黃藤素對(duì)高脂血癥模型小鼠降血脂作用研究*

王維麗，王 磊，柳麗松，顏漢文，曾文彥，段小花

(云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500)

黃藤素對(duì)高脂血癥模型小鼠降血脂作用研究*

王維麗，王 磊，柳麗松，顏漢文，曾文彥，段小花△

(云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500)

目的 研究黃藤素對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥小鼠血脂的影響。方法 復(fù)制小鼠高脂血癥模型，觀察辛伐他丁(20mg/kg)，黃藤素高劑量組(0.4g/kg)、黃藤素低劑量組(0.1g/kg)對(duì)小鼠高脂血癥的影響。觀察小鼠血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平變化。結(jié)果 與高脂血癥模型組小鼠比較，黃藤素高、低劑量組小鼠血清TG水平顯著降低(P<0.05)。結(jié)論 黃藤素具有一定降低實(shí)驗(yàn)性高脂血癥模型小鼠甘油三酯(TG)的作用。

黃藤素；高脂血癥；降血脂

黃藤素是防己科植物黃藤(Fibraurea recisa pierre)干燥藤莖中提取得到的黃色結(jié)晶性生物堿[1-3]。也稱為巴馬汀(Berbericinine)，其在黃藤根和莖中含量較高[4，5]。經(jīng)過現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，黃藤主要成分為異喹啉類生物堿：黃藤素、藥根堿等[6]。《本草綱目》記載：“黃藤生嶺南，狀若防己，俚人常服此藤，縱飲食有毒，亦自然不發(fā)，氣味甘苦平無毒”。現(xiàn)代藥理研究證實(shí)：黃藤素具有增強(qiáng)白細(xì)胞吞噬能力的作用，對(duì)多種革蘭陽性和陰性菌有抑制作用，尤其抗真菌作用佳[7]。此外實(shí)驗(yàn)表明：黃藤素腹腔注射能增強(qiáng)大鼠非特異性免疫、細(xì)胞免疫及體液免疫功能[8，9]。臨床主要用于治療婦科炎癥、菌痢、腸炎、 呼吸道及泌尿道感染、外科感染、眼結(jié)膜炎等癥[9，10]。黃藤又稱大黃藤、黃連藤等，分布于滇南的紅河州、普洱市、西雙版納州等地，生長于海拔 180 ～ 1000m的熱帶、亞熱帶山野溝谷，植物資源以屏邊縣、綠春縣、金平縣及河口縣較多[11]。黃藤也是云南瑤、苗、壯等少數(shù)民族應(yīng)用的植物藥，苗族稱“滿格朗”，瑤族稱“汪當(dāng)”，壯族稱“格嘎亨”，具有清熱解毒的功效[12]。黃藤秋、冬二季采收，切段，曬干，具有清熱解毒，利尿通便、消炎功效，臨床上用于治飲食中毒，痢疾，傳染性肝炎，瘡癰，赤眼，咽喉腫痛等癥[13，14]。通過搜索文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，未見黃藤素降血脂的報(bào)道研究，本實(shí)驗(yàn)通過建立實(shí)驗(yàn)性高脂血癥小鼠模型，研究黃藤素對(duì)高脂血癥小鼠血脂的影響，為其進(jìn)一步臨床應(yīng)用、擴(kuò)大臨床應(yīng)用范圍提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物 健康ICR小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g，購買自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證：SCXK(京)2014-0004，合格證號(hào)：11401300025448；每日給予小鼠標(biāo)準(zhǔn)食物和飲用水各兩次，保持光照和避光循環(huán)飼養(yǎng)(12/12h)；實(shí)驗(yàn)開始前保持室內(nèi)飼養(yǎng)1周。

1.2 藥品 實(shí)驗(yàn)樣品為黃藤素片，使用時(shí)用0.5%CMC-Na溶液配制成相應(yīng)的混懸液；辛伐他丁片(20130703)。

1.3 試劑 羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，化學(xué)純；總膽固醇測定試盒TC(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：141731)；甘油三酯測定試劑盒TG(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：146761)；高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒 HDL-C(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：140551)；低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒 LDL-C(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：140571)；蛋黃乳液(75%)。

1.4 儀器 酶標(biāo)儀(Infinite M200 PRO)：瑞士Tecan公司；分析天平(型號(hào)：AL104METTLER TOLEDO，Switzerland，0.0001g；CF16 RXⅡseries高速低溫離心機(jī)，HITACHI公司；DY89-Ⅱ型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司。

2 方法

2.1 試劑劑量設(shè)置與配制 蛋黃乳液的配制：取1～2d的新鮮雞蛋，除去蛋清，用消毒生理鹽水?dāng)嚢杌靹颍涑?5%的蛋黃乳液備用，4 ℃ 貯藏備用[15]。

黃藤素配置：黃藤素片的用量為1次2～4片，3次/ d，每片0.1g，則人每天最大用量為1.2 g，人體重以60kg計(jì)，則人用最大劑量為0.02 g/ kg；小鼠等效劑量以10倍計(jì)算(按體表面積換算)，則小鼠劑量為 0.2 g/kg，以此劑量作為中劑量，則高、低劑量分別為0.4 g /kg、0.1 g/ kg。使用時(shí)用0.5% CMC-Na溶液配制成相應(yīng)的混懸液。

動(dòng)物注射蛋黃乳后最佳取血點(diǎn)的確認(rèn)：取體重(20±2)g的ICR小鼠30只，按體重與性別隨機(jī)分到5組，每組6只，正常對(duì)照組腹腔注射生理鹽水(0.5mL/只)，其余4組腹腔注射75%蛋黃乳(0.5mL/只)，每組分別于注射后0，6，12，18，24，48h后小鼠剪尾尖取血，離心后測定血清膽固醇，找尋小鼠注射蛋黃乳液后膽固醇升高到極值所對(duì)應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)[16]。

2.2 高脂血癥模型復(fù)制 參考文獻(xiàn)方法[17，18]，末次給藥后1h，除正常對(duì)照組腹腔注射生理鹽水(0.5mL/只)外，其余6組腹腔注射75%蛋黃乳(0.5mL/只)，注射后雄性小鼠20h或者雌性小鼠5h處，摘取眼球取血，取血前禁食不禁水12h。

2.3 動(dòng)物分組與給藥 取100只(體質(zhì)量18-22 g，雌雄兼用)健康ICR鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分成5組。實(shí)驗(yàn)前1d按體重隨機(jī)分為5組，分別為：正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組(辛伐他汀片20mg/kg)、黃藤素高、低劑量組，每組20只。每只小鼠按0.2ml/10g體積灌胃給藥，正常對(duì)照組和模型組灌胃給予等體積含0.5% CMC-Na 溶液的蒸餾水；給藥組：灌胃給予黃藤素高、低劑量，給藥前禁食不禁水12h，連續(xù)給藥7d。

2.4 指標(biāo)檢測

2.4.1 一般情況 實(shí)驗(yàn)期間每天稱體重，觀察小鼠食欲行為、糞便、毛發(fā)及動(dòng)物死亡情況，做好記錄，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死動(dòng)物后稱量體重。

2.4.2 血清生化指標(biāo) 末次給藥后1h，小鼠摘取眼球取血，以3600r/min離心10min分離血清，離心溫度設(shè)置為4℃，樣本放置于4～8℃可穩(wěn)定7d，-20℃可穩(wěn)定1個(gè)月。按總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒說明書，依次測定血清中總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量，做好記錄。

3 結(jié)果

黃藤素對(duì)高脂血癥模型小鼠血脂的影響，見表1。由表1可見，模型組與正常組相比較，模型組小鼠血清的TC、TG、LDL-C濃度均顯著高于正常組(P<0.05)，HDL-C濃度顯著降低(P<0.05)，說明高脂血癥小鼠模型復(fù)制成功。與模型組比較，黃藤素高、低劑量組、陽性組血清TG濃度水平顯著降低(P<0.05)。

表1 黃藤素對(duì)蛋黃乳劑致小鼠高脂血癥TC、TG、LDL-C、HDL-C含量的影響

注：與正常組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；黃藤素高、低劑量組分別簡稱為黃高組、黃低組。

4 討論

高脂血癥是一種常見病、多發(fā)病，主要是指人體脂質(zhì)代謝障礙導(dǎo)致的血漿膽固醇、甘油三酯等血脂水平的異常升高的一種代謝性疾病[19]。高脂血癥是遺傳基因與外界環(huán)境共同作用的結(jié)果，對(duì)人類身體健康危害嚴(yán)重，血脂包括血漿膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇，高脂血癥又分為高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、混合型高脂血癥和低高密度脂蛋白血癥[20]。高脂血癥是引發(fā)和加重動(dòng)脈粥樣硬化的病理基礎(chǔ)，是導(dǎo)致冠心病、心絞痛、心肌梗死、腦梗死、腎損害等動(dòng)脈栓塞性疾病的獨(dú)立危害因素[21]。血脂過高的原因是由于進(jìn)食含脂肪和膽固醇類食物過多，脂類代謝紊亂，或因脂類產(chǎn)生過多或因其降解或轉(zhuǎn)運(yùn)發(fā)生障礙都可造成高脂血癥。血脂是動(dòng)脈粥樣硬化(AS)形成的基礎(chǔ)，血脂代謝紊亂是AS形成的主要危險(xiǎn)因素之一，特別是TC及LDL-C水平增高是致AS的危險(xiǎn)指標(biāo)，血中HDL-C水平與冠心病發(fā)病和AS成負(fù)相關(guān)[22]。近年來，中藥降血脂研究不斷深入，發(fā)現(xiàn)中藥對(duì)高脂血癥有作用，且能防治動(dòng)脈粥樣硬化的作用，成為當(dāng)前降血脂藥物研究的熱點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)以蛋黃乳劑建立實(shí)驗(yàn)性高脂血癥小鼠模型，研究黃藤素對(duì)血脂的影響。結(jié)果表明，黃藤素能降低高脂血癥小鼠血清中TG，這對(duì)于調(diào)節(jié)血脂異常，防止AS起到一定作用。血漿中乳糜微粒(CM)，極低密度脂蛋白(VLDL)，這兩類脂蛋白統(tǒng)稱為富含甘油三酯的脂蛋白，也就是說，血漿甘油三酯濃度升高實(shí)際上是反映CM和(或)VLDL濃度升高，凡引起血漿中CM和(或)VLDL升高的原因均可導(dǎo)致高甘油三酯血癥[23]。近年來，大量流行病學(xué)調(diào)查研究表明，甘油三酯是冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，同時(shí)還有促動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂的危險(xiǎn)[24，25]。黃藤素高、低劑量組給藥后，小鼠血清TG有顯著性降低，說明黃藤素具有降低TG的作用。在中老年人群中，血清甘油三酯升高是較為常見的現(xiàn)象，血清甘油三酯升高是冠心病的重要危險(xiǎn)因素，對(duì)于防止缺血性心臟病發(fā)作起到一定的作用。黃藤素降低TG的機(jī)制有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

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國家中醫(yī)藥管理局十二五重點(diǎn)建設(shè)學(xué)科“傣藥學(xué)”；云南省衛(wèi)生廳民族醫(yī)藥文獻(xiàn)整理及中藥民族藥院內(nèi)制劑研發(fā)項(xiàng)目(NO：KY14)；云南中醫(yī)學(xué)院校級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(NO：00370101708)

王維麗，在讀研究生，中藥藥理與應(yīng)用研究，E-mail：191045876@qq.com

△通信作者：段小花，醫(yī)學(xué)碩士，講師，從事中藥藥理與應(yīng)用研究，Tel：0871-65919481，E-mail：y.zdxh@163.com

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