低頻超聲促透通絡止痛中藥對不同程度膝骨關節炎大鼠模型CTX-Ⅱ、COMP及MMP-3的影響

戚晴雪 馬玉峰 吳 忌 鄭皓云 朗 松 楊黎黎 趙 軍 張 棟 王慶甫

(1 北京中醫藥大學,北京，100029； 2 北京中醫藥大學第三附屬醫院，北京，100029)

低頻超聲促透通絡止痛中藥對不同程度膝骨關節炎大鼠模型CTX-Ⅱ、COMP及MMP-3的影響

戚晴雪1馬玉峰2吳 忌1鄭皓云1朗 松1楊黎黎1趙 軍1張 棟1王慶甫2

(1 北京中醫藥大學,北京，100029； 2 北京中醫藥大學第三附屬醫院，北京，100029)

目的：探討通絡止痛中藥在低頻超聲促透下對大鼠不同程度膝骨關節炎(Knee Osteoarthritis，KOA)模型的軟骨組織形態學及血清中CTX-Ⅱ、COMP及MMP-3的影響，闡述該療法的作用機制及其優勢。方法：采用切斷前交叉韌帶的經典方法制備KOA大鼠模型。SD大鼠隨機分為3組：空白對照組、超聲促透組和中藥外敷組。所有大鼠左膝造模，空白對照組正常飼養，術后2、4、8周時隨機選取空白對照組大鼠檢測血清相關細胞因子；處死后觀察膝關節股骨內側髁軟骨組織形態學改變，根據軟骨改良Mankin’s評分予以評價，并根據Mankin’s評分結果確定大鼠KOA的病變程度。超聲促透組和中藥外敷組在術后2、4、8周時各隨機選取大鼠進行干預處理，超聲促透組使用超聲電導儀對術側膝關節促透通絡止痛中藥，中藥外敷組僅使用中藥外敷。1次/d，30 min，連續治療2周。2周后處死，記錄數據同空白對照組。結果：空白對照組大鼠造模后2、4、8周時大鼠軟骨組織形態學發生明顯改變，Mankin’s評分的增加與時間成正相關，血清中CTX-Ⅱ、COMP、MMP-3的含量發生不同程度的增高。超聲促透組與空白對照組相比，軟骨組織形態學發生改變，Mankin’s評分2、4、8周組降低，2、4周時差異有統計學意義(P<0.01)，4周時有統計學意義(P<0.05)；其作用顯著優于中藥外敷組，2周時下降明顯，兩兩相比有統計學意義(P<0.05)。超聲促透組與空白對照組相比，2、4、8周時CTX-Ⅱ含量明顯降低，二者相比有統計學意義(P<0.05)；8周時，CTX-Ⅱ含量降低，二者相比有統計學意義(P<0.05)；其作用顯著優于中藥外敷組。超聲促透組與空白對照組相比，2、4周時COMP含量減少(P<0.05)；與中藥外敷組相比，4周時含量降低明顯，二者相比有統計學意義(P<0.05)。超聲促透組和空白對照組相比，2、4周時MMP-3含量降低，二者有統計學意義(P<0.05)；4周時超聲促透組與空白對照組相比，MMP-3含量顯著降低(P<0.01)，與中藥外敷組相比，含量降低明顯，二者相比有統計學意義(P<0.05)。結論：低頻超聲促透通絡止痛中藥可以有效減緩或阻止膝關節軟骨的退行性變，這可能是通過降低血清中軟骨基質相關細胞因子CTX-Ⅱ、COMP和MMP-3含量，減緩軟骨基質的退變所致，但對重度KOA軟骨退變的緩解作用并不明顯；與傳統的中藥外敷法相比，具有起效快，療效好等優點。

膝骨性關節炎；低頻超聲；通絡止痛中藥；軟骨基質；軟骨組織形態學

膝骨關節炎(Knee Osteoarthritis，KOA)是老年人群常見的骨科疾病，嚴重影響患者生活質量。盡管中醫外治法在針對該病的治療上取得一定成績，但受傳統方法限制，中藥有效成分不能很好的滲入患處，療效難以發揮。而近些年新興的低頻超聲促透法可能改變這一現狀，中藥多為大分子物質，很難透過皮膚屏障達于患處，而通過低頻超聲特有的空化作用[1]可以使得藥物有效成分直達病灶，形成局部濃集和浸潤而起到靶位治療的作用。通絡止痛中藥主要由桃仁、紅花、桂枝、白芍等構成，具有活血通絡止痛的功效。臨床上應用低頻超聲促透通絡止痛中藥治療KOA的臨床療效也得到證實[2]。我們通過動物實驗建立不同程度大鼠KOA模型，并利用通絡止痛中藥的低頻超聲促透法對其進行干預，從大鼠軟骨組織形態學以及相關細胞因子CTX-Ⅱ、COMP及MMP-3含量變化等方面對該療法的有效性及起效機制進行近一步驗證。

1 材料與方法

1.1 藥物與動物 通絡止痛中藥萃取液，批號：201303，由北京諾亞同舟醫療技術有限公司提供；SPF級SD大鼠[SCXK(京)2012-0001]，雄性，體重約200 g，由北京維通利華實驗動物有限公司提供。

1.2 主要儀器設備 超聲電導儀，型號：NAVA-01TD，北京諾亞同舟醫療器械有限公司提供；光學顯微鏡(日本)，BX50-3E01；石蠟切片機(日本)，IVS-400；全自動封閉式組織脫水機(日本)，Rotovy 4634；精密電子天平(上海)，52750；超低溫冰箱(日本)，MDF-U50A。

1.3 實驗動物分組與處理 84只全雄SD大鼠按照隨機區組法隨機分為3組：空白對照組(18只)、超聲促透組(33只)和中藥外敷組(33只)。所有大鼠采取StooP前交叉韌帶切除的經典方法[3]予以造模，左膝為手術側，右膝為對照側。空白對照組術后2、4、8周隨機選取6只大鼠觀察其行為學變化，記錄Lequesne MG評分后予以處死，肉眼觀察膝關節軟骨大體改變，光鏡下觀察滑膜和股骨內側髁軟骨組織形態學變化，記錄軟骨Mankin’s評分；超聲促透組和中藥外敷組在術后2、4、8周時分別隨機選取11只大鼠進行藥物干預，2周后觀察其行為學變化，記錄Lequesne MG評分后予以處死，檢測指標同空白對照組。干預時，剪去左膝關節周圍的鼠毛，溫水擦拭干凈，選取大鼠膝關節股骨下段外側平坦處，滴上中藥萃取液約0.5 mL，放置超聲探頭，使與皮膚接觸。1次/d，30 min，連續干預2周。超聲促透組打開超聲電導儀，參數設定：超聲頻率：10 kHz，功率30 W，透入速率：30～60 μg，30 min/次。中藥外敷組保持超聲電導儀的關閉狀態。

1.4 動物造模 根據前交叉韌帶切除的經典方法制備大鼠KOA模型。10%水合氯醛腹腔注射麻醉，髕旁內側入路，顯露大鼠髕骨后將髕骨向外側脫位，過屈膝關節顯露前交叉韌帶，直視下眼科剪切斷前交叉韌帶，行抽屜試驗確認前交叉韌帶完全切斷，止血，髕骨復位，沖洗創口，絲線逐層閉合關節腔。術后3 d，每日大鼠臀大肌肌注10萬青霉素以預防感染。術后強迫大鼠在籠外運動2 h/d。

1.5 指標檢測 空白對照組大鼠術后2、4、8周分別按照隨機區組法編號隨機隨機選取6只進行指標檢測，包括大鼠膝關節軟骨組織形態學變化、Mankin’s評分以及血清中CTX-Ⅱ、COMP及MMP-3含量變化。

1.5.1 膝關節軟骨組織形態學檢測及Mankin’s評分 大鼠禁食24 h，麻醉下打開左膝關節，使用銳利刀片切取股骨內側髁軟骨，用10%中性福爾馬林溶液固定后，脫鈣、切片，作蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察。軟骨組織學應用Mankin’s評分予以評價(Mankin’s評分見表1)，并按照評分對軟骨的破壞程度進行分級[4]：(0～1分為正常軟骨，1～5分為輕度軟骨損傷，6～9分為中度軟骨損傷，10～14分為重度軟骨損傷)

表1 Mankin’s評分

1.5.2 血清中CTX-Ⅱ、COMP及MMP-3含量檢測 大鼠麻醉后，胸前區去毛，探測心尖搏動最強處標記并消毒，應用1 mL注射器，將針頭對準此處，深度約3 mm，回血后即可緩緩地抽血約1 mL。靜置后離心，用移液器吸取血清，放在EP管里，-20 ℃保存待檢，采用采用酶聯免疫吸附法(ELISA)對其進行檢測。

2 結果

超聲促透組4周組與中藥外敷組8周組各死亡1只大鼠，不列入最終統計。

2.1 軟骨組織形態學觀察 大鼠正常膝關節軟骨：軟骨表面光滑，細胞排列正常，分布均勻，層次正常，軟骨細胞無簇集，染色正常，潮線清晰，Mankin’s評分0～1分(見圖1A)。

空白對照組(2周)：軟骨表面不平整，輕度染色，軟骨細胞排列出現無序，數量增多，潮線正常，Mankin’s評分2～5分(見圖1B)。

空白對照組(4周)：軟骨表層裂隙形成，裂隙達移行層，軟骨細胞排列無序，層次不清，可見簇集的軟骨細胞，細胞輕度染色，可見潮線不完整，Mankin’s評分6～9分(見圖1C)。

空白對照組(8周)：軟骨破損深達骨質鈣化層，細胞簇集明顯，排列紊亂，層次不清，深染或失染，潮線不完整，Mankin’s評分10～14分(見圖1D)。

超聲促透組與空白對照組相比，在2周組和4周組可以觀察到一定差別：2周組軟骨表面不平整，細胞染色正常，軟骨細胞排列基本正常，層次清楚，潮線完整(見圖1E)；Mankin’s評分降低，二者相比有統計學意義(P<0.05)；4周組軟骨表層可見不明顯裂隙，裂隙較淺，細胞輕度染色，軟骨細胞排列較為規則，細胞簇集程度減輕，潮線完整(見圖1F)，Mankin’s評分降低，二者相比有統計學意義(P<0.05)；

中藥外敷組與空白對照組相比，在2周時意義較大：2周組軟骨表面粗糙，細胞染色正常，軟骨細胞排列尚可，層次清晰，潮線完整(見圖1G)，Mankin’s評分降低，二者相比有統計學意義(P<0.05)；超聲促透組與中藥外敷組相比，2、4周組細胞染色正常，簇集不明顯，排列尚可，Mankin’s評分進一步減少，以2周組最為顯著，二者相比具有統計學意義(P<0.05)。(中藥外敷組4周組見圖1H)見表2。軟骨組織形態學見圖1。

表2 Mankin’s評分

注：與空白對照組相比，*P<0.05;與中藥外敷組相比，△P<0.05。

圖1 軟骨組織形態學

2.2 CTX-Ⅱ含量變化 2、4周時，超聲促透組與空白對照組相比，含量降低，二者相比有明顯意義(P<0.01)；中藥外敷組含量低于空白對照組，二者相比有統計學意義(P<0.05)；8周時，超聲促透組與空白對照組相比，CTX-Ⅱ含量較少，二者相比有統計學意義(P<0.05)，其作用優于中藥外敷組(P<0.05)。(結果見表3)。

表3 Ⅱ型膠原羧基端肽(CTX-Ⅱ)含量變化

注：與空白對照組相比,*P<0.05,**P<0.01；與中藥外敷組相比,△P<0.05。

2.3 COMP含量變化 2周時，超聲促透組和中藥外敷組與空白對照組相比含量均明顯減少(P<0.01)；4周時，超聲促透組與空白對照組相比，COMP含量明顯減少(P<0.01)，這一作用優于中藥外敷組，二者相比有統計學意義(P<0.05)；8周時，超聲促透組和中藥外敷組與空白對照組相比無明顯統計學意義。(結果見表4)。

表4 軟骨寡聚基質蛋白(COMP)的含量變化

注：與空白對照組相比,*P<0.05,**P<0.01；與中藥外敷組相比,△P<0.05。

2.4 MMP-3含量變化 2周時，超聲促透組和空白對照組相比，MMP-3含量降低，二者比較有統計學意義(P<0.05)；4周時超聲促透組與空白對照組相比，MMP-3含量明顯減少(P<0.01)，這一作用優于中藥外敷組(P<0.05)；8周時，超聲促透組含量低于空白對照組和中藥外敷組，但無統計學意義。(結果見表5)。

表5 基質金屬蛋白酶-3(MMP-3)含量

注：與空白對照組相比,*P<0.05,**P<0.01；與中藥外敷組相比,△P<0.05。

3 討論

本動物實驗利用前交叉韌帶切除的經典方法成功制備出大鼠不同程度的KOA模型；通過低頻超聲促透通絡止痛中藥對大鼠模型進行干預并與中藥的普通外敷法進行比較，從大鼠膝關節軟骨組織形態學以及軟骨基質的相關降解產物Ⅱ型膠原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、軟骨寡聚基質蛋白(COMP)及基質金屬蛋白酶-3(MMP-3)等指標對其進行觀察，以闡述低頻超聲促透通絡止痛中藥對不同程度KOA的作用效果和作用機制。

3.1 低頻超聲作用機理 低頻超聲又稱為長波超聲，它的頻率低但波長較長，目前所公認的頻率在20～80 kHz，與高頻超聲相比，低頻超聲在從近場向遠場傳遞時作用更強，其有效的治療空間在遠場，即在同樣的聲壓下，超聲頻率越低，質點所達到的組織越深，這便是低頻超聲效應的關鍵點，低頻超聲些大多數的能量可以被組織所吸收而發揮效應[5]。有學者[6]應用低頻超聲(20 kHz)和高頻超聲(850 kHz的)研究其對脫脂牛奶腸桿菌的失活作用，發現低頻超聲作用距離遠長于高頻超聲，可以顯著使腸桿菌失活，而高頻超聲無法滅活腸桿菌。

Mitragotri早在1995年即提出超聲介導下藥物透入的機理，包括空化效應(氣泡的產生震動)，對流傳遞，局部熱效應(溫度增高)和力學效應(超聲所致力學變化)等。郭芳[7]等也在其論著中敘述了低頻超聲的作用機制，并將其總結為空化效應和非空化效應。通過上述作用，超聲波可以增加表皮、真皮等組織和細胞的通透性，強化藥物吸收，有助于增加中藥有效成分中大、中分子的吸收率，在傳統外用法的基礎上，借助物理和生物方法近一步改善療效。另外，國內也有學者發現[8]低頻脈沖超聲能夠作用于關節軟骨、關節囊和滑膜，將其作用機制總結為促使局部毛細血管擴張，促進血液循環，改善細胞功能，加速體內化學反應，軟化局部組織，增強膠體通透性，影響酶及生物活性物質的活性與含量，加強組織新陳代謝，調節組織酸堿度改善pH值，提高痛閾等，通過上述作用而達到治療效果。

3.2 軟骨組織病理學 KOA最主要的發病機制是關節軟骨的退行性改變[9-10]。軟骨組織病理學最常用的是Mankin’s評分，該評分中對軟骨組織的結構、細胞、光鏡下的染色以及潮線的完整性進行了分級和評價，在基礎實驗中使用廣泛，具有很高的準確性[11-12]。應用這一評分，可以反映出軟骨病變的程度(0～1分為正常軟骨，1～5分為輕度軟骨損傷，6～9分為中度軟骨損傷，10～14分為重度軟骨損傷)。在實驗中我們發現隨著時間的發展，大鼠膝關節軟骨組織學評分越來越高，顯示了與時間的正相關性，這是因為前交叉韌帶的剪斷改變了膝關節的生物力學，膝關節在失衡狀態學每天進行足量的運動即可以誘導KOA的發生，而這種病理發展也與時間關系密切。超聲促透組對于2周、4周大鼠軟骨組織病理學的改善作用比較明顯，這一作用明顯強于中藥外敷組，光鏡下觀察到，對于此時軟骨組織的改善，大多集中在軟骨細胞，對于細胞的數量、大小、排列及染色等有不同程度的改善，但對于軟骨的結構，如表面的裂隙、潮線的完整性則作用不大；此外，對于8周組大鼠無明顯作用，這也正與肉眼觀察軟骨的結果一致，這可能是由于軟骨基質的結構發生重塑、細胞發生完全變性后，普通方法難以阻止這一病理發展所致，而在其完全變性前，應用該療法能夠改善膝關節內環境，從而減緩軟骨的退變、促進軟骨細胞的修復。

3.3 軟骨基質相關降解產物 KOA的主要病位在關節軟骨，軟骨組織包括軟骨細胞和細胞外基質，其中細胞外基質約占99%，主要是由Ⅱ型膠原和蛋白多糖構成，這兩種物質在KOA的發病過程中占有重要的地位；軟骨中細胞外基質的合成與降解處于一個平衡的動態過程，一旦這種平衡被打破，其合成降解代謝不平衡，則會導致軟骨變性，而這也是KOA發生的直接原因。Ⅱ型膠原羧基端肽(CTX-Ⅱ)本身位于Ⅱ型膠原羧基的末端，因此而得名，Ⅱ型膠原發生降解時產生出Ⅱ型膠原羧基端肽，可以在尿液、血清等體液中檢測到，具有較高的敏感度。Christgau S[13]等通過觀察骨關節炎患者尿液中Ⅱ型膠原羧基端肽的含量，發現其具有較高的精確度，與正常人相比有明顯意義，能夠很好的監測關節軟骨的新陳代謝。李昊[14]等利用關節鏡對59名KOA患者進行軟骨損傷的分級，結果發現患者血清中Ⅱ型膠原羧基端端肽的含量與軟骨損傷的程度成正相關，進一步驗證了該物質對KOA的診斷價值。本實驗中隨著時間的推移，空白對照組大鼠血清中CTX-Ⅱ含量呈增長趨勢，說明軟骨基質的降解近一步嚴重，而超聲促透組可以很好的降低該物質的含量，在2、4、8周時均能夠發揮作用，且這種作用要明顯優于常規的中藥外敷法，說明該療法可能抑制或減緩了軟骨基質的近一步破壞，降低了Ⅱ型膠原的降解率。軟骨寡聚基質蛋白(COMP)是軟骨細胞外多糖蛋白的一種，是細胞外基質的重要組成成分，該物質含量的變化可以反映出軟骨的破壞程度，目前對其研究較多。國外有學者[15]對KOA患者血清中COMP的含量進行了研究，將患者膝關節X線片的K-L分級與血清中COPM含量做比較，發現COMP含量與X線嚴重程度呈正相關，另外，該研究還發現COMP的含量患者滑膜炎癥的程度呈正相關，但人體中COMP的含量并不穩定，目前只能作為骨關節炎的輔助診斷。本實驗中，空白對照組大鼠在2、4、8周時COMP呈增長趨勢，2、4周時超聲促透組大鼠血清COMP含量明顯降低，且這一作用效果要強于中藥外敷組，但8周時作用卻不明顯，這可能是由于病程較長，大鼠滑膜炎性反應減輕所致。基質金屬蛋白酶-3(MMP-3)，是軟骨基質降解過程中最重要物質之一，MMP-3和TIMP-1的比例存在一定關系，這種關系的平衡保持著軟骨的正常狀態，但在某些致病因素的作用下，MMP-3的含量增高，能夠加速軟骨基質的降解，因此，MMP-3的含量可以間接反應出軟骨損傷的狀態，黃勝[16]等發現家兔骨關節炎模型的關節液中，MMP-3的含量與病程的發展呈正相關，張金山[17]等也發現在KOA患者血清中MMP-3的含量與病情呈呈正相關，重度患者MMP-3的含量遠大于輕、中度患者，這也與本實驗結構相吻合，本實驗中，隨著大鼠KOA退變的程度增加，血清中MMP-3的含量也增加。但也有學者認為，MMP-3的含量在軟骨降解最活躍的時候最高，而在后期軟骨破壞過多時含量反而下降。在實驗中，超聲促透組能夠明顯降低大鼠血清中MMP-3的含量，這種作用要強于中藥外敷組，但主要體現在輕度和中度KOA大鼠模型。

本實驗中我們發現低頻超聲促透通絡止痛中藥能夠很好的減緩輕、中度KOA大鼠軟骨的退變，降低大鼠血清中Ⅱ型膠原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、軟骨寡聚基質蛋白(COMP)及基質金屬蛋白酶-3(MMP-3)的含量，從而減緩或抑制軟骨基質的過度降解，除了Ⅱ型膠原羧基端肽(CTX-Ⅱ)含量的降低出現在所有大鼠中，COMP和MMP-3含量的降低主要體現在輕、中度大鼠模型中，能夠從軟骨基質這一角度解釋低頻超聲促透通絡止痛中藥對于KOA的作用機制；而上述作用的效果均強于中藥的普通外敷法。

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(2014-06-11收稿 責任編輯：徐穎)

世界中醫藥學會聯合會中醫藥文化專業委員會籌備會召開

2015年3月27日，在北京中醫藥大學召開了世界中醫藥學會聯合會中醫藥文化專業委員會籌備工作會議，參加此次會議的有世界中醫藥學會聯合會的領導，中醫藥文化專業委員會籌備組成員，以及各地中醫藥學術組織領導、各老字號藥企領導共30多人。北京中醫藥大學國學院作為中醫藥文化專委會會長單位，主辦了此次籌備會。會議由籌備會秘書長、健民集團總裁徐勝先生主持。世界中醫藥學會聯合會學術部關濤主任介紹了世界中醫藥學會聯合會專業委員會組織管理規定、籌備成立工作的程序，并且就一些關鍵性問題作了說明。

世中聯中醫藥文化專業委員會籌備組組長、北京中醫藥大學國學院院長張其成教授作了籌備工作報告，他提出中醫藥文化是中醫藥精神文化、行為文化、物質文化的總和，具體研究領域包括中醫藥文化資源的挖掘、保護、利用與開發、中醫藥文化的學術研究與人才培養、中醫藥文化的國際傳播與應用。中醫藥文化資源十分豐厚，可分為地域中醫藥文化、中藥企業中醫藥文化、中醫院中醫藥文化、中醫院校中醫藥文化、民族醫藥文化、儒釋道醫藥文化等等。中醫藥文化專委會今后的工作任務將圍繞上述領域開展學術交流、項目合作、人才培養、國內國際傳播、社會服務等。

針對張院長的報告與中醫藥文化專業委員會的籌備建設工作，與會專家紛紛發言，建言獻策。國學院副院長李良松就佛醫學問題在中醫藥文化傳播中的重要性作了發言；北京市道教協會副會長王成亞道長就道醫、道藥的獨特性作了發言；北京大學醫學人文研究院賴立里女士就文化人類學與中醫藥文化的關系作了發言；上海中醫藥大學李海英副總編就中醫藥文化在海外的傳播作了發言；澳大利亞首都中醫健康中心董事長王海東就中醫藥文化在澳洲的推廣作了發言；一些老字號藥店的領導也就此表示了自己的決心，如天津中新醫藥集團達仁堂制藥廠廠長李燕玨、山西廣譽遠國藥有限公司董事長張斌、蘭州眾聯醫藥有限公司唐繼軍董事長、吉林省恒愛醫藥董事長王懷偉等，大家一致認為，老字號藥店的傳承離不開中醫藥文化的引領，而世中聯中醫藥文化專委會的成立，正好給各大藥店、藥廠的進一步發展提供了一個學術平臺與交流平臺，非常期待專委會能夠如期順利成立。

會議還討論了中醫藥文化專業委員會人員構成及成員招募工作、成立大會會議計劃及安排、未來工作規劃等相關事宜。

Effect of CTX-Ⅱ,COMP and MMP-3 on Rat Models with Knee Osteoarthritis by Tongluozhitong Herbs Through Low-Frequency Ultrasound Transdermal Penetration

Qi Qingxue1,Ma Yufeng2,Wu Ji1,Zheng Haoyun1,Lang Song1,Yang Lili1,Zhao Jun1,Zhang Dong1,Wang Qingfu2

(1BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029，China; 2TheThirdAffiliatedHospitalofBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective: To investigate effect of cartilage morphology and CTX-Ⅱ,COMP and MMP-3 in serum on varying degrees of knee osteoarthritis in rats treated with Tongluozhitong herbal with low-frequency ultrasound transdermal penetration and explain the mechanism and advantage of the therapy.Methods: The rat models of KOA were built by the classic method of cutting off anterior cruciate ligament.SD rats were randomly divided into three groups: control group,the group of ultrasonic transdermal penetration and herbal topical groups.Left knees of rats were models.The control group were normally fed,and were randomly selected to extract serum and detect cytokines at 2nd/4th/8th weeks after surgery and the control group were observed on femoral condylar cartilage morphology and were evaluated by cartilage Mankin's score.Ultrasonic transdermal penetration group and herbal topical group were randomly selected for intervention treatment at the2nd/4th/8th weeks after surgery,1/d,30min,2 weeks.After 2 weeks,the data was recorded which was the same as the control group.Results: Cartilage morphology of the control group were changed significantly at 2nd/4th/8th weeks after modeling and cartilage Mankin's score was positively correlated with increased time and CTX-Ⅱ,COMP,MMP-3 in serum increased.Compared with the control group,cartilage morphology and Mankin's score at 2nd/4th weeks changed (P<0.05).Its role was better than topical medicine group:.Mankin's score decreased significantly at 2nd week(P<0.05).Compared with the control group,CTX-Ⅱof ultrasonic transdermal penetration group decreased sharply at 2nd/4th/8th weeks (P<0.05),and it was significantly better than herbal topical groups.Compared with the control group,COMP of ultrasonic transdermal penetration group decreased sharply at 2nd and 4th weeks (P<0.05).Compared with the herbs topical group,COMP of ultrasonic transdermal penetration group decreased at 4th week (P<0.05).Compared with the control group,MMP-3 of ultrasonic transdermal penetration group decreased at 2nd/4th weeks and there was diversity(P<0.05).Compared with the herbs topical group,MMP-3 of ultrasonic transdermal penetration group decreased at 4 weeks (P<0.05).Conclusion: The low-frequency ultrasound transdermal Penetration Tongluozhitong herbs can effectively Preventing and slowing the Progression of the disease.It may be reducing cartilage matrix-associated cytokines CTX-Ⅱ,COMP and MMP-3 in serum,slowing the degeneration of cartilage matrix; but there is no obvious effect on cartilage of severe KOA.Compared with the traditional method of herbs topical,it has the advantages of rapid onset and efficacy.

Knee osteoarthritis; Low-frequency ultrasound; Tongluozhitong herbs; Cartilage matrix; Cartilage morphological

2012年北京市中醫藥外治法項目(編號：303-02-71)

戚晴雪(1984—)，男，河北省張家口人，在讀博士生

王慶甫(1956.10—)，男，碩士學歷，教授，博士生導師，研究方向：中醫藥防治骨關節病，Tel：(010)52075251，E-mail：qingPu-wang@sohu.com

R285.6；R684.3

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.04.024