大理市下關鎮動物源食品中四環素類抗生素殘留的檢測

盧躍紅，羅開敏，王光婷，呂榮聰，孫慧媛，熊發輝

（1.大理學院農學與生物科學學院，云南大理 671003；2.大理學院公共衛生學院，云南大理 671000）

抗生素是一類有效防病治病的藥物，廣泛應用于現代集約化畜禽及水產養殖業中。在養殖生產的各個環節，抗生素往往通過口服、注射或作為飼料添加劑的方式被動物吸收利用。合理規范的使用抗生素，可以預防和治療動物疾病〔1〕、調節動物生理機能、促進動物生長和繁殖、改善畜產品品質〔2-3〕。然而一些不法商家和養殖戶為了獲取更大的利益，在養殖生產中濫用各種抗生素〔4〕，抗生素不僅不能被動物完全吸收利用以原形代謝產物的形式排出體外，對環境造成污染〔5〕，間接地給人類健康帶來威脅，而且造成畜產品中抗生素殘留量超標〔6-8〕。人們長期攝入含抗生素殘留的畜產品，會對人體健康造成很大的危害〔9-15〕。

四環素類抗生素因其廣譜的抗菌效果和便宜的價格，成為近年來常用的獸藥，品種主要有土霉素、四環素、金霉素等。本實驗旨在對大理市下關鎮市售新鮮豬肉、雞肉、牛肉、魚肉及其肝臟中四環素類抗生素殘留情況進行測定，以期為該鎮動物性食品的監測及消費者食用安全提供理論依據。

1 材料

1.1 試驗材料在大理市下關鎮不同的農貿市場、大型超市，隨機采取市售新鮮豬肉、雞肉、牛肉、魚肉及其肝臟，每種樣品來源不少于5 個農貿市場或大型超市，每份樣品不少于100 g。共采樣50份。

1.2 試劑土霉素（OTC，批號：130487-200703）、四環素（TC，批號：130306-200918）、金霉素（CTC，批號：130489-200202），均購自中國食品藥品檢定研究院，甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

1.3 儀器高效液相色譜儀（Agilent1100，包括二元泵G4212B、自動進樣器G1316C、柱溫箱G4226A、二極管陣列檢測器G4204A）；電子天平（AE240，瑞士梅特勒）；離心機；pH 計（pHS-25，上海雷磁儀器廠）；SK8200超聲波清洗器（上海科導超聲波儀器公司）。

2 方法

2.1 色譜條件色譜柱：ODS-C18（6.2 mm×150 mm，5 μm）、檢測波長：355 nm、靈敏度：0.002 AUFS、柱溫：25 ℃、流速：0.7 mL/min、進樣量：10 μL、流動相：甲醇：0.01 mol/L 磷酸二氫鈉溶液（20：80），用30%硝酸溶液調節pH 2.5，使用前超聲脫氣10 min。

2.2 標準溶液配制

2.2.1 標準貯備液 精密稱取OTC、TC、CTC標準品各0.01 g，分別置于不同的10 mL棕色容量瓶中，用0.01 mol/L鹽酸溶解并定容至刻度，制備成1 mg/mL的標準品溶液，4 ℃冰箱避光保存，備用。

2.2.2 混合標準工作液 分別量取OTC、TC、CTC標準儲備液各1 mL，置于100 mL 棕色容量瓶中，超純水定容至刻度，此溶液中OTC、TC、CTC濃度均為10 μg/mL。以上標準溶液于4 ℃避光保存，備用。

2.3 樣品處理稱取5.00 g（±0.01 g）切碎的肉樣（＜5 mm），置50 mL 錐形燒瓶中，加入5%高氯酸，定容至25 mL，于振蕩器上振蕩提取10 min，移入到離心管中，以3 000 r/min 離心10 min，取上清液經0.45 μm濾膜過濾。

2.4 測定按上述色譜條件，以保留時間定性、峰面積定量，用峰面積計算土霉素、四環素和金霉素的含量。

3 結果

3.1 線性關系分別取“2.2.2”中混合標準溶液30、40、50、60、80 μL 進樣，按上述色譜條件進行測定。結果表明金霉素、土霉素、四環素在10～100 μg/mL 范圍內線性關系良好，其線性方程和相關系數見表1。

表1 金霉素、土霉素和四環素的線性方程和相關系數

3.2 樣品回收率與精密度實驗取樣品6份，每份分別加入混合標準溶液（添加水平見表2），按上述色譜條件進行回收率與精密度實驗。結果見表2。結果表明，3個添加水平的回收率在78.50%～80.50%，相對標準差范圍為2.71%～2.76%，表明該方法具有較高的靈敏度和精密度。

3.3 穩定性實驗取樣品溶液6 份，每份加入等量的“2.2.2”中混合標準溶液，分別在0、1、2、3、4和5 h進樣，記錄樣品中色譜峰面積，計算RSD 為2.55%。結果表明金霉素、土霉素、四環素的混合標準溶液在5 h內穩定。

表2 樣品回收率及精密度實驗結果（n=6）

3.4 樣品檢測結果和討論

3.4.1 樣品檢測結果 本批樣品按上述色譜條件檢測，均未檢測出土霉素、四環素、金霉素。色譜圖見圖1、2。

圖1 混合標準溶液的色譜圖

圖2 樣品色譜圖

3.4.2 討論 實驗中，首先以GB/T 5009.116—2003規定，采用乙腈：磷酸二氫鈉溶液（35：65）作為流動相體系時，基線平穩，出峰時間適中，但土霉素與四環素未能有效分離，調整流動相比例也未能將二者有效分離。最后將流動相改為甲醇和磷酸二氫鈉后，試驗發現當甲醇：0.01 mol/L 磷酸二氫鈉（20：80）時柱效較好，土霉素與金霉素能夠有效分離，3種抗生素在20 min內達到基線分離，分離效果較好，且靈敏度高，無試劑峰干擾。

4 結論

本實驗中所有樣品均未檢測出四環素類抗生素的殘留，說明大理市下關鎮采集的該批動物性食品中無四環素類抗生素殘留。

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