通痹外敷散對(duì)大鼠弗氏完全佐劑性膝關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究

鄒佩霞 李 莉 劉興林 陳德森

(1 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院兒科門(mén)診，十堰，442000； 2 湖北醫(yī)藥學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)室；十堰，442000)

實(shí)驗(yàn)研究

通痹外敷散對(duì)大鼠弗氏完全佐劑性膝關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究

鄒佩霞1李 莉2劉興林2陳德森2

(1 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院兒科門(mén)診，十堰，442000； 2 湖北醫(yī)藥學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)室；十堰，442000)

目的：觀察中藥通痹外敷散對(duì)弗氏完全佐劑性大鼠急性關(guān)節(jié)炎的影響，探討其作用機(jī)制。方法：大鼠隨機(jī)分為模型組及治療組，分別于右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注弗氏完全佐劑0.1 mL，術(shù)前及術(shù)后1周、2周、3周分別測(cè)定白細(xì)胞介素-1β亞型(IL-1β)、透明質(zhì)酸(HA)含量；測(cè)量右足趾關(guān)節(jié)以下部位的容積，計(jì)算各組治療效果。結(jié)果：治療2周后，治療組IL-1β明顯降低、HA含量明顯升高，與治療前及模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療組足腫脹度及消腫時(shí)間明顯優(yōu)于模型組(P<0.05)。結(jié)論：通痹外敷散能有效治療弗氏完全佐劑性大鼠急性關(guān)節(jié)炎，其作用可能是通過(guò)抑制IL-1β合成、增加HA含量而起到治療作用。

通痹外敷散；膝關(guān)節(jié)炎；細(xì)胞介素-1β亞型；透明質(zhì)酸

膝關(guān)節(jié)炎伴關(guān)節(jié)積液是多發(fā)于中年以后的慢性、退行性關(guān)節(jié)疾病，由多種疾病或原因引起，臨床以膝關(guān)節(jié)疼痛、變形和活動(dòng)受限為特點(diǎn)[1]。其病因主要為軟骨的破壞與變性，是軟骨分解與合成代謝失衡的結(jié)果[2]，目前尚無(wú)理想的治療辦法。本實(shí)驗(yàn)采取自擬中藥通痹散外敷治療弗氏完全佐劑性大鼠急性關(guān)節(jié)炎，旨在挖掘中醫(yī)藥治療關(guān)節(jié)炎優(yōu)勢(shì)，探討其作用機(jī)制，為臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠24只(由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供)，雌雄兼用，體重(250±50)g，采用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為模型組、治療組、對(duì)照組，每組各8只。

1.2 藥品與試劑 生理鹽水、弗氏完全佐劑(上海實(shí)生細(xì)胞生物技術(shù)有限公司)；自擬通痹外敷散藥物組成(藥材由太和醫(yī)院中藥房提供)：三七粉50 g、生草烏100 g、洋金花50 g、生川烏100 g、、三棱50 g、馬錢(qián)子100 g、大黃60 g、白胡椒50 g、沒(méi)藥100 g、乳香100 g、土鱉蟲(chóng)60 g、山柰60 g、松香50 g、樟腦60 g，將上述藥物加工成極細(xì)的粉末用凡士林調(diào)成糊狀備用。

1.3 急性關(guān)節(jié)炎模型制備 碘伏浸泡大鼠右足趾消毒，模型組及治療組大鼠于右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射弗氏完全佐劑(CFAO)0.1 mL，對(duì)照組注射等量生理鹽水，每日強(qiáng)迫動(dòng)物活動(dòng)30 min，14 d后模型組及治療組即得到穩(wěn)定的膝骨關(guān)節(jié)炎模型[3]，術(shù)后14 d后開(kāi)始治療，治療組大鼠于右足趾通痹外敷散包裹1 d換藥1次，模型組換生理鹽水，于術(shù)前及術(shù)后14 d開(kāi)始測(cè)量1周、2周、3周各組大鼠右足趾關(guān)節(jié)以下部位的容積，計(jì)算各組動(dòng)物腫脹百分率；測(cè)定右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)積液白細(xì)胞介素-1β亞型(IL-1β)、透明質(zhì)酸(HA)含量[4]。

1.4 足腫脹度的測(cè)定 3組動(dòng)物均于實(shí)驗(yàn)當(dāng)天測(cè)量右足趾關(guān)節(jié)以下部位的容積，連續(xù)3次，取平均值為右足容積，計(jì)算各組動(dòng)物足腫脹度。前后容積之差值為腫脹程度，計(jì)算足腫百公率：足腫脹度(%)=(造模后容積-造模前容積)/造模前容積×100%，記錄各組動(dòng)物消腫時(shí)間。

1.5 IL-1β及HA檢測(cè)方法 參照文獻(xiàn)采用酶標(biāo)雙抗體夾心ELISA法標(biāo)記所收集關(guān)節(jié)液中的IL-1β計(jì)算IL-1β含量[5]。用透明質(zhì)酸放免試劑盒進(jìn)行序列加樣，按試劑盒說(shuō)明嚴(yán)格操作，加樣完畢，離心后取沉渣，放射免疫γ射線計(jì)數(shù)分析關(guān)節(jié)液標(biāo)本HA含量。

1.6 動(dòng)物存活情況觀察 觀察動(dòng)物是否存活，有無(wú)動(dòng)物死亡，動(dòng)物的一般情況(包括自潔情況、攝食、飲水量等)。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況的變化 術(shù)后14 d，對(duì)照組大鼠體毛有光澤，反應(yīng)敏捷，飲食正常，無(wú)死亡。模型組大鼠體毛無(wú)光澤、豎毛、反應(yīng)遲鈍、蜷縮少動(dòng)、大鼠體重減輕明顯，死亡1例。治療組在第2周后顯著改善以上癥狀，但與對(duì)照組大鼠比較稍差，35%鼠體毛無(wú)光澤，反應(yīng)一般，飲食正常，無(wú)死亡。

2.2 治療前后骨關(guān)節(jié)炎白細(xì)胞介素-1β亞型(IL-1β)、透明質(zhì)酸(HA)含量 治療組IL-1B含量在治療2周后開(kāi)始降低，與治療前及模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，治療組透明質(zhì)酸(HA)含量在治療2周后開(kāi)始明顯升高，與治療前及模型組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說(shuō)明通痹外敷散能有效降低白細(xì)胞介素-1β亞型(IL-1β)，升高透明質(zhì)酸(HA)的作用。(見(jiàn)表1、表2)

表1 治療前后IL-1β(μg/min)含量比較

注：與治療前比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05。

2.3 治療前后各組動(dòng)物足腫脹度(%)對(duì)比情況 治療組在通痹外敷散治療后1周開(kāi)始消腫，3周后已接近正常，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明通痹外敷散治療效果顯著。(見(jiàn)表3)

表2 治療前后HA(mg/L)含量比較

注：與治療前比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05。

表3 各組動(dòng)物足腫脹度(%)對(duì)比

注：與治療前比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05。

3 討論

膝關(guān)節(jié)炎的病理變化主要為軟骨的破壞與變性，以及繼發(fā)的滑膜與滑液炎癥性改變，是軟骨分解與合成代謝失衡的結(jié)果[7]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，膝關(guān)節(jié)受損后，局部氣滯血瘀，濕濁痹阻于膝關(guān)節(jié)，治則當(dāng)利濕除痹、舒筋通絡(luò)、活血化瘀、行氣止痛[8-10]。方中生草烏、生川烏散寒祛濕，祛風(fēng)止痹；沒(méi)藥、乳香為骨傷科要藥，乳香調(diào)氣活血，沒(méi)藥活血祛瘀，但乳香偏于行氣、伸筋，而沒(méi)藥善于散血化瘀，兩者合用能增強(qiáng)行氣活血止痛之功。土鱉蟲(chóng)破血逐瘀，續(xù)筋接骨；樟腦、山柰、胡椒、松香辛香走竄、行氣止痛；三棱、三七散瘀止血；馬錢(qián)子、洋金花通絡(luò)散結(jié)、消腫定痛；大黃攻積導(dǎo)滯、通經(jīng)行瘀；諸藥合用共起通痹止痛、散瘀消腫、化濕行氣之功效。通過(guò)藥物外敷，在局部保持一定的濃度，能促進(jìn)局部組織新陳代謝而達(dá)“通則不痛”的功效，并且藥物置于體表患部，藥力直達(dá)病所，起效迅速，痛苦較少，不良反應(yīng)降低，安全可靠。

本研究結(jié)果表明通痹外敷散治療膝關(guān)節(jié)炎能有效降低白細(xì)胞介素-1β亞型(IL-1β)，升高透明質(zhì)酸(HA)的作用。機(jī)制可能為：通過(guò)抑制IL-lβ產(chǎn)生，減輕關(guān)節(jié)軟骨和滑膜的炎性反應(yīng)，減輕軟骨細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)和功能的破壞、基質(zhì)的降解，減輕骨的吸收以及關(guān)節(jié)軟骨周?chē)琴樀男纬桑瑥亩鴾p輕關(guān)節(jié)疼痛的臨床癥狀以及關(guān)節(jié)軟骨的破壞，改善關(guān)節(jié)功能[11-12]。正常的關(guān)節(jié)滑液中僅含有微量的IL-1β，但在骨性關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)關(guān)節(jié)液中IL-1β的含量則異常增高。IL-1β作為重要的炎性遞質(zhì)具有細(xì)胞破壞能力，其在退行性骨關(guān)節(jié)病中發(fā)揮著重要作用。HA是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖胺二糖單位有規(guī)律重復(fù)構(gòu)成的大分子鏈狀多糖，化學(xué)本質(zhì)為糖胺多糖，廣泛分布于人及動(dòng)物的結(jié)締組織、眼玻璃體、軟骨和滑液中，是關(guān)節(jié)滑液和軟骨基質(zhì)的重要組成部分。HA可減少OA關(guān)節(jié)內(nèi)炎性遞質(zhì)的擴(kuò)散，減少滑膜的通透性及關(guān)節(jié)內(nèi)滲液。我們認(rèn)為滑液中HA含量升高是由于中藥進(jìn)入機(jī)體吸收以后，促使滑膜內(nèi)襯B型滑膜細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞產(chǎn)生分泌HA，從而起到潤(rùn)滑關(guān)節(jié)、保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨、延緩軟骨退變的作用。這是一種“內(nèi)源性”HA，相對(duì)于外源性的HA關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射，其作用時(shí)間更為長(zhǎng)久[13]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為該病屬“骨痹”范疇，人至中老年或大病后，精氣虧耗，腠理疏松，骨節(jié)失密，風(fēng)寒濕邪入侵而致氣滯血瘀寒凝，經(jīng)絡(luò)不通，精血不能榮筋主骨，痹阻骨節(jié)筋脈而發(fā)為骨痹，中藥外敷可祛風(fēng)除濕散寒[14]，活血化瘀通絡(luò)，消腫止痛，清除關(guān)節(jié)內(nèi)炎性因子，改善關(guān)節(jié)腔內(nèi)環(huán)境從而達(dá)到治療目的。

[1]國(guó)延軍，牟成林，程杰，等.祛瘀通痹湯治療原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎的臨床研究[J].河北中醫(yī)藥報(bào)，2009，24(4)：21-22.

[2]孫艷，陳立忠，王海燕，等.增液潤(rùn)節(jié)湯和美洛昔康片治療膝骨關(guān)節(jié)炎的對(duì)比研究[J].中醫(yī)正骨，2014，26(1):21-23.

[3]張曉軼，節(jié)曉光，張雅麗，等.“CHK”術(shù)式對(duì)兔膝OA中SOD、MDA及NO水平的影響[J].貴州醫(yī)藥，2008，32(8)：680-84.

[4]付德紅，鐘琴，馬武開(kāi)，等.苗藥痛風(fēng)停湯內(nèi)服配合水晶膏外敷治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎療效觀察[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，7(6)：494-496.

[5]齊護(hù)卿，王金榜，杜雙慶，等.養(yǎng)元柔肝湯治療膝骨關(guān)節(jié)炎183例療效觀察[J].河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2009，24(3)：14-15.

[6]張瑋，邢練軍，季光，等.百令膠囊對(duì)慢性乙型肝炎抗肝纖維化的臨床研究[J].世界中醫(yī)藥，2007，2(1):13-14.

[7]鐘琴，劉正奇，安陽(yáng)，等.苗藥痛風(fēng)停湯對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠血清IL-8的影響[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2014，21(1):16-18.

[8]張拴平，郝陽(yáng)泉.關(guān)節(jié)內(nèi)灌注沖洗并中藥熏洗治療膝骨性關(guān)節(jié)炎50例[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，33(5)：68.

[9]趙文修，沈丕安，戴琪萍，等.急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的中醫(yī)藥治療研究進(jìn)展[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎，2013，11(11):72-76.

[10]陳才興，孫成長(zhǎng).中藥內(nèi)外兼治合透明質(zhì)酸鈉治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，16(7):427-428.

[11]鐘正霞，于泓，袁良東，等.抗痛風(fēng)膠囊改善急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)病理學(xué)變化[J].遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，36(2):105-107.

[12]柳景紅，祁開(kāi)澤，吳濤，等.痛風(fēng)速效靈對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠步態(tài)和關(guān)節(jié)組織形態(tài)學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16(5):592-594.

[13]馬健良，王天理.針灸配合中藥熏洗治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎合并積液的療效觀察[J].北華大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2012，13(3)：32.

[14]姚鉅森，張丹娜.中藥外敷內(nèi)服治療膝骨性關(guān)節(jié)炎46例[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，1(1)：72-73.

(2013-11-02收稿 責(zé)任編輯：曹柏)

Laboratory Research of Tongbi Application Powder for Treating Freund's Adjuvant Knee Arthritis in Rats

Zou Peixia1，Li Li2，Liu Xinglin2，Chen Desen2

(1AffiliatedTaiheHospitalofHubeiUniversityofMedicine,Shiyan442000，China;2HubeiUniversityofMedicine,Shiyan442000，China)

Objective:To observe effect of Tongbi Application Powder on Freund's adjuvant knee arthritis in rats and its mechanism. Methods:Rats were randomly divided into model group and treatment group, sc. injected Freund's adjuvant 0.1ml into right knee, then measured interleukin -1 beta (IL-1 β), hyaluronic acid (HA) before surgery,1wk, 2wk, 3wk after surgery; measured volume below the right toe. Results:After wk2, treatment group had lower IL-1 beta and higher HA levels, significantly different compared with that before treatment and model group (P<0.05). The treatment group's extent of foot swelling and duration was significantly better than that of model group, (P<0.05). Conclusion:Tongbi Application Powder is effective for treating Freund's adjuvant arthritis in rats, the effect may be induced by inhibiting IL-1 β synthesis and increasing HA level.

Tongbi external powder; Knee arthritis; Interleukin -1 subtype; Hyaluronic acid

鄒佩霞(1962—)，女，漢族，中專，研究方向：從事臨床護(hù)理及臨床中醫(yī)藥研究

陳德森(1970.6—)，男，副教授，學(xué)士，研究方向：從事中醫(yī)藥藥理學(xué)及臨床藥理學(xué)研究，E-mail：cdscds1226@126.com

R332；R274

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.01.019