雙聯檢半定量隱血檢測在海路HF-180自動糞便分析儀上的應用*

西安交通大學第二附屬醫院(西安 710004)

賀軍濤 張彥平 何 娜△

雙聯檢半定量隱血檢測在海路HF-180自動糞便分析儀上的應用*

西安交通大學第二附屬醫院(西安 710004)

賀軍濤 張彥平 何 娜△

目的：探討雙聯檢半定量隱血檢測方法在海路HF-180自動糞便分析儀上的應用價值。方法：采用海路HF-180自動糞便分析儀和雙聯檢半定量隱血卡片對641例消化科病人糞便進行隱血檢測，加樣15min后在儀器連接的電腦中觀察結果，統計雙聯檢法的免疫法(單克隆膠體金)和化學法(四甲基聯苯胺)的陽性率。結果：化學法陽性、免疫法陰性比率39.4%，化學法陰性、免疫法陽性比率0.47%，化學法陽性、免疫法陽性的比例17.6%。結論：雙聯檢半定量法優于傳統的膠體金法，此法用于HF-180糞便分析儀，更能在檢測標準化，快速化的同時，消除人為因素造成的誤差，避免交叉污染，使檢測結果更準確，有較大的應用價值。

糞便隱血是消化道異常的早期預警信號，當消化道出血量較少時，糞便外觀可無異常改變，肉眼不能識別，因此，對疑有消化道慢性出血的患者，應進行糞便隱血檢查，對消化道惡性腫瘤(如胃癌、大腸癌、息肉、腺瘤)的早期篩查意義重大。 傳統的化學法和免疫法都有其各自的缺點，而雙聯檢半定量法則結合了兩種方法，化學法可以半定量檢測人糞便樣本中的血紅蛋白。將這種方法用于海路HF-180自動糞便分析儀，更能使糞便潛血檢測自動化、標準化、便捷化。

材料與方法

1 材料選擇

1.1 標本來源：2015年3月在西安交通大學第二附屬醫院消化科住院和門診病人的641例糞便標本，男性379例，女性262例，年齡16～85歲，糞便留取30min內完成檢測。

1.2 儀器與試劑：蘇州海路生物技術有限公司生產的自動糞便分析儀HF-180、一次性使用糞便采集標本盒 、海路系列分析儀稀釋液(氯化鈉0.9%、硫酸鈉0.1%、磷酸鹽緩沖液0.01%、苯甲酸鈉0.01%)、海路系列分析儀清洗液。天津中新科炬生物制藥有限公司生產的大便潛血(FOB)檢測試劑盒(雙聯法)。

2 方 法

2.1 用一次性糞便采集標本盒收集641例消化科病人的糞便標本，用采便棒在樣本上幾個不同位置隨機取樣黃豆大小(20～50mg)。將糞便采集盒按編號順序放入HF-180自動糞便分析儀檢測孔，一對一放入雙聯檢半定量隱血卡片進行糞便隱血試驗，操作流程嚴格按照儀器及試劑盒說明書要求進行。

2.2 雙聯檢隱血結果判讀。

2.2.1 免疫法結果判讀：陽性(反應線T與質控線C同時出現一條色帶)，陰性(質控線C出現一條色帶，反應線T無色帶出現，無效(質控線C和反應線T均無色帶出現，或僅有反應線T出現一條色帶，則表明試驗無效。

2.2.2 化學法結果的判讀：陽性(在滴加樣本液1min內試紙卡片從橙色到黃綠色或深綠色的變化，結果為陽性)，陰性(1min內不變色，結果為陰性)，無效(若試紙卡片呈花色，則判斷無效)

結 果

對641例消化科病人的糞便標本采用HF-180自動糞便分析儀和雙聯檢半定量隱血試紙卡片進行檢測，其中化學法陽性、免疫法陰性比例39.4%，化學法陰性、免疫法陽性比例0.47%，化學法陽性、免疫法陽性的比例17.6%，見附表。

附表 糞便隱血雙聯檢檢測結果

注：A代表免疫法，B代表化學法，(+)代表陽性，(-)代表陰性

討 論

免疫膠體金法是應用膠體金免疫檢測技術，用免疫學方法檢測人糞便樣本中出現的人血紅蛋白?；瘜W法是應用血紅蛋白具有過氧化物酶活性，可使氧化物分解釋放出氧原子，使四甲基聯苯胺出現顏色變化，從而檢測血紅蛋白。免疫法和化學法都有各自缺點，消化道大出血患者大便往往呈柏油樣便或血便，此時用膠體金試紙檢測往往呈假陰性，因為試紙條所包被的抗體量是一定的，那么一旦超出檢測范圍就會出現假陰性[1]，化學法因為特異性不強，如果患者食用肉類，血塊類等食物，其血紅素的作用均可以使實驗呈假陽性[2]。而雙聯檢半定量法則結合了兩種方法，化學法可以半定量檢測人糞便樣本中的血紅蛋白。根據指示劑顏變化將血紅蛋白含量劃分為小于2μg/ml，2～20μg/ml，20～200μg/ml，200～2000μg/ml，大于2000μg/ml五個檢測區間。免疫法可測出樣本中微量的血紅蛋白(0.2μg/ml)，這使單克隆法對人體無癥狀的消化道出血更敏感[3]。

對于化學法和免疫法結果不符合的患者標本，我們發現其中11例標本均為血便，其原因可能為病人出血量大，糞便中血紅蛋白量過多導致抗原過剩而出現后帶效應，因此出現了假陰性。另有2例標本取樣量過大，導致糞便越過采樣器的隔檔進入吸樣池，導致采樣錯誤，故使用HF-180糞便分析儀使應在糞便表面各處均取，并且量最好為一匙(黃豆大小)。排除明顯因糞便外觀性狀而出現的不符合結果外，就最終判定結果做一介紹，當免疫法呈現陽性結果，但化學法呈現陰性時，表明樣本中血紅蛋白含量較低，為隱性出血，判定結果陽性。免疫法顯示陰性結果，化學法顯示陽性結果時，可能為血紅蛋白過高導致抗原過量，將樣本用HF-180的稀釋液稀釋100倍后再檢測一次，如果免疫法顯示陽性，表明有大量出血；如果免疫法為陰性，可能為物質干擾，判定結果為陰性。

隨著社會經濟發展，醫院就診病人也成直線上升趨勢，而傳統的手工檢測糞便隱血方法很難保證按時發出檢查結果，我科目前使用的海路HF-180糞便常規分析儀可連續對多個標本進行處理，每小時可測試120個樣本，單個樣品5 min即完成檢測，大大提高了檢測的效率。儀器可對采集的糞便標本自動稀釋，攪拌，加樣，全自動操作模式取代了目前繁瑣的手工操作。而專用的標本采集盒密閉，防外泄，以及儀器的高清洗能力都避免了因手工操作造成的交叉污染，將稀釋濾過后的樣本液體自動灌注計數池，通過自動視野轉換，自動焦距調整，快速的計數并在電腦顯示屏上顯示的細胞形態、分辨細胞類型、自動換算等，同時完成化學檢驗和顯微鏡鏡驗，極大的減輕了操作人員的勞動強度，提高了工作效率。

綜上所述，將雙聯檢半定量法引入海路HF-180全自動糞便分析儀，在方法學上，免疫法彌補了化學法易出現假陽性的缺點，化學法能對人血紅蛋白進行半定量檢測。其次，它能夠使糞便隱血試驗的檢測結果更加準確，迅速，方便，實現了糞便常規檢查的自動化、標準化和規范化要求，徹底改變了傳統的、原始的方法及操作方式，大大提高了檢驗科的工作效率，將有利于臨床的推廣應用。

[1] 張桔紅，張凌玲，林 瑋．金標法測便類潛血中的后帶現象 [J].實用醫技雜志，2004，11(7)：402-403．

[2] 楊小藝，孫巨軍，楊小青.三種不同便潛血檢測方法的對比觀察 [J].陜西醫學雜志，2012，41(2)：214-214.

[3] 韋常麗，糞便潛血單克隆抗體法臨床應用的探討[J].廣西中醫學院學報，2003，6(4)：56-57．

(收稿：2015-05-18)

*國家自然科學基金資助項目(81201925)

@大便隱血 化學定量分析 糞便

R446.1

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.11.048

△通訊作者