三烏丸的毒理研究*

裴紀文

西安市中醫醫院 (西安 710021)

三烏丸的毒理研究*

裴紀文

西安市中醫醫院 (西安 710021)

目的：觀測小鼠分別口服大劑量三烏丸的半數致死量，以評價其安全性。方法：在死亡率0 %(Dn) 和100 %(Dm) 范圍內確定5個給藥劑量，每個劑量組用10 只小鼠，觀察14d，用Bliss 法計算出半數致死量(LD50) 等數據。結果：三烏丸小鼠灌胃給藥測得LD50為5.12±0.4232g /kg。結論：三烏丸的治療量沒有發生任何毒性反應，是非常安全可行的。

三烏丸是陜西省中醫界老前輩裴一民先生緩解疼痛的有效口服藥物，其經歷了2～3代人的臨床實踐，有很好的疼痛緩解率。組方僅有三味藥，其中兩味藥有一定毒性，但經過獨特的工藝加工后，毒性大大減少，對藥效學無任何影響。由于其獨特的組方，有必要對三烏丸毒理學(急性毒性試驗)進行研究，為臨床安全用藥提供依據。本實驗,24h內給藥1次，觀察小鼠接受過量的三烏丸所產生的急性中毒反應，一日灌胃后產生的急性毒性反應和死亡情況。分析毒性作用的靶器官、分析人體過量時可能出現的毒性反應、臨床的劑量選擇和觀察指標的設計提供參考信息等。

1 試驗條件

1.1 動物品系 昆明種小鼠體重18～22g，♀♂各半，由西安交通大學醫學院實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(陜)2007-001。實驗前適應性喂養，選行為活動、飲食、精神狀況正常的小鼠進行實驗。

1.2 飼養管理 室溫20℃～24℃，相對濕度40%～70%，室溫20℃～24℃，光照8h/d，排風扇通風2次/d，每次1h，♀♂分籠飼養，正常顆粒料飼養，水(自來水)自由攝取。

1.3 受試藥物 三烏丸(每丸0.15g )批號：20080808西安市中醫醫院，用藥量是以成人用量：每日兩次，每次1～2丸。體重按60 kg計，每公斤體重每日服藥量為0.01g。

2 試驗方法

2.1預試驗：

2.1.1 摸索上下限：即用5組動物(每組4只)逐步摸索出使全部動物死亡的最小劑量(Dm)和一個動物也不死亡的最大劑量(Dn)。找出Dm =100%為8.0/kg和 Dn =0% 的劑量3.276g/kg，此兩量分別為上下限。

2.1.2 確定組數，組距及各組劑量:①組數：預試驗100%(Dm)為8.0g/kg和0%(Dn)的劑量3.276g/kg)，設定5組。②確定組距：組距0.8。

2.1.3 配制等比藥液，實驗前用蒸餾水配成所需濃度，并使每只動物在給藥容量上相等(0.4mL/10g )。

2.2 LD50試驗 取小鼠50只，♀♂各半，體重18～22g，給藥前禁食12h，將每只小鼠稱重標記，隨機分為5組。根據預試驗所得結果，確定組間三烏丸藥物劑量比值為0.80，三烏丸各劑量組劑量分別為8.0、6.4、5.12、4.096、3.276g/kg，1次灌胃給藥，給藥體積40mL/kg，連續觀察二周，給藥后按表1觀察14d內動物的一般活動情況及存活情況，并詳細記錄小鼠行為活動、狀態、飲食、大小便及毛色、分泌物和死亡數目、死亡時間及主要毒性反應。

3 結 果 小鼠給藥后自發活動減少、倦臥不動、嗜睡，動物皮毛光澤，無震顫、驚厥、運動失調、流涎、流淚、流鼻涕、呼吸困難等現象發生。小鼠灌服三烏丸后半h開始死亡。無論高劑量組存活小鼠或死亡小鼠，大多有活動減少、嗜睡、抽搐等臨床表現，其中以死亡小鼠表現得更突出(90%)以上。死后立即解剖肉眼可見小鼠胃充盈，腸管脹氣，余未見異常。未死動物給藥14d后逐只處死解剖，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、精囊、前列腺、睪丸、胃、腸及胸腔、腹腔等重要臟器、器官未見顏色、形態異常，沒有出血點或其它病理改變，胃粘膜顏色紅潤，無出血點或潰瘍，尸檢無異常。結果如下：

3.1 三烏丸不同劑量組小鼠死亡情況 見表1。

3.2 三烏丸灌胃小鼠半數致死量LD50見表2。

4 試驗結論 實驗完畢，按Bliss's 法統計各組死亡鼠數和計算死亡率，從表1、表2可見，三烏丸三烏丸灌胃給藥在ICR小鼠測得LD50為5.12±0.4232g/kg，95%可信區間為 5.5606～4.7143 g/ kg。這個半數致死量是人用藥量的1024倍；人用量654倍時，動物是沒有死亡的，實驗足以說明現在人的用量是非常安全的。

表1 三烏丸不同劑量組小鼠死亡率

表2 三烏丸小鼠半數致死量LD50 ( Bliss's 法 )

5 討 論 三烏丸是生草烏、生川烏及大棗制成的丸劑 ( 0.15g /丸 )，具有祛風除濕,溫經止痛的作用。用量很小，每次1～2丸,一日 2次 。在臨床上是純中藥、強效止痛劑。組方簡單，僅有三味藥,三藥作用祛邪而不傷正,鎮痛而無毒性[1]。我們傳統的研究表明[2]：川烏是通過不同炮制方法達到減毒的作用，主要炮制方法有蒸法和煮法，這些炮制法表明微生物發酵有助于降低川烏中毒性生物堿的含量,動物實驗表明[3]炮制后烏頭毒性降低,但藥效鎮痛作用減弱。而這項課題研究也說明：生烏頭的毒性并不是不可改變的，本課題通過實驗觀察三烏丸毒性是通過大棗的特殊工藝加工后，藥物的毒性大大減低，幾乎可以忽略不計，臨床應用非常安全可靠，也許這個辦法不失為又一種烏頭的減毒妙法。三烏丸的臨床觀察也說明，鎮痛作用非常強大，小劑量就能起到很好的緩解疼痛，說明這種方法在大大減輕毒性的同時并沒有影響到臨床藥效。生川烏、生草烏在臨床上很少用于口服，主要是畏懼其毒性作用，三烏丸的毒理學研究表明，我們現在給人的用量非常安全，并且有很大的用量調整區間；其毒性是可控的，方法也是多樣的，也為臨床工作者的進一步研究提供幫助。

[1] 裴紀文，職利琴.三烏丸治療類風濕性關節炎 226例[J].陜西中醫,2008，29(11)：1489.

[2] 曹國瓊，張永萍.烏頭的藥理與毒理作用及減毒的研究進展[J].貴州農業科學，2013,41(2)：61-69.

[3] 劉強強,郭海東.川烏毒理作用研究進展[J].中國中醫藥信息雜志,2012,19 ( 8 ) ：110-112.

(收稿2015-05-15；修回2015-06-16)

The toxicological study of San-wu pill

Xi’an Chinese Medicine Hospital ( Xi’an710002)

Pei Jiwen

Objective：Observed the median lethal dose of San-wu pill in mouse,to evaluate its safety.Methods：In the mortality rate of 0% (Dn) and 100% (Dm) within the scope of five give medicine doses were determined,each dose group including 10 mouses,observing 14 days,by Bliss method to calculate the median lethal dose (LD50) and other data.Results：The dose of Sanwu pill to fill the stomach to measure LD50 of mouse was 5.12 ±0.4232 g/kg.Conclusions：The treatment dose of Sanwu pill was without any toxic effects,and it is very safe and feasible.

Sanwu pill Acute toxicity Median lethal dose Animal,experiment Mice

*陜西省科學技術廳社會發展攻關計劃項目(S2009SF60)

三烏丸 急性毒性 半數致死量 動物,實驗 小鼠

R99

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.10.090