YAP和CREB蛋白在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及臨床意義

王君+++曲群

[摘要] 目的 探討YAP及CREB蛋白在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)情況及其意義。方法 采用免疫組化檢測(cè)2008年1月—2013年12月收治的93例患者，觀察20例正常卵巢組織、20例良性卵巢腫瘤及53例上皮性卵巢癌組織中YAP、CREB蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 YAP在上皮性卵巢癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為90.57%，而在正常卵巢組織及卵巢良性上皮性腫瘤僅為50%、65%。CREB蛋白在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)情況（77.36%）也高于正常卵巢組織（5%），兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 YAP、CREB蛋白可能與上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，YAP、CREB在上皮性卵巢癌中的異常表達(dá)可為上皮性卵巢癌的診斷、治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 卵巢癌；上皮性腫瘤；YAP；CREB；免疫組化

[中圖分類號(hào)] R737.31 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2014）12（b）-0033-03

卵巢癌是常見(jiàn)的婦科生殖器官惡性腫瘤之一，因其部位較深，早期病變不易發(fā)現(xiàn)，晚期病例也缺乏有效的治療手段，5年生存率僅為15%～30%[1]，故而嚴(yán)重的威脅著婦女的健康及生命，該實(shí)驗(yàn)對(duì)該院2008年1月—2013年12月病理科存檔的蠟塊93例進(jìn)行研究，探討YAP和CREB蛋白在正常卵巢組織、良性上皮性卵巢腫瘤及卵巢上皮性癌中的表達(dá)情況，分析其表達(dá)的差異性及卵巢上皮性癌臨床病理因素間的關(guān)系以及兩者間的相關(guān)性，探討其在卵巢上皮性惡性腫瘤發(fā)生中的作用機(jī)制以及它們之間的相關(guān)關(guān)系，從而有助于為卵巢上皮性惡性腫瘤的早期診斷提供新的分子生物學(xué)標(biāo)志物，同時(shí)為臨床治療途徑提供一些思路，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科存檔的蠟塊93例，其中20例為正常卵巢組織，20例良性上皮性卵巢腫瘤，53例卵巢上皮性癌，其中卵巢上皮性癌患者年齡37～68歲，中位數(shù)為56歲，采用免疫組化（SP）法檢測(cè)YAP和CREB蛋白的表達(dá)情況，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析其表達(dá)的差異性及與惡性卵巢上皮性腫瘤臨床病理因素的關(guān)系，同時(shí)探討其二者間的相關(guān)性。所有患者術(shù)前均未接受放、化學(xué)或免疫治療，所有標(biāo)本均經(jīng)該院病理科確診。

1.2 標(biāo)本的處理

組織標(biāo)本均用磷酸緩沖液配置的10%中性甲醛固定液及時(shí)固定后，進(jìn)行乙醇梯度脫水，二甲苯透明以及石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。

1.3 免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)

（1）兔抗人YAP多克隆均抗體購(gòu)自美國(guó)CST公司，兔抗人CREB多克隆均抗體購(gòu)自美國(guó)CST公司，PBS（0.001M，PH7.4）購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，SP超敏試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，按試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行染色，每次試驗(yàn)均設(shè)陰性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對(duì)照，以公司提供的陽(yáng)性片染色作為陽(yáng)性對(duì)照。（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷：①根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分，陽(yáng)性細(xì)胞≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；②染色強(qiáng)度計(jì)分以細(xì)胞顯色反應(yīng)程度計(jì)分：無(wú)著色0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；③將陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比分值和染色強(qiáng)度分值相乘為結(jié)果：0分為陰性（-）， l～4分為弱陽(yáng)性（+），5～8分為中度陽(yáng)性（++），9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。以購(gòu)買的陽(yáng)性片免疫組化染色結(jié)果為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，采用雙盲法由兩位病理科醫(yī)生閱片，取其平均值為最終結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。χ2檢驗(yàn)用于計(jì)數(shù)資料的比較分析，YAP和CREB的相關(guān)分析用Spearman等級(jí)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 YAP、CREB在不同卵巢組織中的表達(dá)

在實(shí)驗(yàn)中，YAP在正常卵巢組織陽(yáng)性表達(dá)率為50%，YAP在良性上皮卵巢腫瘤的陽(yáng)性表達(dá)率為65%，在惡性上皮性卵巢腫瘤中陽(yáng)性表達(dá)率為90.57%，CREB在正常卵巢組織陽(yáng)性表達(dá)率為5%，在良性上皮卵巢腫瘤的陽(yáng)性表達(dá)率為25%，在惡性上皮性卵巢腫瘤中陽(yáng)性表達(dá)率為77.36%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

表1 YAP、CREB在三種組織中的表達(dá)[n（%）]

2.2 YAP、CREB表達(dá)與卵巢上皮性癌臨床病理學(xué)參數(shù)關(guān)系

YAP的陽(yáng)性表達(dá)在正常卵巢組織與良性卵巢上皮性腫瘤之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05，YAP在組織學(xué)中低分化（G3）組中的陽(yáng)性表達(dá)（97.1%）與高中分化（GI-G2）組的表達(dá)（77.8%）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05（χ2=5.217，P=0.040）；但YAP在上皮性卵巢癌陽(yáng)性表達(dá)與患者年齡、臨床分期及淋巴轉(zhuǎn)移差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在正常卵巢組織與良性卵巢上皮性腫瘤之間CREB的陽(yáng)性表達(dá)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。CREB在組織學(xué)中低分化（G3）組中的陽(yáng)性表達(dá)（85.7%）與高中分化（GI-G2）組的表達(dá)（61.1%）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05（χ2=9.382，P=0.001）；CREB在上皮性卵巢癌淋巴轉(zhuǎn)移中陽(yáng)性率（77.4%）較I-Ⅱ期（69.2%）有升高趨勢(shì)，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05（χ2=5.568，P=0.015）。另外，CREB的陽(yáng)性表達(dá)與患者年齡、臨床分期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.3 YAP和CREB二者表達(dá)的相關(guān)性分析

該研究顯示在正常在卵巢上皮細(xì)胞中，YAP和CREB陽(yáng)性表達(dá)率分別為50%和50%，在卵巢上皮性癌組織中YAP和CREB陽(yáng)性表達(dá)率分別為90.75%和77.36，經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，卵巢上皮性癌組織中的YAP和CREB表達(dá)呈顯著的正相關(guān)（r=0.442，P=0.001<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。endprint

3 討論

腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因索、多步驟、多階段的復(fù)雜過(guò)程。正常情況下。細(xì)胞增生與凋亡之間的動(dòng)態(tài)平衡維持著組織器官正常大小和機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，而腫瘤的發(fā)生發(fā)展往往關(guān)聯(lián)于細(xì)胞發(fā)生異常增殖或凋亡抑制。Hippo信號(hào)通路是一種維持增生與凋亡間平衡的信號(hào)通路，YAP蛋白是Hippo信號(hào)通路中一個(gè)起中心作用的蛋白，在細(xì)胞正常生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，YAP作為一種轉(zhuǎn)錄共激活因子通過(guò)其PPXY結(jié)構(gòu)域可與轉(zhuǎn)錄因子TEAD家族，P73，SMAD家族（BMP通路），Bric2，Bnc5（IAP家族），ErbB4胞質(zhì)結(jié)合域，PEBP2a等結(jié)合[2]促進(jìn)Hippo下游目的基因的表達(dá)從而促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)YAP基因存在于與多種人類腫瘤相關(guān)的染色體1lq22上，因此YAP基因是一種原癌基因[3]。Angela A等[4]采用免疫組化方法檢測(cè)了YAP在12例正常卵巢組織及42例卵巢漿液性囊腺癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)YAP在漿液性囊腺癌組中的陽(yáng)性率（98%）顯著高于在正常卵巢上皮細(xì)胞的陽(yáng)性率（50%），提示YAP的過(guò)量表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞增生及凋亡的失衡，直接或間接地參與漿液性囊腺癌的發(fā)生。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果同上述結(jié)果，并與組織分期有關(guān)，提示YAP與卵巢上皮性癌的發(fā)生有密切關(guān)系。

CREB，即cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白，于80年代后期被發(fā)現(xiàn)，是PKA重要的下游轉(zhuǎn)錄因子。它具有調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄、生理節(jié)奏、細(xì)胞的發(fā)育與生存、成癮性和抑郁以及學(xué)習(xí)記憶等功能[5]。多項(xiàng)研究表明，由CREB參與調(diào)控的靶基因在細(xì)胞增殖、分化、存活和細(xì)胞周期的調(diào)控中起重要作用。其過(guò)表達(dá)能促使細(xì)胞存活和增殖，在多種腫瘤的發(fā)生中具有重要作用[6-9] 。CREB表達(dá)水平及磷酸化程度在卵巢上皮細(xì)胞及顆粒細(xì)胞的生存中也具有重要作用[10]，卵泡刺激素和黃體生成素至少部分是通過(guò)cAMP細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路調(diào)節(jié)卵巢的功能。與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[11]。該實(shí)驗(yàn)中，CREB與卵巢上皮性癌的組織學(xué)分期及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示CREB可能在卵巢上皮性癌的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后起一定作用。

綜上所述，YAP和 CREB可能是卵巢癌發(fā)生的致癌因素，且都在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，二者在卵巢癌中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)，隨著腫瘤治療技術(shù)水平分飛速發(fā)展，目前致癌基因的研究由單一基因發(fā)展到對(duì)多個(gè)基因協(xié)同作用和相互調(diào)節(jié)機(jī)制的研究。癌基因的靶向治療為臨床婦科惡性腫瘤的診斷及治療開(kāi)辟一條新的途徑，在將來(lái)，YAP與CREB可能成為用于早期篩查惡性腫瘤的最新分子標(biāo)志物，從而為研發(fā)新的抗腫瘤藥物提供新的思路。

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（收稿日期：2014-09-16）endprint