丹參總酚酸提取物磷脂復合物制備工藝研究*

史亞軍 王 卉 鄧 輝 許 靜 張小飛

陜西中醫學院藥學院(咸陽 712046)

·方藥縱橫·

丹參總酚酸提取物磷脂復合物制備工藝研究*

史亞軍 王 卉 鄧 輝 許 靜 張小飛

陜西中醫學院藥學院(咸陽 712046)

目的：考察丹參總酚酸提取物與大豆卵磷脂形成磷脂復合物的最佳制備工藝。方法： 以丹參總酚酸提取物與磷脂結合百分率為評價指標，采用單因素考察和正交設計試驗系統研究了復合溶劑類型、藥物與磷脂比例、提取物的濃度、復合反應時間、復合時的溫度等因素對磷脂復合物形成的影響。結果：確定了以甲醇作為反應溶劑，丹參總酚酸與大豆卵磷脂比例為1∶2，丹參總酚酸投料濃度為3mg/mL，在60℃條件下復合1h為較佳條件。結論：復合物的形成受反應溶劑、反應物濃度和溫度的影響較大；優選的工藝可以作為丹參總酚酸提取物磷脂復合物的制備。

丹參[1]為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根莖，是臨床上較為常用的活血化瘀類中藥，具有活血祛瘀，通經止痛，清心除煩，涼血消癰之功效。丹參的主要有效成分為水溶性成分丹參總酚酸類,現代研究表明，丹參總酚酸對于組織缺血再灌注損傷有著顯著地保護作用[2-3]。臨床研究提示，丹參對中風有著明顯的治療作用[4]。丹參總酚酸提取物雖然水溶性良好，但其脂溶性較差，導致生物利用度較低，影響了其臨床療效的充分發揮。磷脂復合物是近年來出現的一種改性技術，已被廣泛應用于中藥、天然藥物有效成分的改性，該技術能明顯改善藥物的脂溶性而提升生物利用度，進一步拓展藥物的臨床用途[5]。本文通過系統研究，將丹參總酚酸提取物制成磷脂復合物，為拓展其制劑學用途奠定基礎。

1 儀器與試藥 HJ-4B多頭磁力加熱攪拌器；AR1140型電子天平；RE-3000旋轉蒸發器；布氏漏斗抽濾裝置；SHB-Ⅲ循環水式多用真空泵。丹參總酚酸提取物(自制)，大豆卵磷脂大豆卵磷脂(1003E03，PC77.9%，上海愛康精細化工有限公司)，四氫呋喃、甲醇、無水乙醇、氯仿等均為分析純。

2 方法與結果 2.1 丹參總酚酸提取物制備工藝 取丹參，切成小段，加水于80℃提取兩次，合并提取液，濾過，濾液于60℃減壓濃縮至相對密度為1.18～1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量為70%，靜置12h，取上清液，減壓回收乙醇，濃縮干燥，即得[6]。

2.2 制備方法及工藝評價 磷脂復合物的形成是將被改性藥物與磷脂按一定比例在非質子傳遞類有機溶劑中(常采用無水乙醇、四氫呋喃、甲醇等)，通過一定的復合反應條件干預(如加熱、攪拌)，使其二者發生結合而形成磷脂復合物(介于物理結合與化學結合的中間態結合)，再于減壓低溫條件下除去反應溶劑或采用非溶劑沉淀法分離而獲得干燥固體磷脂復合物[7]。

磷脂復合物的復合效果通常采用復合率進行評價，即利用被復合的藥物在氯仿中難溶，而形成的磷脂復合物在氯仿中易于溶解，向形成的磷脂復合物(精密稱定)中加入適量的氯仿，室溫下攪拌使其溶解，置于布氏漏斗中抽濾(濾紙預先干燥并精密稱重)，將濾紙與沉淀物干燥至恒重，精密稱量。藥物的反應投料量與沉淀量(減去濾紙重量)的差值即為藥物和磷脂發生復合的藥物量，計算藥物與磷脂的復合百分率，復合率的計算公式為：復合率(%)=(W1-W2)/W1×100%(W1為被復合藥物初始投入量，W2為沉淀量)

2.3 單因素實驗 根據復合反應發生過程，影響復合率的因素主要包括復合溶劑類型、復合反應時間、復合時體系的溫度、藥物濃度、投料比等，采用單因素試驗對上述各因素進行篩選，確定主要影響因素。

2.3.1 反應溶劑的考察:取丹參總酚酸1g，大豆卵磷脂3g，反應溫度為55℃，反應時間為1h，丹參總酚酸提取物的濃度為3mg/mL，對反應溶劑進行優選，結果表明，四氫呋喃和無水乙醇的復合率分別為74.36%和66.02%，而甲醇的復合率為92.52%，因此選擇以甲醇為復合溶劑。

2.3.2 藥物與磷脂比例的考察:以甲醇為反應溶劑，其余條件同上，測定丹參總酚酸提取物和磷脂質量比為1∶1，1∶2，1∶4時的復合率，結果提示二者的投料比對復合率有一定的影響，磷脂比例越高，復合率越高，但超過2∶1時，復合率變化較小。

2.3.3 丹參總酚酸提取物濃度的考察:以甲醇為復合溶劑，藥物和磷脂的投料設定為1∶3進行復合，其余反應條件同上，設定反應體系中丹參總酚酸提取物的濃度為3、6、9mg/mL，復合率分別為94.08%、81.03%和62.21%，提示隨著體系中丹參總酚酸提取物濃度的增加，復合率呈下降趨勢。

2.3.4 復合時的溫度和復合時間的考察:復合條件同上，結合磷脂的熱穩定性，確定考察反應溫度為40、50、60℃，反應時間分別考察0.5、1、2、3h，測定復合率，結果表明，溫度對復合率有較大的影響，溫度越高復合率越大，60℃時復合率達92.86%。反應時間結果提示，復合反應時間在0.5～3h內影響較小。

表1 正交試驗因素與水平表

2.4 正交設計試驗 單因素試驗結果表明，反應溶劑對復合有著顯著影響，根據實驗結果選擇甲醇作為復合溶劑，其余幾個因素均有一定程度的影響，采用正交試驗對投料比例(w/w，A)、丹參總酚酸濃度(mg/mL， B)、反應溫度(℃，C)、復合時間(h，D)進行優化，根據單因素試驗結果，設計正交表設計見表1，試驗結果和方差分析結果分別見表2、3。

表2 正交試驗結果

表3 方差分析表

注： F1-0.50(2，2)=19.00，F1-0.10(2，2)=99.0

正交分析表明，B、C因素的影響均有顯著性，結合直觀分析，參考單因素實驗結果，確定丹參總酚酸與大豆卵磷脂的投料比為為1∶2(w/w)、丹參總酚酸提取物的濃度確定為3mg/mL,于60℃條件下反應1h。

2.5 驗證試驗 對上述正交試驗優化的最佳工藝條件進行驗證，按照上述條件進行3次復合反應，測定復合率，結果見表4，結果提示，優選的工藝具有較高而穩定的復合率，表明確定的最佳復合工藝穩定可行。

表4 工藝的驗證試驗

3 討 論 大豆卵磷脂對溫度較為敏感，高于70℃條件下，磷脂獨極易氧化，因此反應溫度設定在70℃以下。大豆卵磷脂極易吸濕，因此，干燥完全后應及時密封保存以降低吸濕率。反應溶劑的選擇，文獻中多采用四氫呋喃，考慮到溶劑的毒性和復合率，但本研究表明，四氫呋喃復合率較低，且毒性較強，在實驗中，可明顯觀察到丹參提取物在其中溶解度較低，而磷脂復合物形成的本質是磷脂和藥物的分子狀態下的一種弱結合，不能完全溶解會直接導致提取物中藥物分子與磷脂分子的結合，導致復合率低，而以甲醇為溶劑復合效果良好。

磷脂復合物能顯著地改善藥物的脂溶性，改善藥物的油水分配系數，特別是適用于脂溶性較差藥物原料的改性，顯著提高藥物生物利用度，同時，磷脂作為一種機體內源性物質，可有效增加藥物的順應性，減少藥物不良反應。結果表明，該技術能明顯改善其生物利用度[8]，目前尚沒有對丹參總酚酸進行磷脂復合物改性的研究，而有效部位作為中藥制劑投料的特有形式，對提取物脂溶性的改善，可有效提高丹參有效成分血管外給藥的生物利用度，為高效新制劑的研制奠定了物質基礎。

[1] 趙 娜，郭治昕，趙 雪，等.丹參的化學成分與藥理作用[J].國外醫藥植物藥分冊，2007，22(4)：155-160.

[2] 陳 雯，郜鳳香，郭麗麗，等.丹參總酚酸對心肌缺血再灌注損傷保護作用的機制研究[J].中國實驗方劑學雜志，2013,19(12)：242-245.

[3] 張鐵華，楊 濤，張永利，等.丹參注射液對兔視網膜缺血再灌注損傷后保護作用[J].陜西中醫，2013,34(2)：241-242.

[4] 韓景獻，韓 力.注射用丹參總酚酸治療缺血性中風瘀血阻絡證臨床研究[J].天津中醫藥，2005，22(4):287-289.

[5] 史亞軍，吳品江，許潤春，等.黃芩苷磷脂復合物基本性質研究[J].中草藥，2012，43(1)：78-82.

[6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版[S].中國醫藥科技出版社，2010：373-374.

[7] 廉 潔，王伯初.藥物磷脂復合物工藝評價標準及應用研究進展[J].生物技術通訊，2006,17(5)：830-833.

[8] 劉莎莎，李 文，李俊松，等.磷脂復合物改善丹參素口服生物利用度的而研究[J].南京中醫藥大學學報，2014,30(2)：164-167.

(收稿2014-12-11;修回2015-01-10)

Research on preparation of salvia total phenolic acids-phospholipid complex

Pharmacy Faculty, Shaanxi University of Chinese Medicine(Xianyang 712046)

Shi Yajun Wang Hui Deng Hui et al

Objective: To study the optimum conditions for the formation of Salvia total phenolic acids complex with phospholipids.Method: With combined percentage as evaluation index，adopt single factor and orthogonal design test methods study the following factor: compound solvent type, drugs and phospholipid proportion, the concentration of the extract, reaction time and the temperature.Results: The optimized preparation conditions for Salvia total phenolic acids phytosomes were obtained as follows: Solvent was mathanol.The ratio of Salvia total phenolic acids to phospholipid was 1 to 2.Temperature was 60℃ .Reaction time was 1 h. Salvia total phenolic acids concentration was 3mg/mL. Conclusion: The formation of Salvia total phenolic acids complex with phospholipid is greatly influenced by the solvent, concentration and temperature; the optimized preparation is feasible and stable.

@Total salvianolic acids @Phospholipld complex Orthogonal test

*陜西省科技廳科技攻關計劃項目(2013K12-07-03)

陜西中醫學院創新基金項目(14XJZR01)

@丹參總酚酸 @磷脂復合物 正交試驗

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.05.042

陜西省重點科技創新團隊項目(2013KCT-26)