離子色譜法測定活血止痛散(片)中二氧化硫殘留量*

艾 蕓 李 榮 白 雪 謝志民 張亞鋒

西安市食品藥品檢驗所(西安710054)

離子色譜法測定活血止痛散(片)中二氧化硫殘留量*

艾 蕓 李 榮 白 雪 謝志民 張亞鋒

西安市食品藥品檢驗所(西安710054)

目的：建立活血止痛散(片)中二氧化硫殘留量的測定方法。方法：離子色譜法,電導檢測器,陰離子抑制器,淋洗液為20mmol/L氫氧化鉀溶液,流速1mL/min,柱溫30℃。結果：硫酸根進樣量在12.5ng～1000ng內,峰面積積分值與進樣量呈良好的線性關系(r=0.9994)；加樣回收率為93.2%,RSD為2.89%(n=9)；最低檢測限0.3μg/g,最低定量限0.8μg/g。結論：該方法簡便、準確度高,可用于該制劑中二氧化硫殘留量的控制方法。

我國傳統中藥炮制中，使用硫磺熏蒸的方法使中藥材、中藥飲片潔白、防蟲、防腐，但藥材中殘留的二氧化硫對人體健康和中藥材的功效會造成一定影響，實驗中關于這方面的報道屢見不鮮[1]。中國藥典對中藥材、中藥飲片中的二氧化硫殘留量已有明確規定，但關于中成藥中二氧化硫殘留量的研究尚少見，且對于安全量也無規定[2]。活血止痛散(片)是2012年國家藥品計劃抽驗品種，由當歸、三七、制乳香、冰片、土鱉蟲、煅自然銅組成，在臨床中有一定的使用范圍[3]。本文為考察該藥二氧化硫殘留情況，利用離子色譜法對成品中的殘留量進行測試觀察，為該藥的安全使用提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器 ICS-5000型離子色譜儀，變色龍色譜工作站，陰離子色譜柱AS19(4×250mm)，保護柱AS19(4×50mm)均為戴安公司產品。

1.2 試劑與試藥 硫酸根標準溶液：批號 GBS(E)080523，全國化工標準物質委員會標準物質研究開發中心提供，1000mg/L；亞硫酸鈉：98%分析純；鹽酸：優級純；蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性 采用離子色譜法，電導檢測器，陰離子抑制器，陰離子色譜柱，淋洗液為20mmol/L氫氧化鉀溶液，流速1mL/min，柱溫30℃。理論塔板數按硫酸根峰計算應不低于6000。

2.2 對照品溶液制備 取硫酸根標準溶液，加水分別制成每1mL含硫酸根0.5μg、5μg、10μg、20μg、30μg、40μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取供試品粉末約10g(過三號篩)，置三頸圓底燒瓶中，加水50mL，搖勻，加入5mL鹽酸，迅速密塞，接通水蒸氣蒸餾，以3%過氧化氫溶液20mL為吸收液，50min收集餾出液近100mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置3h，即得。

2.4 標準曲線與線性范圍 精密吸取對照品溶液各25μL，注入離子色譜儀，按上述色譜條件測定硫酸根峰面積，以峰面積為縱坐標、進樣量(ng)為橫坐標，計算回歸方程得y=0.2068x-0.0868，r=0.9994。表明在該系統條件下，硫酸根進樣量在12.5ng～1000ng范圍內，峰面積與進樣量呈良好的線性關系。

2.5 進樣精密度 精密吸取上述對照品溶液(40μg/ml)25μl，各進樣6次，按上述色譜條件測定保留時間和峰面積，計算變異系數。結果保留時間RSD為0.03%，峰面積RSD為2.14%，表明系統精密度良好。

2.6 方法重現性 精密稱取活血止痛散粉末8.2524g、8.0580g、8.3327g、8.2659g、8.3346g、8.3443g，按上述方法測定硫酸根含量，依照(SO2/SO4=0.6669)換算成樣品中二氧化硫量。結果RSD為0.98%，表明本方法的重現性良好。

2.7 中間精密度 由相同實驗室的不同操作者在不同時間、不同條件下，按照重現性考察項下方法測定。結果三位不同實驗人員測定的RSD為0.24%。

2.8 溶液穩定性 取硫酸根標準溶液，加水制成每1mL含硫酸根40μg的溶液。分別于0h、1h、2h、4h、8h、12h、16h、20h和24h精密吸取25μL，注入離子色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。結果RSD為2.66%，表明硫酸根溶液在24h內穩定。

2.9 干擾試驗 稱取陰性樣品8g，按照重復性試驗方法記錄色譜圖，并與對照品、供試品色譜對照，結果(見圖1)顯示陰性供試品溶液色譜中在與硫酸根標準溶液色譜峰相應的位置上無明顯色譜峰出現，說明處方中其它組分不影響硫酸根的含量測定。

2.10 加樣回收試驗 精密稱取已測得二氧化硫含量(186.2μg/g)的活血止痛散粉末3.4972g、3.4500g、3.5043g、3.5003g、3.4321g、3.4580g、3.3421g、3.3249g、3.3423g，置三頸圓底燒瓶中，每3份分別加入亞硫酸鈉溶液(每1mL含亞硫酸鈉0.856mg)1mL、2mL、3mL，加水50mL，搖勻，照重現性方法測定，結果平均加樣回收率為93.20%，RSD為2.89%。

2.11 系統耐用性考察 系統適用性試驗證明本系統在不同品牌的色譜柱、不同柱溫(25℃～35℃)、不同流速(0.8mmol/L～1.2mmol/L)、不同淋洗液濃度(18mmoll/L/min～22mmol/L)條件下硫酸根分離良好、峰形對稱，可用于含量測定，理論塔板數為6858～9098，故確定理論塔板數以硫酸根峰計不得低于6000。

2.12 蒸餾時間確定 取活血止痛散粉末8.0169g、8.0122g、7.6023g、7.9000g、8.0160g，照上述方法蒸餾，控制蒸餾時間分別為20min、30min、40min、50min、60min收集餾出液近100mL，加水稀釋至刻度，搖勻，放置3h。精密吸取上述溶液各25μL，注入離子色譜儀，按上述色譜條件測定二氧化硫的含量。結果(見圖2)表明蒸餾時間對樣品提取效果影響顯著，當蒸餾時間為50min以上時提取率趨于平穩。為了縮短檢驗周期，本實驗采用蒸餾時間為50min。

2.13 檢測限和最低定量限的確定 取陰性供試品粉末(過三號篩)8.0003g，照重復性考察項制備陰性供試品溶液。精密吸取對照品溶液(每1mL含硫酸根2μg)1mL，分別置50mL量瓶和20mL量瓶中，加陰性供試品溶液稀釋至刻度，照上述色譜條件測定，以信噪比為3時的含量為最低檢測限，以信噪比為10時的含量為最低定量限。結果該方法二氧化硫的最低檢測限為0.3μg/g、最低定量限為0.8μg/g。

2.14 樣品限度的制定 中國藥典規定山藥等11味藥材及其飲片中二氧化硫殘留量不得超過400mg/kg，其他中藥材及飲片二氧化硫殘留量不得超過150mg/kg[2]。活血止痛散(片)處方中不含限度為400mg/kg的11味中藥材，確定本品中二氧化硫殘留量不得超過150mg/kg。

2.15 樣品測定結果 活血止痛散33批次樣品不合格的有14批次，占42.42%；活血止痛片54批次樣品不合格的有37批次，占68.52%。說明原料中的二氧化硫殘留仍有相當一部分殘留在成品中。

3 討 論

本實驗依據我國2010年版的《中國藥典》有關中藥材及其飲片二氧化硫的含量測定，采用水加鹽酸蒸餾，碘滴定的容量法[3]。容量法儀器設備簡單，適合多數實驗室操作，但該法未采用任何保護劑，未能改善蒸餾液中亞硫酸根的不穩定性，受環境、人員、時間等因素干擾嚴重，故滴定結果可靠性較差。另有文獻報道用堿性溶液提取-離子色譜法測定中藥中二氧化硫殘留[4]。該法采用甲醛為保護劑，很大程度上改善了亞硫酸根的不穩定性，且超聲提取方法用時較蒸餾法短，但活血止痛散(片)為復方制劑，且含礦物藥，采用超聲方法提取液成分復雜，離子色譜干擾嚴重，無法測得亞硫酸根。文獻報道用水加鹽酸蒸餾，以雙氧水作為蒸餾液中亞硫酸根的吸收液，將其氧化為硫酸根，經離子色譜分析硫酸根含量，方法簡便快速、干擾少[5]。水蒸氣蒸餾-離子色譜法中供試液雜質較少，離子色譜干擾大幅度降低，且該法利用雙氧水作為吸收劑，將蒸餾液中亞硫酸根氧化為性質更為穩定的硫酸根作為檢測對象，極大降低了環境、人員、時間等因素對檢測結果的影響，確保了結果的準確性。故本實驗采用水蒸氣蒸餾-離子色譜法測定活血止痛散(片)中二氧化硫的殘留量。

按活血止痛散處方和供試品溶液制備方法折算，取土鱉蟲粉末2.0g、三七粉末0.7g、煅自然銅粉末1.0g，照上述方法測定，結果顯示煅自然銅對二氧化硫含量測定影響甚微，4個生產企業的土鱉蟲、三七原料中二氧化硫殘留量均極低。按活血止痛散處方和供試品溶液制備方法折算，取當歸粉末3.5g，照上述方法測定，結果顯示4個生產企業的當歸原料材中二氧化硫殘留量均極低，而藥材市場購得三批當歸飲片中二氧化硫含量均極高，初步推測活血止痛散(片)中殘留的二氧化硫主要來源于當歸飲片原料。本文建立了水蒸氣蒸餾-離子色譜法測定活血止痛散(片)中二氧化硫的殘留量，方法快速、準確，靈敏度高，干擾少，準確度高。目前關于中成藥中二氧化硫殘留量的研究還比較少，此法可用于控制該品種中二氧化硫的殘留。

[1] 孫艷平，李 濤，頂空氣相色譜-火焰光度檢測器檢測山藥中的二氧化硫[J].陜西醫學雜志2010，39(8):1024-1025,1040.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].2010年版第一增補本.北京：中國醫藥科技出版社，2010：262.

[3] 國家藥典委員會.中國藥典[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：956，附錄61.

[4] 王欣美，夏 晶，王 柯，等.堿性溶液提取-離子色譜法測定中藥中二氧化硫殘留[J].中國中藥雜志2011，39(19):2656-2658.

[5] 劉海靜，楊瑞瑞，袁向輝，等.離子色譜法測定當歸中二氧化硫殘留量[J].藥物分析雜志2011，31(4):752-754.

(收稿2015-01-22；修回2015-03-03)

* 國家藥品計劃抽驗項目(中2012102046038)

色譜法 二氧化硫 @活血止痛散(片)

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.06.047