不同炮制方法對黔產淫羊藿中總黃酮及淫羊藿苷的影響*

王全洪

遵義醫學院附屬醫院藥劑科(遵義563099)

·方藥縱橫·

不同炮制方法對黔產淫羊藿中總黃酮及淫羊藿苷的影響*

王全洪

遵義醫學院附屬醫院藥劑科(遵義563099)

目的：探討炮制方法對黔產淫羊藿及其炮制品中總黃酮及淫羊藿苷的影響。方法：分別采用紫外-可見分光光度及高效液相色譜法對黔產淫羊藿及其炮制品中的總黃酮及淫羊藿苷的含量進行測定。結果：淫羊藿總黃酮呈現良好的線性關系；淫羊藿苷在0.00105～0.0525mg/mL的濃度范圍內呈現良好的線性關系，加樣回收率為99.91%，RSD為2.14%。結論：黔產淫羊藿經炮制加工后，總黃酮及淫羊藿苷的含量總體上未出現較大的變化，僅酒炙淫羊藿中總黃酮及淫羊藿苷的含量略有上升。

淫羊藿具備風濕的祛除、腎臟陽氣補足、筋骨的強壯等療效，在臨床上常被應用于風濕、腎衰及筋骨萎軟等疾患的治療[1-2]。淫羊藿中含有多種黃酮類成分，其中淫羊藿苷所占比例較高，臨床主要使用的有炒淫羊藿、鹽炙淫羊藿、酒炙淫羊藿、羊脂淫羊藿等，不同炮制方法對淫羊藿中成分可能會產生影響，筆者對采用不同炮制方法制備的黔產淫羊藿中總黃酮及淫羊藿苷的含量進行測定，現報道如下。

1 材料與儀器

1.1 實驗材料 淫羊藿苷的對照品(中國藥品生物制品檢定所制作，批號：120712-201309)；炒淫羊藿、鹽炙淫羊藿、酒炙淫羊藿、羊脂淫羊藿均購自貴州省藥材公司，經鑒定均為黔產淫羊藿正品；乙腈(西隴化工股份有限公司，色譜純，批號：201310002)；甲醇(濟寧恒泰化工有限公司，分析純，批號：201310019)。

1.2 實驗儀器 UV-2550型可見-紫外分光光度計(日本島津)；Agilent 1200高效液相色譜儀；超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司)；十萬分之一電子天平(日本島津)等。

2 方法與結果

2.1 淫羊藿總黃酮的含量測定 2.1.1 淫羊藿的對照品溶液的制備方法：應用精密電子稱稱取適量的淫羊藿苷對照品，放入10mL的容量瓶中并用甲醇并定容，搖勻即得濃度為0.05mg/mL溶液，備用。

2.1.2 供試品溶液的制備：精密稱取黔產淫羊藿及其炮制品粉末(過三號篩)0.2g，并將其置入容量為100mL的具塞錐形瓶內，采用移液管精密量取20mL50%的乙醇加入其中，將重量稱定，放入超聲儀中進行60min的超聲，60min后取出，然后放至冷卻，再次精密稱定具塞錐形瓶的重量，流失的重量使用適量的50%乙醇以補充，充分搖勻后將其靜置并濾過，采用移液管精密量取續濾液0.5mL，放置于50mL容量瓶內，并用50%甲醇定容到刻度，充分搖勻后備用。

2.1.3 淫羊藿總的黃酮線性關系的研究：分別精密吸取0.1、0.3、0.5、0.6、0.9mL和1mL的淫羊藿苷對照品溶液，置于10mL量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻即得不同濃度的淫羊藿苷對照品溶液。選擇測定波長為270nm，按照紫外-可見分光光度法，測定不同濃度淫羊藿苷對照品的吸光度，以對照品的濃度(C)和相應的吸光度(A)進行線性回歸，可得到淫羊藿苷的線性回歸方程：A=0.8427C-0.0752(r=0.9993)。

2.1.4 含量測定：分別取對照品、供試品溶液，并以相應的試劑作為空白，按照“2.1.4”項下的方法，測定淫羊藿及其炮制品的吸光度，計算總黃酮的含量。測定結果見表1。

表1 黔產淫羊藿及其炮制品中淫羊藿

2.2 淫羊藿苷的含量測定 2.2.1 色譜條件[3]：色譜柱為Hypersil ODS2 C18色譜柱；流動相為乙腈-水(30∶70)；流速：1mL/min；所需檢測的波長是270nm，柱溫：30℃，樣品進入的體積是10μL。根據淫羊藿苷峰來計算理論板數，應≥1500。

2.2.2 淫羊藿苷的對照品溶液的制備：采用精密電子稱稱取適量的淫羊藿苷對照品，并將其放入10mL的容量瓶內，應用甲醇溶液定容到刻度，充分搖勻，便為濃度為0.105mg/mL的淫羊藿苷對照品溶液。

2.2.3 黔產淫羊藿及其炮制品的制備：取黔產淫羊藿及其炮制品粉末0.2g，應用精密電子稱稱定重量后，置入容量為25mL的具塞錐形瓶內，并用移液管量取20mL的 50%乙醇加入其中，對重量精密稱定，置入超聲儀中進行60min超聲，6min后取出，放置冷卻，再次對錐形瓶的重量進行稱定，流失的重量利用50%乙醇進行補充，充分搖勻后靜置并過濾，過濾出的液體便是黔產淫羊藿及其炮制品的供試品溶液。

2.2.4 方法學考察：2.2.4.1 線性關系的考察：對淫羊藿苷對照品溶液分別精密量取0.1、0.2、0.5、1、2、5mL，置于10mL的量筒中，應用甲醇定容到刻度，所得溶液便是不同濃度的淫羊藿苷的對照品溶液。分別精密吸取10μL上述淫羊藿苷對照品溶液，根據色譜條件測定其峰面積，并以淫羊藿苷的濃度(X)與其對應的峰面積(Y)作圖并進行線性回歸，可以得到淫羊藿苷的標準曲線：Y =10.61X-30.58，r=0.9996。結果顯示，淫羊藿苷在0.00105-0.0525mg/mL的濃度范圍內的線性關系良好。

2.2.4.2 精密度實驗：取黔產淫羊藿的供試品溶液，每次的進樣量均為10μL，連續進樣5次，照色譜條件測定其峰面積，算峰面積的RSD值。結果顯示，黔產淫羊藿中淫羊藿苷的RSD值為1.59%，表明該方法的精密度良好。

2.2.4.3 穩定性實驗：取同批黔產淫羊藿，制備其供試品溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，每隔2h進樣1次，連續進樣7次，照色譜條件測定其峰面積，計算RSD值。結果顯示，黔產淫羊藿中淫羊藿苷的RSD值為1.94%，表明黔產淫羊藿中的淫羊藿苷在12h內基本穩定，穩定性較好。

2.2.4.4 重復性實驗：取5份黔產淫羊藿樣品，根據制備照樣品的方法，對供試品溶液進行制備，精密量取所制備的溶液10μL，并向高效液相色譜儀內注入，峰面積的測定根據照色譜條件進行，最后對淫羊藿苷的含量進行計算。由結果得出，黔產淫羊藿中淫羊藿苷的RSD值為1.62%，表明采用該方法用于黔產淫羊藿中淫羊藿苷的含量測定，重現性較好。

2.2.4.5 加樣回收率實驗：取6份已知含量的淫羊藿藥材的粉末(過三號篩)，每份約0.5g，精密稱定，分別等量加入的適量的淫羊藿苷對照品，按照制備樣品的方法對溶液進行制備，并精密量取所制備的溶液10μL，將其向高效液相色譜儀內注入，其峰面積的測定根據色譜條件進行，最后對其加樣回收率進行計算，見表2。

2.2.4.6 黔產淫羊藿及黔產淫羊藿炮制品的含量測定：按上述樣品制備方法制備黔產淫羊藿及其炮制品的溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，照色譜條件測定其峰面積，根據淫羊藿苷的線性回歸方程，計算各樣品中淫羊藿苷的含量。淫羊藿苷含量測定的結果見表3。

表2 加樣回收率試驗結果(n=6)

表3 黔產淫羊藿及其炮制品中淫羊

3 討 論 淫羊藿總黃酮具有有提高機體免疫功能、改善患者心腦血管功能、調節機體的內分泌功能、抗腫瘤等多重藥理活性。傳統中醫常使用淫羊藿的炮制品，如炒淫羊藿、鹽炙淫羊藿、酒炙淫羊藿、羊脂淫羊藿入藥[4]。炮制前、后淫羊藿的活性成分是否發生了較大的變化，目前進行較全面的研究尚少，如崔莉等對淫羊藿炮制前、后在大鼠體內的藥代動力學進行了研究，發現了其主要活性成分淫羊藿苷在大鼠體內的吸收量出現了較大的提高，從而表明了通過炮制可改善淫羊藿中淫羊藿苷在大鼠體內的吸收，提高淫羊藿中淫羊藿苷的生物利用度[5]。筆者測定了淫羊藿炮制前、后的主要化學成分變化，發現炮制后，淫羊藿總黃酮及淫羊藿苷未出現較大的變化，提示炮制工藝的實施，可能對淫羊藿中其它成分可能會有一定的影響，從而促進主要活性成分的生物利用度提高，但對淫羊藿總黃酮及淫羊藿苷的含量未產生較大的影響，結果顯示筆者采用的高效液相色譜法及紫外-可見分光光度法具有靈敏度較好、操作較為簡單，可快速對淫羊藿中的活性成分進行測定，為控制淫羊藿及其炮制品的質量提供了重要的參考。

[1] 韓小東,張正祥,任光友,等.柔毛淫羊藿對去卵巢小鼠骨密度、破骨細胞和IL-β的影響[J].陜西中醫,2011,32(7):917-918.

[2] 王雁錄,王偉亮,唐自銀,等.仙靈骨葆膠囊對膝骨性關節炎患者關節液SOD和 MDA水平的影響[J].陜西醫學雜志,2008,37(7):892-893.

[3] 余曉暉,侯 嘉,趙 磊,等.甘肅不同產地淫羊藿中總黃酮和淫羊藿苷含量測定[J].甘肅中醫學院學報,2014,31(1):13-16.

[4] 任桂友,劉海萍,王 爽,等.大孔樹脂同時分離純化淫羊藿中淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的工藝優選[J].中國實驗方劑學雜志，2014,20(2):5-7.

[5] 崔 莉,孫 娥,樊宏偉,等.藥理效應法測定淫羊藿生品及不同炮制品的藥動學參數[J].中藥材,2013,36(3):370-373.

(收稿2015-04-24；修回2015-06-17)

*貴州省中醫藥管理局中醫藥、民族醫藥科學技術研究項目(QZYY2013-100)

淫羊藿 炮制 色譜法，高壓液相

R28.3

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.11.043