藤貝母乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究

何 峰， 向梅先， 胡亞京， 劉新橋

(中南民族大學(xué) 藥學(xué)院， 武漢 430074)

?

藤貝母乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究

何 峰， 向梅先， 胡亞京， 劉新橋*

(中南民族大學(xué) 藥學(xué)院， 武漢 430074)

采用薄層色譜、正相硅膠柱、反向硅膠柱、葡聚糖凝膠、半制備高效液相柱對(duì)植物藥藤貝母乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究.共分離得到8個(gè)單體化合物，分別為：7-羥基-6-甲氧基香豆素(7-hydroxy-6-methoxy coumarin) (1)，表兒茶素(epicatechin) (2)，兒茶素(catechin) (3)，(E)-N-(4-羥基苯乙基)-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺[(E)-N-hydroxy phenyl ethyl-3-(4-hydroxy-3-methoxy phenyl) acrylamide] (4)，鄰苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate) (5)，(Z)-3-O-咖啡酰基-4-O-甲基奎寧酸甲酯[(Z)-3-O-Coffee acyl-4-O-methyl quinic acid methyl ester] (6)，綠原酸甲酯(methyl chlorogenate) (7)， 3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5，7，4′-三羥基黃酮(3-O-[beta-D-pyran rhamnose-(1-6)-beta-D-pyran galactose]-5， 7， 4′-three hydroxy flavone) (8). 所有化合物均首次從該植物分離得到.

藤貝母； 乙酸乙酯部位； 化學(xué)成分

藤貝母來(lái)源于葫蘆科土貝母屬植物土貝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet，以鱗莖入藥.秋、冬采挖，洗凈，蒸透，曬干，用時(shí)打碎.藤貝母生于山坡草叢或平地， 主要分布于河北、山西、陜西、山東、甘肅、寧夏、河南和云南等省區(qū)，現(xiàn)有栽培.具清熱解毒，散結(jié)消腫.主治淋巴結(jié)結(jié)核、骨結(jié)核、乳腺炎、瘡癰腫毒；外用治蛇、蟲咬傷和外傷出血等癥[1].現(xiàn)代藥理研究表明藤貝母具有抗腫瘤活性[2]，本研究為了弄清其抗腫瘤的藥用功效的物質(zhì)基礎(chǔ)， 對(duì)藤貝母的化學(xué)成分進(jìn)行了相應(yīng)研究.采用正相硅膠柱層析、凝膠色譜、制備薄層色譜、半制備高效液相色譜等多種方法， 從藤貝母乙酸乙酯部位分離得到并鑒定了8個(gè)化合物.8個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)如圖1所示.

1 材料和方法

1.1 試劑、材料和儀器

藤貝母藥材采自湖北恩施地區(qū)，經(jīng)中南民族大學(xué)藥學(xué)院萬(wàn)定榮教授鑒定為葫蘆科土貝母屬植物土貝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet [Actinostemma paniculatum Maxim.] 的鱗莖.石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、甲醇為分析純(國(guó)藥集團(tuán))，95%的乙醇為工業(yè)級(jí)，色譜級(jí)甲醇(天地公司).柱層析用硅膠(100～200目，200～300目)，硅膠G高效預(yù)制板(青島海洋化工產(chǎn)).ZF-6型三用紫外光譜儀；Bruker AM-400型核磁共振儀；Finnigan LCQ-Deca型質(zhì)譜儀；戴安Ultimate 3000型高效液相色譜儀；5C18-MS-Ⅱ(10 mm×250 mm)型色譜柱；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；KQ-500E型超聲波清洗儀；紫外分光光度儀；Nicolet NEXUS-670傅里葉變更紅外光譜儀.

1.2 提取與分離

取藤貝母10 kg 淋洗后曬干，用粉碎機(jī)粉碎成粗粉.將藤貝母粗粉置95% 的乙醇中室溫浸泡提取3 次，每次24 h.過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮得浸膏2.1 kg，將浸膏用90%甲醇水溶液溶解后用等體積石油醚萃取，回收石油醚得到石油醚浸膏200 g(石油醚部位) .減壓回收下層的甲醇溶液得浸膏，然后用蒸餾水溶解浸膏后，依次用等體積乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別減壓回收乙酸乙酯和正丁醇，得到乙酸乙酯提取物600 g (乙酸乙酯部位) 和正丁醇提取物900 g (正丁醇部位)，余下為水部位，蒸干水分后稱重 (水部位) .稱取乙酸乙酯部位浸膏500 g 上正相硅膠色譜柱，用環(huán)己烷-丙酮梯度洗脫(9∶1， 8∶2， 7∶3， 6∶4， 5∶5， 4∶6，3∶7， 2∶8， 1∶9， 0∶1)，收集各洗脫液，500 mL為一流分，TLC檢測(cè)合并相同流分后得到Fr.E1～E9九個(gè)部分.其中Fr.E1經(jīng)正、反相硅膠柱、葡聚糖凝膠柱層析得化合物Ⅰ(13 mg)和Ⅴ(7 mg); Fr.E2經(jīng)正相硅膠柱和凝膠柱、制備薄層板得化合物Ⅳ(23 mg); Fr.E4經(jīng)正相硅膠柱和半制備高效液相(HPLC)得化合物Ⅱ(9 mg)和Ⅲ(5 mg); Fr.E5、Fr.E6、Fr.E8分別經(jīng)正、反相硅膠柱和HPLC等方法進(jìn)行分離，得到化合物Ⅵ (11 mg)、Ⅶ (14 mg)、Ⅷ (23 mg).

圖1 化合物的結(jié)構(gòu)Fig.1 The structures of compounds

2 結(jié)構(gòu)鑒定與結(jié)果

2.1 化合物I (7-羥基-6-甲氧基香豆素)

化合物I為白色針狀晶體(氯仿)，1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ: 6.30(1H， d，J=9.2 Hz， H-3)， 7.63(1H， d，J=9.2 Hz， H-4)， 6.94(1H，s， H-6)， 3.98(3H，s，-OCH3-7).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ: 161.42(C-2)，113.40(C-3)， 143.30(C-4)， 111.49(C-5)， 107.48(C-6)， 150.26(C-7)， 144.01(C-8)， 103.19(C-9)， 150.26(C-10)， 56.41(7-OCH3).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物I為7-羥基-6-甲氧基香豆素(7-hydroxy-6-methoxy coumarin，分子式為C10H8O4).

2.2 化合物Ⅱ(表兒茶素)

化合物Ⅱ?yàn)榘咨勰?甲醇)，[α]D-59.1°.1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ: 4.83(1H， s， H-2)， 4.19(1H， s， H-3)， 2.89(1H， dd，J=16.8， 4.8 Hz，H-4)， 2.75(1H， d，J=16.2 Hz， H-5)， 5.92(1H， s， H-6)， 5.95(1H， s， H-8)， 6.99(1H， s， H-1′)， 6.78(1H， d，J=8.0Hz， H-5′)， 6.83(1H， d，J=8.0 Hz， H-6′).13C NMR(100 MHz， CD3OD)δ: 78.50(C-2)， 66.10(C-3)， 27.83(C-4)， 156.29(C-5)， 95.08(C-6)， 155.97(C-7)， 94.55(C-8)， 98.73(C-4a)， 156.59(C-8a)， 130.91(C-1′)， 114.54(C-2′)， 144.39(C-3′)， 144.56(C-4′)， 113.97(C-5′)， 118.04(C-6′).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物Ⅱ?yàn)楸韮翰杷?epicatechin，分子式為C15H14O6).

2.3 化合物Ⅲ (兒茶素)

化合物Ⅲ為白色粉末(甲醇)，[α]D-17.1°.1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ: 4.73(1H， s， H-2)， 4.01(1H， s， H-3)， 2.67(2H， dd，J=16.8， 4.8 Hz，H-4)， 5.89(1H， s， H-6)， 5.72(1H， s， H-8)， 6.89(1H， s， H-2′)， 6.69(1H， d，J=8.0 Hz， H-5′)， 6.66(1H， d，J=8.0 Hz， H-6′).13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ: 82.7(C-2)， 68.5(C-3)， 28.4(C-4)， 100.5(C-4a)， 157.3(C-5)， 96.3(C-6)， 156.9(C-7)， 94.7(C-8)， 157.5(C-8a)， 131.7(C-1′)， 115.1(C-2′)， 145.3(C-3′)， 145.5(C-4′)， 115.5(C-5′)， 120.2(C-6′).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物Ⅲ為兒茶素(catechin， 分子式為C15H14O6).

2.4 化合物Ⅳ[(E)-N-(4-羥基苯乙基)-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺]化合物Ⅳ為黃褐色粉末(二甲亞砜)，1H NMR(400 MHz， DMSO-d6)δ: 8.00(1H， s)， 7.12(1H， d，J=1.6 Hz， H-2)， 6.79(1H， d，J=8.4 Hz，5-H)， 6.99(1H， dd，J=8.4， 1.6 Hz， H-6)， 7.32(1H， d，J=15.6 Hz， H-7)， 6.44(1H， d，J=15.6 Hz， H-8)， 3.33(2H， m， H-1′)， 2.65(2H， m， H-2′)， 7.01(2H， d，J=8.4 Hz， H-4′，8′)， 6.68(2H， d，J=8.4Hz， H-5′-7′)， 3.80(3H， m，-OCH3-3).13C NMR(100 MHz， DMSO-d6)δ: 127.06(C-1)， 116.09(C-2)， 148.88(C-3)， 148.86(C-4)， 119.46(C-5)， 121.96(C-6)， 139.33(C-7)， 111.17(C-8)， 165.97(C-9)， 41.11(C-1′)， 34.87(C-2′)， 130.17(C-3′)， 129.92(C-4′，8′)， 115.56(C-5′-7′)， 156.27(C-6′)， 55.96 (-OCH3-3).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物Ⅳ為(E)-N-(4-羥基苯乙基)-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺((E)-N-(4-hydroxyphenethyl)-3-(4-hydrixy-3-methoxyphenyl) acrylamide， 分子式為C18H19O4N).

2.5 化合物Ⅴ(鄰苯二甲酸二丁酯)

化合物Ⅴ為墨綠色油狀物(氯仿)，1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ: 4.32(4H， t，H-1-1′)， 1.73(4H， m， H-2-2′)， 1.47(4H， m， H-3-3′)， 1.17(6H， td， H-4-4′)， 7.56(2H， m， H-3″-6″)， 7.76(2H， m， H-4″-5″).13C NMR(100 MHz， CDCl3)δ: 65.53(C-1-1′)， 30.58(C-2-2′)， 19.12(C-3-3′)， 13.66(C-4-4′)， 130.89(C-1″-2″)， 128.84(C-3″-6″)， 132.40(C-4″-5″)， 167.67(C-7″，8″).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物Ⅴ為鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate， 分子式為C16H22O4).

2.6 化合物Ⅵ [(Z)-3-O-咖啡酰基-4-O-甲基奎寧酸甲酯]

化合物Ⅵ為灰綠色粉末(甲醇)，1H NMR(400 MHz， CD3OD)δ: 2.18(2H， m，H-2′)， 5.26(1H， d，J=3.6 Hz， H-3′)， 3.67(1H， m， H-4′)， 4.07(1H， m， H-5′)， 2.01(2H， m， H-6′)， 7.40(1H， d，J=1.6 Hz， H-2)， 6.72(1H， d，J=8.4 Hz， H-5)， 7.04(1H， dd，J=1.6， 8.0 Hz， H-6)， 6.80(1H， d，J=12.8 Hz， H-7)， 5.71(1H， d，J=12.8 Hz， H-8)， 3.68(3H， s，-OCH3-7′).13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ: 76.28(C-1′)， 71.87(C-2′)， 72.14(C-3′)， 38.12(C-4′)， 70.54(C-5′)， 38.12(C-6′)， 175.78(C-7′)， 128.48(C-1)，118.61(C-2)， 145.38(C-3)， 148.47(C-4)， 115.66(C-5)， 125.17(C-6)， 145.75(C-7)， 116.54(C-8)， 167.42(C-9)， 53.33 (-OCH3-7′).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物Ⅵ為(Z)-3-O-咖啡酰基-4-O-甲基奎寧酸甲酯((Z)-3-O-caffeoyl quinic acid methyl ester，分子式為C17H20O9).

2.7 化合物Ⅶ (綠原酸甲酯)

化合物Ⅶ為灰綠色粉末(甲醇)，1H NMR(600 MHz， CD3OD)δ: 6.94(1H， d，J=1.8 Hz， H-2)， 6.68(1H， d，J=7.8 Hz， H-5)， 6.85(1H， dd，J=1.8， 7.8 Hz， H-6)，7.43(1H， d，J=16.2 Hz， H-7)， 6.12(1H， d，J=16.2 Hz，H-8)， 5.16(1H， d，J=4.8 Hz， H-3′)， 2.09(2H， m， H-2′)， 2.09(1H， m， H-6′)， 1.92(1H， m， H-6′)， 3.67(1H， m， H-4′)， 4.15(2H， m， H-5′).13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ: 127.58(C-1)， 115.06(C-2)， 149.71(C-3)， 146.87(C-4)， 116.58(C-5)， 122.98(C-6)， 147.21(C-7)， 114.98(C-8)， 168.25(C-9)， 75.16(C-1′)， 72.42(C-2′)，72.16(C-3′)， 37.65(C-4′)，70.32(C-5′)， 37.65(C-6′)，175.35(C-7′).1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物Ⅶ為綠原酸甲酯(Methyl chlorogenate，分子式為C17H20O9).

2.8 化合物Ⅷ(3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5，7，4′-三羥基黃酮)

化合物Ⅷ為黃綠色粉末(甲醇)，1H NMR(600 MHz， CD3OD)δ: 8.18(1H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′)，6.58(1H，d，J=8.6 Hz， H-3′，5′)，6.58(1H，brs， H-8)， 6.19(1H， brs， H-6)， 5.13(1H， d，J=7.8 Hz， H-1″of Gal)，4.62(1H，s，H-1?of Rha)，1.28(3H， d，J=6.2 Hz， H-6?of Rha);13C NMR(150 MHz， CD3OD)δ: 179.4(C=O)， 166.8(C-7)， 162.8(C-5)，161.7(C-4′)，158.6(C-4)， 159.3(C-2)， 135.6(C-3)， 132.4(C-2′，6′)， 122.5(C-1′)， 116.3(C-3′，5′)， 105.7(C-1″ of Gal)， 105.4(C-10)， 101.7(C-1? of Rha)， 100.3(C-6)， 95.0(C-8)， 75.5(C-3″of Gal)， 75.2(C-5″of Gal)， 73.7(C-4?of Rha)， 73.1(C-2″of Gal)，72.4(C-3?of Rha)，72.2(C-2?of Rha)， 70.1(C-5?of Rha)， 69.8(C-4″of Gal)， 67.4(C-6″of Gal)， 18.1(C-6?of Rha).以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)一致[10-11]，故鑒定化合物Ⅷ為3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5，7，4′-三羥基黃酮(3-O-[beta-D-pyran rhamnose-(1-6)-beta-D-pyran galactose]-5，7，4′-three hydroxy flavone， 分子式為C27H29O15)．

3 討論

藤貝母來(lái)源于葫蘆科土貝母屬植物土貝母Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet [Actinostemma paniculatum Maxim.]，本研究對(duì)藤貝母進(jìn)行了化學(xué)成分分析研究.運(yùn)用溶劑萃取，柱層析分離技術(shù)：如采用正相硅膠柱層析、凝膠色譜、制備薄層色譜、半制備高效液相色譜等多種方法， 從藤貝母乙酸乙酯部位分離得到了10多個(gè)化合物，鑒定了其中的8個(gè)，分別是7-羥基-6-甲氧基香豆素(7-6-hydroxy-6-methoxy coumarin)，表兒茶素(epicatechin)，兒茶素(catechin)，(E)-N-(4-羥基苯乙基)-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺[(E)-N-hydroxy phenyl ethyl-3-(4-hydroxy-3-methoxy phenyl) acrylamide]，鄰苯二甲酸二丁酯(di butyl phthalate)，(Z)-3-O-咖啡酰基-4-O-甲基奎寧酸甲酯[(Z)-3-O-Coffee acyl-4-O-methyl quinic acid methyl ester]，綠原酸(chlorogenic acid)，3-O-[β-D-吡喃鼠李糖-(1-6)-β-D-吡喃半乳糖]-5，7，4′-三羥基黃酮(3-O-[beta-D-pyran rhamnose-(1-6)-beta-D-pyran galactose]-5，7，4′-three hydroxy flavone).查閱文獻(xiàn)資料，發(fā)現(xiàn)這些化合物均為首次從該植物中分離得到，下一步將對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行抗腫瘤活性的篩選，以弄清該藥抗腫瘤的物質(zhì)基礎(chǔ).

[1] 南京中醫(yī)藥大學(xué)編寫組. 中藥大辭典[M].上冊(cè).上海: 科學(xué)技術(shù)出版社， 2005: 114．

[2] 全國(guó)中草藥匯編編寫組. 全國(guó)中草藥匯編[M].下冊(cè).北京: 人民衛(wèi)生出版社， 1978: 323．

[3] 向梅先， 胡亞京， 閆云君. 血三七乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究[J].中藥材，2012， 35(10): 1610-1614．

[4] WANG Kai-Jin， ZHANG Ying-Jun， YANG Chong-Ren， et al. Antioxidant phenolic compounds from rhizomes of Polygonum paleaceum [J]. Journal of Ethnopharmacology， 2005， 96: 483-487．

[5] Foo L Y， Lu Y， Mcnabb W C， et al. Proanthocyanidins from lotus pedunculatus [J]. Phytochemistry， 1997， 45(8): 1689-1696．

[6] Peihong Fan， Lara Terrier， Anne-Emmanuelle Hay， et al. Antioxidant and enzyme inhibition activities and chemical profiles of Polygonum sachalinensis F.Schmidt ex Maxim (Polygonaceae) [J]. Fitoterapia， 2010， 81: 124-131．

[7] 陳光英， 王安偉， 宋小平， 等. 大葉魚骨木莖的化學(xué)成分研究[J]. 化學(xué)研究與應(yīng)用，2009, 10(7): 1024-1026.

[8] Carmen Lucia Cardoso， Vanderlan da Silva Bolzani， Dulce Helena Siqueira Silva， et al. The absolute configuration of 1-(3′，4′-dihydroxycinnamoyl) cyclopentane-2，3-diol from the amazonian tree Chimarrhis turbinate [J]. Journal of Nature Product， 2006， 69: 1046-1050．

[9] 翁裕馨， 陳湘宏， 劉占厚， 等. 細(xì)氈毛忍冬葉綠原酸類化學(xué)成分研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011， 39 (27): 16566-16568．

[10] 易 衍， 巫 鑫， 王 英， 等. 霸王花黃酮類成分研究[J]. 中藥材， 2011， 34(5): 712-716．

[11] 向梅先， 金財(cái)多， 寇榮生， 等. 藤梨正丁醇部位化學(xué)成分的研究[J]. 華中師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版， 2015， 49(3): 397-401.

Study on chemical composition of ethylacetate fraction fromBolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet

HE Feng， XIANG Meixian， HU Yajing， LIU Xinqiao

(College of Pharmacy， South-central University for Nationalities， Wuhan 430074)

To study chemical composition of ethylacetate fraction fromBolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet. TLC， normal-phase silica gel column， reveres-phase silica gel column， Sephadex-LH， semi-preparative HPLC column were used to isolate chemical compositions of ethylacetate fraction fromBolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet. Eight compounds were gained and identified as∶7-6-hydroxy-6-methoxy coumarin (1); epicatechin (2); catechin (3); (E)-N-hydroxy phenyl ethyl-3-4-hydroxy-3-methoxy phenyl acrylamide (4); dibutyl phthalate(5); (Z)-3-O-Coffee acyl-4-O-methyl quinic acid methyl ester (6); chlorogenic acid (7); 3-O-[beta-D-pyran rhamnose-(1-6)-beta-D-pyran galactose]-5，7，4′-three hydroxy flavone (8). All compounds were isolated for the first time from this plant．

Bolbostemmapaniculatum(Maxim.) Franquet; ethylacetate fraction; chemical composition

2015-03-23.

武漢市科技晨光計(jì)劃項(xiàng)目(2014070404010210).

1000-1190(2015)04-0563-04

O629< class="emphasis_bold">文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A

A

*通訊聯(lián)系人. E-mail: lxqsuec@163.com.