈顯著負相關性(P<0.05)，見附表。

附表 Survivin、MMP-2、與P16蛋白表達與卵巢癌臨床病理學特征的關系

注：*P<0.05

討 論

卵巢癌病死率居婦科惡性腫瘤之首，且近年來發病率呈上升趨勢，隨著分子生物學技術的發展，發現了許多與卵巢癌相關的癌基因、抑癌基因，在其發生、發展過程中起到重要的作用，并且早期診斷，治療方面的應用亦逐步受到重視。

1 Survivin基因及其在卵巢上皮癌中的表達與意義 Survivin是迄今發現最強的凋亡抑制因子Sui等[1]用免疫組化和Western印跡方法研究了103例卵巢上皮細胞腫瘤中Survivin的表達,并探討了Survivin表達與細胞增殖和臨床預后的關系結果顯示:Survivin表達的陽性率在惡性和交界性腫瘤中分別為51.1%和47.8%顯著高于在良性腫瘤中的表達(21.2%),且其表達率的高低與腫瘤的大小密切相關。通過PCNA指數測定提示Survivin的表達與腫瘤細胞的增殖活性呈正相關。本研究中Survivin陽性率在正常卵巢組織及卵巢良性腫瘤中的表達與惡性腫瘤組織中的表達比較有統計學意義。Survivin在卵巢上皮癌組織中所呈現出的高表達說明存活素參與抗惡性腫瘤細胞的凋亡，與卵巢上皮癌的發生、發展之間存在著密切關系。在晚期上皮癌中的表達明顯高于早期，有淋巴轉移的組織中的表達也明顯高于無淋巴轉移者，在G3期陽性表達率高于G1～G2期，表明Survivin表達在卵巢上皮癌的惡性進展過程中發揮重要作用，與癌腫增殖、浸潤及病程演進關系密切同時預示上皮癌的不良預后。有實驗表明，在術后殘余腫瘤直徑大于和小于1cm的卵巢上皮性癌組織的Survivin陽性表達率進行比較前者為84.6%，明顯高于后者的64.1%。日本香川醫科大學生理學研究室研究也發現了腫瘤殘余的癌腫組織大小和Survivin的過度表達有顯著的關聯性[2]。這些提示Survivin對卵巢上皮癌預后的評估存在價值。而另一方面李媛[3]等發現：Survivin蛋白與卵巢上皮性癌的組織分級及組織學類型、臨床分期和是否存在淋巴結轉移等均無相關性。Survivin細胞周期進行、腫瘤血管生成中有重要作用，與腫瘤的放射性治療及化學藥物關系密切。它在多種腫瘤組織中呈現高表達，而在正常組織及癌腫旁組織中無或低表達，是進行基因靶向治療的理想靶點

2 MMP-2蛋白在卵巢上皮癌中表達及意義 腫瘤的侵襲與轉移必須要求兩個條件：腫瘤血管生成及破壞細胞外基質(Xtra-cellular matrix，ECM)。在眾多影響腫瘤侵襲和轉移的因素中，ECM是阻止腫瘤轉移的第一道屏障。而經研究證實MMP-2功能與其降解ECM有關，同時還參與了新生血管生成過程，在正常組織中，內皮細胞表達呈低水平或陰性。但在病理生理狀態下，新生組織內皮細胞的MMP-2表達則明顯增加。Liotta[4]提出的腫瘤細胞浸潤轉移的三步驟假說仍被廣為接受。本研究中MMP-2蛋白在卵巢惡性上皮腫瘤中的表達明顯高于良性腫瘤組織及正常卵巢組織，在晚期上皮癌中的表達明顯高于早期，有淋巴轉移的組織中的表達也明顯高于無淋巴轉移者，在G3期陽性表達率高于G1～G2期，(上述四項對比均有統計學差異)。說明明膠酶A可能與卵巢上皮癌的發生、發展有關。且提示在卵巢癌的進展、侵襲轉移過程中發揮重要作用，MMP-2的高表達可能成為有無癌細胞轉移的一個參考標志。

3 P16在卵巢上皮癌中的表達與意義 本研究中P16蛋白在卵巢上皮癌腫的表達明顯低于良性卵巢上皮腫瘤及正常卵巢組織，說明P16蛋白在上皮癌中的低表達使P16不能發揮其在細胞周期中的負調節作用，導致細胞異常增殖，形成腫瘤。P16蛋白在晚期上皮癌中的表達低于早期；在有淋巴轉移的組織中表達低于無淋巴轉移的組織；在G3期表達率低于G1～G2期中的表達，三項均有統計學差異。提示P16對卵巢上皮腫瘤進展和判斷預后方面具有一定的價值。Kommoss等[5]采用免疫組化試驗對FIGO中300例IIb-Ⅳ期卵巢癌患者進行P16蛋白表達的檢測發現，94%(283/300)患者P16呈陽性表達，6%(17/300)呈陰性表達，在低表達、中等表達和高表達的病例中，呈中等表達者存活率較高。Surowiak等[6]的研究也證實P16的蛋白低表達是卵巢癌不利的預后指數，同時證實P16低表達與卵巢癌患者產生化療耐藥相關與本研究結果類似。

4 Survivin、MMP-2、P16蛋白在卵巢癌中表達的相關性 目前，癌基因過表達與抑癌基因失活被越來越多的學者所關注，癌變的多階段多基因共同作用促使腫瘤的發生、發展。存活素是現階段發現的唯一具有抑制凋亡并促血管生成作用的細胞因子，對于腫瘤血管形成具有刺激其生長，并且保護腫瘤血管內皮細胞減少化療藥物誘導凋亡的作用[7～9]。MMP-2也為腫瘤的生長和血管發生提供適宜的環境，而P16通過形成存活素/細胞周期素依賴激酶4復合物, 直接或間接地激活細胞周期素依賴激酶2/細胞周期蛋白E復合物, 導致RB蛋白磷酸化, 以啟動細胞有絲分裂，表現為抑癌基因作用[10]。本組研究中Survivin 、MMP-2在卵巢上皮癌腫的表達呈正相關，提示二者可能共同作用于腫瘤微環境并相互協助，P16與Survivin蛋白在卵巢上皮癌中表達呈現負相關，我們推測在卵巢上皮癌的發展發生過程中Survivin的過度表達與P16的缺失聯合使腫瘤細胞獲得更大的生長優勢形成是促進腫瘤發生發展的基礎。

綜上，本研究表明P16在卵巢上皮癌中表達下調，Survivin和MMP-2在卵巢上皮癌組織中表達上調，與正常卵巢組織以及良性卵巢上皮腫瘤有顯著性差異。且P16在卵巢上皮癌中表達下調和Survivin、VMMP-2表達上調與卵巢上皮癌臨床病理特征有一定的相關性。這表明Survivin、MMP-2與P16在卵巢癌的發生、發展過程中起到了重要的作用，可能成為疾病轉歸及判斷預后的指標，也為卵巢癌的篩查及基因靶向治療提供了分子生物學基礎。

[1] Sui L, Dong Y, Ohno M,etal. Survivin expression and its correlation with cell proliferation and prognosis in epithelial ovarian tumors[J]. Int J Oncol, 2002, 21 (2): 315-320.

[2] Yoshida H, Ishiko O, Sumi T,etal. Survivin, bcl-2 and matrix metalloproteinase-2 enhance progression of clear cell- and serous-type ovarian carcinomas[J]. Int J Oncol, 2001, 19 (3): 537-542.

[3] 李 媛. Survivin在卵巢腫瘤中的表達及其與血管生成的關系2007[J]. 中國婦幼保健, 2007, 22 (9): 1 208-201 210．.

[4] Liotta LA. Tumor invasion and metastases-role of the extracellular matrix: Rhoads Memorial Award lecture[J]. Cancer Res, 1986, 46 (1): 1-7.

[5] Kommoss, Sdu-Bois A, Ridder R. Independent prognostic significance of cell cycle regulator proteins P16(INK4a)and pRb in advancedstage ovarian carcinoma including optimally debulked patients:A translational research subprotocol of a randomised study of the Arheitsgemeinschaft Gynaekologische Onkolugie Ovarian Cancer Study Group[J]. Br J Cancer, 2007, 96 (2): 306-313.

[6] Surowiak P, Materna V, Maciejczyk A,etal. Decreased expression of P16 in ovarian cancers represents an unfavourable prognostic factor[J]. Histol Histopathol, 2008, 23 (5): 531-538.

[7] Cohen C,Lohmann CM, Cotsonis G,etal. Survivin expression in ovarian carcinoma:correlation with apoptotic markets and prognosis[J]. Modern Pathology, 2003, 6 (6): 574-583.

[8] Blanc-Brude OP, Mesri M, Wall NR,etal. Therapeutic targeting of the survivin pathway in cancer: initiation of mitochondrial apoptosis and suppression of tumor-associated angiogenesis[J]. Clin Cancer Res, 2003, 9 (7): 2683-2692.

[9] Suzuki A, Ito T, Kawano H,etal. Survivin initiates procaspase 3/p21 complex formation as a result of interaction with Cdk4 to resist Fas-mediated cell death[J]. Oncogene, 2000, 19 (10): 1346-1353.

[10] 徐 全，張 平，劉 勇. 細胞周期調控因子P16和CDK4在肺癌中的表達[J]. 江西醫學院學報, 2004, 44 (4): 17.

(收稿：2014-10-30)

卵巢腫瘤/病理學 @存活素 基質金屬蛋白酶 免疫組織化學

R737.31

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.04.053

△西北婦女兒童醫院