延齡草提取物對小鼠鎮靜催眠作用的實驗研究*

孫艷平 汪興軍 張 彥

西安醫學院 (西安710021)

延齡草提取物對小鼠鎮靜催眠作用的實驗研究*

孫艷平 汪興軍 張 彥

西安醫學院 (西安710021)

目的：研究延齡草提取物對小鼠鎮靜催眠作用。方法：通過小鼠直接睡眠法、自主活動能力測定實驗、與閾下劑量及閾上劑量的戊巴比妥鈉協同睡眠等實驗方法，確定延齡草提取物的鎮靜催眠作用。結果：延齡草提取物能減少小鼠自主活動能力和行為，增加由閾下劑量及閾上劑量戊巴比妥鈉誘導的小鼠入睡百分率和睡眠時間。結論：延齡草提取物對小鼠有一定鎮靜催眠作用。

延齡草( Trillium tschonoskii Maxim)系百合科延齡草屬植物，是在民間應用的藥物新資源，其藥用部位有根莖和果實。延齡草的根莖中有效成分以皂苷為主，同時還含有黃酮苷、苯丙素苷、倍半萜苷等類型的化合物。延齡草屬植物是多年生草本植物，全世界約有50余種，我國主要分布有3種，即延齡草(Trillium tschonoskii Maxim．)、西藏延齡草(Trillium govanianumwaiie Xroyie．) 和吉林延齡草(Trillium kamtschicum Pa11．)，主產于湖北、陜西、西藏、云南、四川等省區。此類植物主要生長在1600～3200米高海拔環境，喜陰、不耐早、不耐澇且不耐酸堿，野生資源分布較少，多以人工栽培為主[1-3]。

延齡草性平、味甘，其功效為鎮靜安神、解毒、活血止血,具有降壓、抗炎鎮痛、調節免疫、抗衰老、抗氧化等藥理作用。臨床上可用于治療多種內科外傷性疾病，如頭暈目眩、腦震蕩后遺癥、失眠多夢、神經衰弱、高血壓、跌打損傷及外傷出血等癥[4-6]。本文擬采用小鼠直接睡眠法、自主活動能力測定實驗、與閾下劑量及閾上劑量的戊巴比妥鈉協同睡眠等實驗方法，確定延齡草提取物的鎮靜催眠作用。

1 材料與方法 1.1實驗藥物 延齡草( Trillium tschonoskii Maxim)干燥根莖，采集于海拔約1700m秦嶺太白山脈，由西安醫學院生藥教研室汪興軍老師鑒定為延齡草屬植物延齡草的干燥根莖。制備方法：延齡草根莖加入8倍量的水，浸泡4h后，煎煮1h，過濾，再加入4倍量的水，煎煮0.5h，合并兩次濾液，即得延齡草根莖水煎液，于 60 ℃ 減壓濃縮至浸膏狀。將所得浸膏充分混勻后取其適量 3 份，分別加入蒸餾水配成含生藥為 1.5、1.0、0.67 g/mL的藥物濃度，備用；酸棗仁飲片，西安興盛飲片廠，批號：120109，煎煮處理方法同上，配制成含生藥1.0g/mL的藥物濃度；戊巴比妥鈉(AR)，中國醫藥(集團)上海化學試劑公司，批號120311，用生理鹽水配成 4、5、6 mg/mL 溶液，用前新鮮配制；陽性對照藥地西泮片(批號:1112016)，臨用前研磨均勻，并與0.5% 羧甲基纖維素鈉水液配制成濃度為 3.5 mg/mL的分散溶液。

1.2 動 物 昆明種小鼠，體重(22±2.2)g，雌雄各半，第四軍醫大學實驗動物中心提供。飼養環境:西安醫學院基礎醫學與轉化研究所，動物分籠飼養，保持 12h晝夜節律，室溫( 22±1)℃，正常飲食與光照，實驗前測自主活動能力，按自主活動次數均勻分組。

1.3 儀 器 YLS-1A多功能小鼠自主活動記錄儀(濟南益延科技發展有限公司)，秒表，電子秤。

1.4 實驗方法 1.4.1 實驗分組與給藥:實驗動物小鼠，雌雄各半，隨機分成6組，每組20只，3個給藥組灌胃給予延齡草溶液 (低劑量13.4g/kg、中劑量20g/kg和高劑量30g/kg)、陽性對照組給予地西泮分散液(劑量為70mg/kg)和中藥對照組給予酸棗仁溶液(劑量為20g/kg)、陰性對照組給予相同容量的生理鹽水。

1.4.2 直接睡眠實驗:各組動物分組和給藥處理方法同“1.4.1”項，連續灌胃7d，觀察各組小鼠的睡眠發生率、鎮靜率。以小鼠發生靜臥 15s或以上時間的現象來判斷藥物有鎮靜效果，以翻正反射消失(即將小鼠置于背臥位時，1 min內不能翻正)為判斷指標，表示小鼠進入睡眠狀態。實驗應在安靜、通風、室溫的環境下進行[7]。鎮靜率=靜臥小鼠數/實驗動物數×100%;入睡率=入睡小鼠數/實驗動物數×100%。

1.4.3 對小鼠自主活動的影響:實驗前首先要篩選出各組小鼠的自主活動次數無顯著性差異，即選擇5min 內自主活動數在 120 次以上的正常小鼠，并將符合條件的小鼠隨機分配到各實驗組，各組動物分組與給藥處理同“1.4.1”項，末次灌胃給藥 50min 后，將小鼠依次放入記錄儀中，適應環境 5min后，記錄 5min 內的自主活動次數。實驗在安靜、通風的環境中進行[7-8]。

1.4.4 與閾下劑量戊巴比妥鈉協同鎮靜作用實驗:實驗動物分組和給藥處理方法同“1.4.1”項，連續灌胃7d, 最后一次灌胃50 min后,各組小鼠腹腔注射劑量為30mg/kg的戊巴比妥鈉(經預實驗測得的，90%～100% 的小鼠發生翻正反射不消失的最大劑量)，記錄小鼠30min 內鎮靜率、入睡百分率，判斷方法同1.4.2。同時記錄入睡動物的睡眠時間(以翻正反射消失至恢復這段時間為動物睡眠時間)。實驗在安靜、通風、室溫環境下進行[7-8]。

1.4.5 與閾上劑量戊巴比妥鈉協同催眠作用實驗:實驗動物分組和給藥處理方法同“1.4.1”項，連續灌胃 7d, 最后一次灌胃50 min后, 各組小鼠腹腔注射劑量為40mg/kg的戊巴比妥鈉(經預實驗測得的，100% 的小鼠發生翻正反射消失的最小劑量)，判斷方法同1.4.4，記錄動物睡眠潛伏期和睡眠時間。實驗在安靜、通風、室溫環境下進行[7-8]。

2 實驗結果 2.1 直接睡眠實驗結果 直接睡眠實驗結果見表1，表明延齡草給藥組與陽性對照組均有明顯的鎮靜作用，但無睡眠現象發生，入睡率均為0，各組間無明顯差異。

表1 延齡草對小鼠直接睡眠實驗結果 (±s,n=20)

2.2 對小鼠自主活動的影響實驗結果 如表2所示，延齡草各給藥組具有顯著的鎮靜作用。與陰性對照組相比，低劑量與中劑量給藥組可顯著減少小鼠的自主活動能力(P<0.05)，高劑量藥物組可極顯著減少小鼠的自主活動能力(P<0.01)，鎮靜催眠效果與酸棗仁組相當。

表2 延齡草提取液對小鼠自主活動的影響(±s,n=20)

注：△與陰性對照組比較，有顯著性差異(P<0.05)；▲與陰性對照組比較，有極顯著性差異(P<0.01)

2.3 延齡草提取液與閾下劑量戊巴比妥鈉協同鎮靜作用的實驗結果 由表3可見，與陰性對照生理鹽水組相比，各給藥組、中藥酸棗仁組、陽性對照地西泮組均顯著增加小鼠的入睡百分率，顯著縮短小鼠的睡眠潛伏期，且均能顯著延長睡眠時間，說明各組受試藥物有協同戊巴比妥鈉鎮靜作用。與陽性對照地西泮相比，低劑量組的藥效弱于對照組，且有顯著性意義(P<0.05)，高劑量給藥組、中藥酸棗仁組與地西泮組藥效相近。

表3 延齡草提取液對閾下劑量戊巴比妥鈉鎮靜作用的影響(±s,n=20)

注：△與陰性對照組比較，有顯著性差異(P<0.05)；▲與陰性對照組比較，有極顯著性差異(P<0.01)；◇與陽性對照組比較，有顯著性差異(P<0.05)

2.4 延齡草提取液與閾上劑量戊巴比妥鈉協同催眠作用的實驗結果 由表4可見，各給藥組、中藥酸棗仁組、陽性對照地西泮組對閾上劑量戊巴比妥鈉的催眠作用表現出協同作用，可縮短小鼠睡眠潛伏期，延長睡眠時間，且隨著劑量的增加，小鼠睡眠潛伏期縮短、睡眠時間延長。

表4 延齡草提取液對閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠催眠作用的影響(±s,n=20)

注：△與陰性對照組比較，有顯著性差異(P<0.05)；▲與陰性對照組比較，有極顯著性差異(P<0.01)；◇與陽性對照組比較，有顯著性差異(P<0.05)

3 討 論 睡眠是人正常的生理現象，能使機體復原、整合和鞏固記憶環節，睡眠質量問題直接影響著人的身心健康、正常的生活和工作。臨床上多采用巴比妥類和苯二氮卓類藥物進行治療，長期服用會產生許多副作用，如焦慮、幻覺、恐懼、妄想及驚厥等。中醫學認為引起失眠主要有情志失常、過勞過逸、飲食不節及病后體虛等病因。在中醫辨證論治思想指導下應用中藥治療失眠癥，如應用天麻、酸棗仁、知母等單味或復方，具有鎮靜、催眠、抗眩暈、腦保護等作用[9]，同時中藥可減少鎮靜催眠藥副作用及成癮性。

陜西產延齡草是“太白七藥”之一，又名芋兒七、獅兒七。本實驗通過不同劑量延齡草提取液對小鼠自主活動能力測定實驗、對閾下劑量及閾上劑量戊巴比妥鈉鎮靜催眠作用的協同效果實驗與研究，發現延齡草提取液有抑制小鼠自主活動的能力，對戊巴比妥鈉的鎮靜催眠作用有協同功效，表現出明顯的鎮靜睡眠藥理作用。后續研究中我們將對其鎮靜催眠作用與腦保護方面的主要藥效物質基礎進行研究，探討其物效關系，同時促進對該藥材的開發利用。

[1] 林先民，廖朝林，郭 杰，等．延齡草生物學特性研究[J]．中國現代中藥，2006,8(7)：38-41.

[2] 喻玲玲，鄒 坤,延齡草屬植物的化學成分及藥理活性研究進展[J].中成藥,2008，30(9)：1350-1354.

[3] 黃華斌，萬仲賢，漆立軍.延齡草不同提取部位總酚的含量測定[J]．中國醫院藥學雜志，2013，33(7)：592-594.

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[5] 黃麗亞，葉嗣穎．延齡草續斷上調抗氧化酶表達作用的比較研究[J]．遼寧中醫雜志，2006，33(8)：1012-1013.

[6] 喻玲玲，鄒 坤，汪鋆植, 等．延齡草提取物抗炎、鎮痛和凝血作用的研究[J].時珍國醫國藥，2008，19(5)：1179-1120．

[7] 陳 奇.中藥藥理研究方法學[M].第3版.北京：人民衛生出版社,2011：634-637.

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(收稿2014-11-03;修回2015-01-12)

Effect of sedative and hypnotic of trillium tschonoskii maxim extract on mice

Xi’an Medical University(Xi’an710021)

Sun Yanping Wang Xingjun Zhang Yan

Objective: To study the effects of sedative and hypnotic of Trillium Tschonoskii Maxim Extract on mice． Methods: To detest the independent activities by the experiment of direct sleep，and observe the sedative and hypnotic of Trillium Tschonoskii Maxim Extract on mice By the sleep time experiments of suprathreshold sodium, sleeping mice numbers of subliminal sodium pentobarbital.Results: The results showed that Trillium Tschonoskii Maxim Extract significantly inhibited the locomotion activity of mice and showed synergic effect on pentobarbital-induced sleeping by increased numbers of mice falling asleep，reduced the sleep latency and prolonged the sleeping time．Conclusion: Trillium Tschonoskii Maxim Extract has a function of sedative and hypnotic.

Trillium tschonoskii Animal experimentation Mice

延齡草 動物實驗 小鼠

R285

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.05.046

* 陜西省教育廳2014年科學研究計劃(14JK1621)

西安醫學院科研基金自然科學類(11FZ17)