高良姜素對缺血性腦卒中大鼠腦線粒體代謝相關(guān)酶的影響

黃志英 孫文利 張曉旭 陳 暢 吳傳鴻 高 健 段飛鵬 田朋朋，3 李韶菁 顏天華

(1 中國藥科大學(xué)藥學(xué)院,南京,211198; 2 中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所,北京100700; 3 河北大學(xué)藥學(xué)院,保定,071002;4 澳門大學(xué)中華醫(yī)藥研究院中藥質(zhì)量研究國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,澳門,999078; 5 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,北京,100102)

高良姜素對缺血性腦卒中大鼠腦線粒體代謝相關(guān)酶的影響

黃志英1,2孫文利2,3張曉旭2,3陳 暢2吳傳鴻4高 健2段飛鵬5田朋朋2，3李韶菁2顏天華1

(1 中國藥科大學(xué)藥學(xué)院,南京,211198; 2 中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所,北京100700; 3 河北大學(xué)藥學(xué)院,保定,071002;4 澳門大學(xué)中華醫(yī)藥研究院中藥質(zhì)量研究國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,澳門,999078; 5 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,北京,100102)

目的:觀察高良姜素對缺血性腦卒中大鼠腦線粒體能量代謝相關(guān)ATP酶的影響,探討高良姜素通過干預(yù)線粒體能量代謝障礙發(fā)揮缺血性腦卒中保護(hù)作用的可能機(jī)制。方法:將120只雄性SD大鼠隨機(jī)分成兩大組,即術(shù)前給藥組和術(shù)后給藥組,每大組中又分為假手術(shù)組、模型組、陽性藥銀杏葉提取物EGb761組(mg·kg-1)及高良姜素高、中、低劑量組(100,50,25 mg·kg-1),每組10只。大鼠行中動脈栓塞手術(shù)前15 min或者術(shù)后6 h灌胃給藥或給予等量生理鹽水,于手術(shù)后24 h進(jìn)行神經(jīng)功能學(xué)評分,制備缺血側(cè)腦組織線粒體懸液,并對其Na+-K+ATP酶,Ca2+-ATP酶,Mg2+-ATP酶,Ca2+-Mg2+ATP酶活性進(jìn)行檢測。結(jié)果:高良姜素中劑量和高劑量組,Na+-K+ATP和Ca2+-Mg2+ATP酶活性均有明顯提高(P<0.05),低劑量組酶活性無明顯改變;相比較,Ca2+-ATP酶,Mg2+-ATP酶活性各組之間沒有明顯的差別。結(jié)論:高良姜素能明顯提高缺血性腦卒中大鼠腦線粒體Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶活性,緩解缺血腦細(xì)胞的能量代謝障礙,是其發(fā)揮腦缺血保護(hù)作用的可能機(jī)制之一。

高良姜素;缺血性腦卒中;線粒體;能量代謝;Na+-K+ATP酶;Ca2+-Mg2+ATP酶

腦卒中是一種發(fā)病機(jī)制復(fù)雜且具有嚴(yán)重危害性的腦血管疾病[1],其中以缺血性腦卒中為主,諸多實(shí)驗(yàn)表明,能量的耗竭是引起卒中腦組織損傷最初和最直接的因素。線粒體作為細(xì)胞進(jìn)行生物氧化和能量轉(zhuǎn)換的主要場所,參與了缺血后腦細(xì)胞的能量耗竭,同時(shí)也是啟動細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素,在腦卒中的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮著極其重要的作用。腦缺血可通過氧自由基等多種途徑造成線粒體結(jié)構(gòu)和功能異常,進(jìn)而導(dǎo)致能量衰竭,最終誘發(fā)細(xì)胞凋亡或壞死,因此,線粒體是腦缺血的重要靶細(xì)胞器,其損傷的形成是腦缺血損傷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

高良姜為姜科植物高良姜(AlpiniaofficinarumHance)的干燥根莖,性辛熱,歸脾胃經(jīng),具有溫胃止嘔、散寒止痛之功,常用于脘腹冷痛、胃寒嘔吐、噯氣吞酸等證[2]。根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論,瘀血阻滯、毒損腦絡(luò)是缺血性腦卒中的關(guān)鍵病機(jī),而高良姜辛熱純陽,芳香溫中,血得溫則行,得寒則凝,故高良姜可通過其溫?zé)嶙呱⒌淖饔檬箽庋靡酝ㄐ衃3],理論上對缺血性腦卒中可能有一定的治療作用。

高良姜素是從高良姜干燥根莖中提取的天然黃酮類化合物,結(jié)構(gòu)式見圖1,是高良姜的主要成分之一,作為一種抗氧化物質(zhì)被廣泛使用,本實(shí)驗(yàn)室前期研究證實(shí)高良姜素對缺血性腦卒中大鼠具有明顯的保護(hù)作用,且該保護(hù)作用與線粒體有關(guān),但其具體作用機(jī)制尚未明確[4]。通過查閱相關(guān)文獻(xiàn),發(fā)現(xiàn)線粒體代謝相關(guān)ATP酶在線粒體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的維持中起著重要作用[5],因此,本文以線粒體代謝相關(guān)ATP酶為主要研究對象,探索高良姜素對缺血后腦線粒體中Na+-K+ATP酶,Ca2+-ATP酶,Mg2+-ATP酶,Ca2+-Mg2+ATP酶活性的影響,探討高良姜素抗腦缺血的線粒體保護(hù)可能機(jī)制。

圖1 高良姜素結(jié)構(gòu)式(C15H10O5,MW:270.2369)

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康Sprague-Dawley(SD)大鼠(SPF/VAF級),體重250～270 g,雄性,120只,購自中國食品藥品檢定研究所。合格證號：SCXK(京)2009-0017。

1.1.2 藥品及配制 高良姜素(純度98%)購自南京澤朗生物科技有限公司;陽性對照藥銀杏葉提取物EGb761購自德國威瑪舒培博士藥廠;蔗糖購自北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司;Na2EDTA,TrisBase購自美國Amresco公司;BCA蛋白定量試劑盒購自北京普利萊生物技術(shù)有限公司;水合氯醛購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;ATP酶試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

高良姜素溶解于含5%吐溫80的無菌生理鹽水中;線粒體分離保存遞質(zhì)由蔗糖(250 mM)、Na2EDTA(0.5 mM)、Tris-HCl(10 mM)、BSA(0.1%)配制而成,pH=7.1,4 ℃儲存。

1.1.3 儀器 pH計(jì):上海精密儀器雷磁儀器廠;臺式高速冷凍離心機(jī):長沙湘儀儀器有限公司;迷你離心機(jī):海門市其林貝爾儀器制造公司;M5多功能酶標(biāo)儀(SpectraMax M5):美谷分子儀器公司;SE系列電子天平:上海奧豪斯儀器有限公司;普通稱重天平:上海市奧豪斯儀器有限公司;組織勻漿器:涿州市琦瑞玻璃制品廠;磁力加熱攪拌器:常州國華電器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 模型制作 參照Longa EZ等[6]建立的大鼠大腦中動脈內(nèi)線栓法阻斷方法,作適當(dāng)?shù)母倪M(jìn),大鼠大腦中動脈栓塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)建立大鼠局灶性腦缺血模型。于術(shù)后24 h進(jìn)行神經(jīng)癥狀學(xué)評分,并斷頭取腦,進(jìn)行體外線粒體懸液的制備。10%的水合氯醛400 mg/kg,腹腔麻醉,將其仰臥固定,75%乙醇消毒頸部皮膚,于正中切口,分離并暴露右側(cè)頸總動脈,并在近心端夾閉頸總動脈,繼續(xù)分離出頸外和頸內(nèi)動脈,結(jié)扎頸外動脈,在頸總動脈據(jù)分叉處1.5 cm處剪一個(gè)小口,用制備好的5 cm魚線沿頸總動脈插入頸內(nèi)動脈。當(dāng)進(jìn)入頸總動脈分叉處以上的魚線長度為2 cm時(shí),停止并結(jié)扎開口上下的頸總動脈。其中假手術(shù)組只進(jìn)行術(shù)前麻醉以及血管分離,不進(jìn)行線栓。整個(gè)手術(shù)過程室溫保持在(22±2)℃。

1.2.2 分組與給藥 將120只雄性SD大鼠隨機(jī)分成兩大組,術(shù)前15 min給藥組和術(shù)后6 h給藥組,每大組中又分為假手術(shù)組、模型組及高良姜素高、中、低劑量組(100,50,25 mg·kg-1),每組10只。

1.2.3 神經(jīng)功能學(xué)評分 具體方法參照Bederson等[7]的五級評分法(0～4分),分?jǐn)?shù)越高,說明大鼠神經(jīng)功能損傷越嚴(yán)重。

1.2.4 樣品制備 造模后24 h取材,神經(jīng)行為學(xué)評分后,取大鼠缺血側(cè)腦組織制備腦線粒體懸液[8]。為了保持線粒體活性,整個(gè)操作應(yīng)保持低溫,精確切取大鼠腦缺血側(cè),左右腦均進(jìn)行稱重并記錄,剝離缺血側(cè)腦外膜和血管,按每500 mg腦組織10 mL預(yù)冷的分離遞質(zhì)的比例,分2次對腦組織進(jìn)行洗滌。用彎頭眼科剪將缺血側(cè)腦組織剪碎,按5 mL/g組織的用量加入分離遞質(zhì),轉(zhuǎn)入預(yù)冷的勻漿器中,上下均勻勻漿30 s(盡量避免出現(xiàn)氣泡),隨即對勻漿液進(jìn)行離心,按如下過程進(jìn)行:1)600 r/min,離心半徑8.2 cm,4 ℃,3 min;2)900 r/min，離心半徑8.2 cm,4 ℃,5 min,取上清;3)10 000 r/min,離心半徑6.3 cm,4 ℃,8 min;4)棄上清保留沉淀,加入新的分離液,至離心管三分之二處,調(diào)轉(zhuǎn)離心管180度,使線粒體位置位于離心機(jī)內(nèi)側(cè),4 ℃,10 000 r/min,離心半徑6.3 cm,8 min。棄去上清,小心的獲得沉淀,即為粗制的線粒體。取少量保存遞質(zhì)(1 mL/腦線粒體樣品),將線粒體沉淀吹打均勻,操作過程中盡量避免氣泡。制備線粒體后采用Bradford法進(jìn)行蛋白含量檢測,將蛋白統(tǒng)一定量為10 mg·mL-1。

1.2.5 四種線粒體代謝相關(guān)酶的測定 按照試劑盒說明書,采用磷定量化方法,對缺血腦半球的腦線粒體Na+-K+ATP酶,Ca2+-ATP酶,Mg2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶活性進(jìn)行檢測。在含有140 mM NaCl,14mM KCl,5 mM MgCl2,0.5 mM EDTA，3 mM ATP,50 mM Tris buffer(pH 7.5)和0.01 mL組織勻漿液的孵育遞質(zhì)中對總ATP酶活性進(jìn)行分析。37 ℃孵育1 h后,加入0.1 mL 5%十二烷基磺酸鈉(SDS,sodium dodecyl sulfate)終止反應(yīng),檢測分析遞質(zhì)中釋放的無機(jī)磷酸鹽含量。Na+-K+ATP酶活性的計(jì)算方法可認(rèn)為是有無鈉、鉀離子時(shí)ATP酶活性的差別。Ca2+-Mg2+ATP酶活性的計(jì)算方法可認(rèn)為是有無鈣、鎂離子時(shí)ATP酶活性的差別,酶的活性可表述為每毫克蛋白每小時(shí)釋放的無機(jī)磷酸鹽的微摩爾數(shù)(μmol Pi·h-1·mg-1)。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行,數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差反映,采用單因素方差分析進(jìn)行組間差異分析;P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 神經(jīng)功能學(xué)評分 如圖2所示,術(shù)前15 min給藥和術(shù)后6 h給藥,MCAO術(shù)后24 h后的結(jié)果顯示:與假手術(shù)組比較,模型組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義即表明造模成功(P<0.05)。與模型組比較,陽性對照藥銀杏葉提取物EGb761組和高良姜素(50 mg·kg-1、100 mg·kg-1)能降低動物局灶性腦缺血后的神經(jīng)功能學(xué)評分,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。表明高良姜素高、中劑量可改善局灶性腦缺血引起的神經(jīng)行為障礙。

圖2 神經(jīng)功能學(xué)評分

注:與假手術(shù)組相比:##P<0.01，#P<0.05;與模型組相比:**P<0.01,*P<0.05。

2.2 Na+-K+ATP酶活性變化 如表1所示,不論是術(shù)前15 min給藥還是術(shù)后6 h給藥,模型組Na+-K+ATP酶活性都低于假手術(shù)組且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),表明大鼠行MCAO手術(shù)后,線粒體Na+-K+ATP酶活性降低;高良姜素高劑量組線粒體Na+-K+ATP酶活性比模型組高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),高良姜素中劑量組和陽性藥銀杏葉提取物EGb761組Na+-K+ATP酶活性均值也均比模型組高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而高良姜素低劑量組Na+-K+ATP酶活性的改變無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明高良姜素高、中劑量組可明顯改善線粒體Na+-K+ATP酶活性,其中高劑量組對Na+-K+ATP酶活性的改善作用與陽性藥相當(dāng),低劑量組對活性的改變沒有影響。

表1 高良姜素對腦缺血大鼠腦組織線粒體Na+-K+ATP酶的影響

注:與假手術(shù)組相比:##P<0.01，#P<0.05;與模型組相比:**P<0.01,*P<0.05。

2.3 Ca2+-Mg2+ATP酶活性變化 如表2所示,不論是術(shù)前15 min給藥還是術(shù)后6 h給藥,模型組Ca2+-Mg2+ATP酶活性都低于假手術(shù)組(P<0.01),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明大鼠行MCAO手術(shù)后,線粒體Ca2+-Mg2+ATP酶活性降低;在術(shù)前給藥和術(shù)后給藥組中,陽性對照藥銀杏葉提取物EGb761 Ca2+-Mg2+ATP酶活性的提高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);對于術(shù)前15 min給藥組和術(shù)后6 h給藥組,高良姜素高劑量組和中劑量組線粒體Ca2+-Mg2+ATP酶活性均較模型組高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,P<0.05),而低劑量組Ca2+-Mg2+ATP酶活性改變無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明術(shù)前給藥和術(shù)后給藥,高、中劑量組可明顯改善線粒體Ca2+-Mg2+ATP酶活性,低劑量組對活性的改變沒有影響。

表2 高良姜素對腦缺血大鼠腦組織線粒體Ca2+-Mg2+ATP酶的影響

注:與假手術(shù)組相比:##P<0.01，#P<0.05;與模型組相比:**P<0.01,*P<0.05。

2.4 Mg2+ATP酶活性變化 如表3結(jié)果所示,不論是術(shù)前15 min給藥還是術(shù)后6 h給藥組中,假手術(shù)組、模型組和各給藥組之間Mg2+ATP酶活性的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),表明腦缺血過程對腦線粒體Mg2+ATP酶活性無影響,高良姜素對造模大鼠線粒體Mg2+ATP酶活性也無明顯影響。

表3 高良姜素對腦缺血大鼠腦組織線粒體Mg2+ATP酶的影響

注:與假手術(shù)組相比:##P<0.01，#P<0.05;與模型組相比:**P<0.01,*P<0.05。

表4 高良姜素對腦缺血大鼠腦組織線粒體Ca2+ATP酶的影響

注:與假手術(shù)組相比:##P<0.01，#P<0.05;與模型組相比:**P<0.01,*P<0.05。

2.5 Ca2+ATP酶活性變化 如表4所示,不論是術(shù)前15 min給藥還是術(shù)后6 h給藥組中,假手術(shù)組、模型組和各給藥組之間Ca2+ATP酶活性的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),表明腦缺血對腦線粒體Ca2+ATP酶活性無影響,高良姜素對造模大鼠線粒體Ca2+ATP酶活性也無明顯影響。

3 討論

腦是機(jī)體中一種高耗能的器官且沒有儲存糖原的功能,能量的來源均來自外周血供應(yīng),因此能量代謝障礙成為缺血性腦卒中發(fā)生時(shí)腦損傷產(chǎn)生的關(guān)鍵病機(jī)。Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶是機(jī)體內(nèi)廣泛分布的生物膜酶,它們在維持細(xì)胞內(nèi)外離子穩(wěn)態(tài)以及正常能量代謝方面發(fā)揮著重要作用,正常的ATP酶活性和功能為維持腦內(nèi)微環(huán)境所必需[9]。Na+-K+ATP酶在體內(nèi)能夠利用水解ATP產(chǎn)生的能量,實(shí)現(xiàn)Na+、K+的逆向轉(zhuǎn)運(yùn),維持細(xì)胞內(nèi)外Na+、K+濃度梯度、保持細(xì)胞膜電位,為神經(jīng)沖動傳導(dǎo)、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)提供驅(qū)動力。在線粒體中,Na+-K+ATP酶鑲嵌于線粒體內(nèi)膜,在線粒體滲透壓和形態(tài)的維持中起著主要作用[10]。Ca2+ATP酶、Mg2+ATP酶以及Ca2+-Mg2+ATP酶則是維持細(xì)胞內(nèi)鈣鎂平衡的重要轉(zhuǎn)運(yùn)酶,在線粒體中同樣廣泛存在。Ca2+相關(guān)ATP酶活性下降使線粒體鈣泵外排Ca2+的作用減弱,繼而引起線粒體鈣超載、氧化磷酸化障礙以及結(jié)構(gòu)受損,最終導(dǎo)致細(xì)胞壞死[11]。

劉明[12]等人對大鼠行大腦中動脈栓塞手術(shù)造永久性腦缺血模型,并對缺血后不同時(shí)間點(diǎn)的代謝產(chǎn)物、Na+-K+ATP酶和Ca2+-Mg2+ATP酶活性進(jìn)行檢測,證明了腦缺血確實(shí)會導(dǎo)致大鼠腦內(nèi)ATP酶活性降低,能量代謝紊亂。苗明三[13]等在研究大鼠血瘀性腦缺血模型時(shí),發(fā)現(xiàn)姜科植物姜黃提取物姜黃素能顯著提高大鼠腦內(nèi)ATP酶活性,改善腦缺血損傷。姜黃素和本文研究的高良姜素同是姜科植物的主要成分,在查閱相關(guān)文獻(xiàn)后發(fā)現(xiàn)其他姜科植物如草豆蔻、益智仁等都有一定的抗缺血損傷的作用[14-16]。

本文首次針對高良姜素以ATP酶為研究對象探討其抗腦缺血機(jī)制,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組線粒體Na+-K+ATP酶、Ca2+-Mg2+ATP酶活性均明顯較正常組低,表明腦缺血過程確實(shí)會造成線粒體能量代謝障礙;而高良姜素高、中劑量給藥組Na+-K+ATP酶、Ca2+-Mg2+ATP酶活性均較模型對照組顯著上升,提示高良姜素可能通過提高氧化磷酸化效率明顯增加線粒體ATP合成量,保證了膜上ATP酶所需能量供應(yīng),從而改善線粒體酶活性、緩解缺血腦細(xì)胞能量代謝障礙,最終通過保護(hù)線粒體而發(fā)揮抗腦缺血保護(hù)作用。另外,ATP酶是一種巰基酶,而高良姜素具有抗膜脂質(zhì)過氧化作用[17],高良姜素有可能通過減少活性氧自由基等對ATP酶攻擊而發(fā)揮對酶活性的改善作用。通過本研究以期為高良姜素對缺血性腦卒中的治療作用尋找更多依據(jù),為傳統(tǒng)中藥的現(xiàn)代研究提供更多新思路。

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(2014-11-13收稿 責(zé)任編輯：王明)

The Effects of Galangin on Mitochondrial Metabolism-related ATPases in Ischemic Stroke Rats

Huang Zhiying1, 2, Sun Wenli2,3, Zhang Xiaoxu2,3, Chen Chang2,Wu Chuanhong4, Gao Jian2,Duan Feipeng5, Tian Pengpeng2,3, Li Shaojing2,Yan Tianhua1

(1CollegeofPharmacy,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing211198,China; 2ChinaInstituteofChineseMateriaMedica,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China; 3CollegeofPharmacy,HebeiUniversity,Baoding071002,China; 4StateKeyLaboratoryofQualityResearchinChineseMedicine,InstituteofChineseMedicalSciences,UniversityofMacau,Macao; 5CollegeofChineseTraditionalMedicine,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)

Objective:To clarify the effects of galangin on mitochondrial energy metabolism-related ATPases in ischemic stroke rats, and to explore the possible protective mechanisms of ganlangin on ischemic stroke through intervening the mitochondrial energy metabolism disorder. Methods: A total of 120 adult male Sprague-Dawley rats were randomly divided into 2 groups: preoperative and postoperative treatment group. Each group (n=10/group) was also divided into 6 groups: sham group, vehicle group, positive control EGb761 group (4 mg·kg-1) and galangin-treated groups (100, 50 and 25 mg·kg-1). Galangin, EGb761 and physiological saline were administered by intragastric administration(i.g.) 15 min prior to MCAO or 6 h after MCAO. Neurological deficit scores were determined at 24 h after MCAO. The crude mitochondria of the ischemic brain tissue was prepared followed by the assay for the activity of the mitochondrial Na+-K+ATPase, Ca2+-ATPase, Mg2+-ATPase and Ca2+-Mg2+ATPase. Results: The activity of Na+-K+ATPase and Ca2+-Mg2+ATPase was significantly improved (P<0.05) in the groups treated with EGb761 and galangin (50 mg·kg-1and 100 mg·kg-1) and the activity in the groups treated with galangin (25 mg·kg-1) did not change significantly. The activity of Ca2+-ATPase and Mg2+-ATPase had no significant differences among all the groups. Conclusion: Galangin can improve the activity of Na+-K+ATPase and Ca2+-Mg2+ATPase significantly in rats impaired by middle cerebral artery occlusion (MCAO)-induced ischemic stroke, relieving the energy metabolic disorder of brain cell. It might be one of the therapeutic mechanisms of ganlangin on ischemic stroke.

Galangin; Ischemic stroke; Mitochondrion; Energy metabolism ; Na+-K+ATPase; Ca2+-Mg2+ATPase

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號：81274133,81303261),國家科技重大專項(xiàng)(重大新藥創(chuàng)制)資助項(xiàng)目(編號：2012ZX09103201-055),中國中醫(yī)科學(xué)院自主選題項(xiàng)目(ZZ2014005，ZZ2014060)

黃志英(1990—),女,碩士研究生,藥理學(xué)專業(yè),Tel:(010)64032656，E-mail:zhiyinghuang1990@163.com

顏天華(1969.8—),男,博士,副教授,從事心血管藥理學(xué)研究,E-mail:tianhua_yan@yahoo.com.cn;李韶菁(1974.3—),女,博士,副研究員,從事中藥組效關(guān)系和分子藥理學(xué)研究,Tel:(010)64032656,E-mail:shaojingli2004@126.com

R285.5;R255.2

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.03.024