miniVIDAS在檢測(cè)生殖和泌尿系沙眼衣原體感染中的應(yīng)用探討

單吉蘋(píng) 王雙力

(1哈爾濱市第一醫(yī)院 黑龍江 哈爾濱 150000;2武警黑龍江總隊(duì)醫(yī)院 黑龍江 哈爾濱 150076)

miniVIDAS在檢測(cè)生殖和泌尿系沙眼衣原體感染中的應(yīng)用探討

單吉蘋(píng)1王雙力2

(1哈爾濱市第一醫(yī)院 黑龍江 哈爾濱 150000;2武警黑龍江總隊(duì)醫(yī)院 黑龍江 哈爾濱 150076)

目的：應(yīng)用miniVIDAS對(duì)生殖和泌尿系中尿液和分泌物樣本進(jìn)行沙眼衣原體檢測(cè)，從而論證其敏感性和特異性。方法：收集疑似或確診泌尿生殖道感染患者尿液及分泌物標(biāo)本共490份。應(yīng)用miniVIDAS對(duì)尿液和分泌物樣本進(jìn)行沙眼衣原體檢測(cè)，結(jié)果與實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(realtime PCR)進(jìn)行比較，從而評(píng)價(jià)其在尿液和分泌物標(biāo)本檢測(cè)中的敏感性和特異性。結(jié)果：1、拭子樣本檢測(cè)結(jié)果:應(yīng)用miniVIDAS共檢出20份陽(yáng)性樣本，經(jīng)與real-time PCR的結(jié)果比對(duì)，其結(jié)果高度一致;對(duì)280份陰性結(jié)果與real-time PCR的結(jié)果比對(duì)，其結(jié)果也完全一致。從而說(shuō)明miniVIDAS在檢測(cè)拭子樣本的敏感度、特異度等方面其結(jié)果均達(dá)到100%。2、尿液樣本檢測(cè)結(jié)果:應(yīng)用miniVIDAS共檢出30份陽(yáng)性樣本，與real-time PCR結(jié)果比對(duì)后，10份為真陽(yáng)性，20份為假陽(yáng)性。160份陰性樣本經(jīng)比后全部一致。經(jīng)過(guò)一致性分析，miniVIDAS檢測(cè)尿液樣本的敏感度為100%，特異度為87.8%。結(jié)論：應(yīng)用miniVIDAS對(duì)生殖和泌尿系中尿液和分泌物樣本進(jìn)行沙眼衣原體檢測(cè)與real-time PCR的結(jié)果未達(dá)到高度一致?？赡苁怯捎谀蛞褐泻信c沙眼衣原體抗原非常相似的其他微生物，從而與固相載體的抗體進(jìn)行非特異性結(jié)合，而令尿液檢測(cè)衣原體的特異度偏低，說(shuō)明miniVIDAS對(duì)尿液樣本沙眼衣原體感染的檢測(cè)并不適合做為篩選實(shí)驗(yàn)。

miniVIDAS;沙眼衣原體;尿液;分泌物

本實(shí)驗(yàn)方法是通過(guò)將法國(guó)生物梅里埃miniVIDAS的酶聯(lián)熒光免疫法所得結(jié)果與實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time PCR)進(jìn)行比較，從而評(píng)價(jià)其在尿液和分泌物標(biāo)本檢測(cè)中的敏感性和特異性。

一、材料與方法

1.標(biāo)本來(lái)源：2014年6月至12月由哈爾濱市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科收集的疑似或確診泌尿生殖道感染患者尿液及分泌物標(biāo)本共490份。其中男性拭子樣本150份，女性拭子樣本150份。男性首段尿樣本110份，女性首段尿樣本80份。

1.1 標(biāo)本采集方法：

1.1.1 尿液樣本采集∶采集前先用生理鹽水清潔尿道口，采集前至少2h不要排尿，用高壓無(wú)菌試管收集10-00ml的首段尿液;取離心沉淀物.

1.1.2 拭子樣本采集：首先在采樣前先用生理鹽水清洗男性尿道口和女性宮頸外分泌物，用專(zhuān)用棉拭子(或?qū)m頸刷)于尿道口或?qū)m頸口取尿道分泌物或?qū)m頸口分泌物，密閉送檢;

2.儀器與試劑：

2.1 儀器：法國(guó)生物梅里埃公司miniVIDAS全自動(dòng)熒光酶免疫分析儀、Roche LightCycler2.0檢測(cè)分析儀、高速低溫離心機(jī)，生物安全柜，恒溫水浴箱，

2.2 試劑：miniVIDAS配套試劑盒和達(dá)安基因沙眼衣原體核酸檢測(cè)試劑盒。

3.使用Roche LightCycler2.0檢測(cè)分析儀檢測(cè)衣原體：

取PCR反應(yīng)管，分別加入待測(cè)標(biāo)本及陰陽(yáng)性臨界值質(zhì)控品 2μl，6500rpm離心，之后將各反應(yīng)管按順序放入圓形卡盤(pán)，按照儀器操作程序進(jìn)行PCR擴(kuò)增;調(diào)整熒光數(shù)值(Fluorescene)為F1/F2，調(diào)整噪聲容限，使陰性質(zhì)控品Ct值為40，臨界陽(yáng)性質(zhì)控品Ct為32～34，強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控品 Ct為18～20，最后記錄儀器自動(dòng)分析計(jì)算出的Ct值。

4.使用miniVIDAS檢測(cè)衣原體：

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前先將固相載體和試劑條置于室溫環(huán)境下15min，然后在裝有樣本的試管中加入2mlVIDAS樣本處理液，室溫30min后將試管震蕩混勻，然后置于95℃水30min。冷卻混勻后在試劑條樣本孔內(nèi)加入350微升，上機(jī)檢測(cè)。同時(shí)設(shè)S1為標(biāo)準(zhǔn)、C1為陽(yáng)性對(duì)照、C2為陰性對(duì)照。結(jié)果判定：當(dāng)TV＜60為陰性;60＜TV＜80為臨界;TV＞80為陽(yáng)性。

二、結(jié)果

1.拭子樣本檢測(cè)結(jié)果：應(yīng)用miniVIDAS對(duì)本實(shí)驗(yàn)中300份拭子樣本所進(jìn)行的檢測(cè)中，共檢出20份陽(yáng)性樣本，其中男性5份和女性15份，經(jīng)與real-time PCR的結(jié)果比對(duì)，其結(jié)果完全一致;對(duì)280份陰性結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，其結(jié)果也完全一致，從而說(shuō)明miniVIDAS在檢測(cè)拭子樣本的敏感度、特異度等方面其結(jié)果均達(dá)到100%。

2、尿液樣本檢測(cè)結(jié)果：應(yīng)用miniVIDAS對(duì)本實(shí)驗(yàn)中尿液樣本所進(jìn)行的沙眼衣原體檢測(cè)中，共檢出30份陽(yáng)性樣本，其中男性10份和女性20份，經(jīng)與real-time PCR的結(jié)果比對(duì)，男性中3份為真陽(yáng)性，7份為假陽(yáng)性;女性中7份為真陽(yáng)性，13份為假陽(yáng)性。陰性樣本160份與real-time PCR結(jié)果全部一致。經(jīng)過(guò)一致性分析，miniVIDAS檢測(cè)尿液樣本的敏感度為100%，特異度為87.8%。從而說(shuō)明兩者的結(jié)果未達(dá)到高度一致。

三、討論

本實(shí)驗(yàn)中，尿液樣本完全由患者自行留取，很大程度上并不能保證取得的是首段尿，男性拭子標(biāo)本是自行留取，而女性宮頸拭子樣本也是由不同的醫(yī)生取得，因此取樣也不能確保相對(duì)一致性，本次研究總計(jì)只取得了50份陽(yáng)性樣本，衣原體的陽(yáng)性率偏低，故此可能會(huì)影響miniVIDAS敏感度的準(zhǔn)確性。應(yīng)用miniVIDAS檢測(cè)尿液樣本的敏感度為100%，特異度為87.8%，可能是由于尿液中含有與沙眼衣原體抗原非常相似的其他微生物，從而與固相載體的抗體進(jìn)行非特異性結(jié)合，而令尿液檢測(cè)衣原體的特異度偏低，說(shuō)明miniVIDAS對(duì)尿液樣本沙眼衣原體感染的檢測(cè)并不適合做為篩選實(shí)驗(yàn)。

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1009-6019(2015)09-0057-02