中獸藥新藥毒理學(xué)研究及一般毒理學(xué)研究中應(yīng)當(dāng)注意的問題

薄永恒高迎春楊志昆馮 濤張傳津章安源

(1.山東省獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)所,山東濟(jì)南 250022;

2.山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測與風(fēng)險(xiǎn)評估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東濟(jì)南 250022)

中獸藥新藥毒理學(xué)研究及一般毒理學(xué)研究中應(yīng)當(dāng)注意的問題

薄永恒1，2*高迎春1，2楊志昆1，2馮 濤1，2張傳津1，2章安源1，2

(1.山東省獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)所,山東濟(jì)南 250022;

2.山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測與風(fēng)險(xiǎn)評估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東濟(jì)南 250022)

本文在對中獸藥新藥的毒理學(xué)研究的重要性和注意事項(xiàng)的綜述基礎(chǔ)上,詳細(xì)介紹了一般毒理學(xué)研究當(dāng)中需要注意的問題,以期為中獸藥新藥毒理學(xué)的研究提供參考。

中獸藥;毒理學(xué);注意事項(xiàng)

藥品作為一種特殊商品，它的安全性是不言而喻的，也是其他商品不可相比的。我們對新獸藥進(jìn)行臨床前毒理學(xué)研究與評價(jià)的目的，就是為研究新藥對機(jī)體的損害及損害程度提供科學(xué)的依據(jù)，從而保障臨床用藥的安全性。一種新獸藥的毒理學(xué)研究工作做得細(xì)致、深入，配合藥效學(xué)的有效劑量，臨床應(yīng)用時(shí)方法得當(dāng)，可以起到拯救生命，避免經(jīng)濟(jì)損失的作用；否則，影響動物疾病發(fā)展，結(jié)果可能是動物的死亡，病情的蔓延，帶來不可估量的損失[1]。

1 中獸藥毒理學(xué)研究的重要性及分類

我國中藥的發(fā)展歷史悠久，文獻(xiàn)中記載的中藥已達(dá)8000多種，中藥在祖國醫(yī)學(xué)中占有重要地位。近年來，隨著養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，中獸藥因其有細(xì)菌不易產(chǎn)生耐藥性、廣譜抗病毒、扶正祛邪等方面的作用，許多獸用純中藥制劑在獸醫(yī)臨床上得到廣泛的應(yīng)用，但隨之而來的是中獸藥的毒性和藥物殘留問題。有些人認(rèn)為中獸藥比西藥安全，無毒副作用，無殘留，但是在實(shí)際應(yīng)用中，有的中獸藥也具有一定的毒副作用，可長期以來被視為無毒的中獸藥，用法不當(dāng)也可產(chǎn)生毒性。而且中獸藥成分復(fù)雜，有些成分的潛在毒性尚無充分了解，可出現(xiàn)意想不到的不良反應(yīng)。例如，夏枯草、土鱉蟲、牛蒡子等可引起過敏[2]；款冬花、花椒的揮發(fā)油有致癌作用；石菖蒲和水菖蒲揮發(fā)油可以致畸；廣防已、關(guān)木通含有馬兜鈴酸，能引起染色體損害并對嚙齒動物有較強(qiáng)的致癌作用[3]。新中獸藥能否獲得相關(guān)部門的批準(zhǔn)而上市銷售和臨床使用，首先要對其有效性和安全性綜合評價(jià)。因此，作為中獸藥安全性評價(jià)中的中藥毒理學(xué)也越來越重要，毒理學(xué)逐漸從藥理學(xué)中分離出來而初步形成了一個(gè)獨(dú)立的學(xué)科。

中獸藥毒理學(xué)研究與西藥毒理學(xué)研究相比，在廣度上和深度上都有較大的差距。有關(guān)中獸藥毒副作用的研究尚未形成真正意義上的中獸藥毒理學(xué)。廣義的中獸藥毒理學(xué)應(yīng)當(dāng)包括基礎(chǔ)理論性和應(yīng)用性兩部分。中獸藥理論中所涉及的“18反”和“19畏”藥性理論、重金屬的毒性、古代文獻(xiàn)中中獸藥毒性（大毒、有毒、小毒）的分類依據(jù)以及中藥毒代動力學(xué)的方法學(xué)等內(nèi)容屬于基礎(chǔ)理論性的中獸藥毒理學(xué)；而以臨床應(yīng)用和新藥注冊為目的的藥物安全性評價(jià)則是應(yīng)用性的中獸藥毒理學(xué)。事實(shí)上二者也難以截然分開。

2 一般毒性實(shí)驗(yàn)需要注意的問題

一般毒性實(shí)驗(yàn)是中獸藥毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)的首要實(shí)驗(yàn)，也是初步確定毒性大小的實(shí)驗(yàn)，因此，一般毒性實(shí)驗(yàn)做的成功與否關(guān)系到后續(xù)毒理實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。中獸藥新藥審批中注冊資料要求中毒理學(xué)方面對一般毒性即：急性和長期毒性試驗(yàn)要求比較多，下面就是一般毒理學(xué)試驗(yàn)研究中需要注意問題的詳述。

2.1 注意相關(guān)法規(guī)的研究

首先要認(rèn)真研究《新獸藥審批》避免對新獸藥審批辦法及相關(guān)法規(guī)認(rèn)識上的誤區(qū)，理解錯(cuò)位等。在新藥研制中，對法規(guī)研究不夠深透，輕易定方、開發(fā)新藥而造成資金和時(shí)間浪費(fèi)的例子不少。比如某中藥的傳統(tǒng)復(fù)方制劑在其毒理學(xué)研究中做了急性毒性，亞急性毒性試驗(yàn)，結(jié)果不錯(cuò)，沒有毒性；但在《中獸藥、天然藥物注冊分類及注冊資料要求》中，有關(guān)三類1中的新中獸藥——傳統(tǒng)中獸藥復(fù)方制劑的規(guī)定：“傳統(tǒng)中獸藥復(fù)方制劑，處方中藥材必須具有獸藥國家標(biāo)準(zhǔn)，并且該制劑的主治病證在國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)中沒有收載，可免做藥效、毒理研究。但是，如果有下列情況之一者需要做毒理試驗(yàn)：①含有獸藥國家標(biāo)準(zhǔn)中標(biāo)示有毒性（劇毒或有毒）及現(xiàn)代毒理學(xué)證明有毒性的藥材；②含有十八反、十九畏的配伍禁忌”。而此中獸藥復(fù)方中沒有國家規(guī)定的毒性單方，也沒有十八反、十九畏的配伍禁忌。因此，此復(fù)方的藥效、毒理試驗(yàn)可以免去，避免資金和時(shí)間浪費(fèi)。所以對相關(guān)法規(guī)的研究是十分必要的。

2.2 對中藥新藥的全面了解

在進(jìn)行一般毒理學(xué)試驗(yàn)之前要對中藥進(jìn)行充分的了解：①中藥復(fù)方或單方成分組成；②他們各自一般毒性大小；③理化性質(zhì)：熔沸點(diǎn)，水溶性或脂溶性，在常見溶劑中的溶解度、乳化性或混懸性、儲存穩(wěn)定性等；④了解中藥的使用情況，包括使用方式，使用范圍，給藥途徑，給藥劑量。這些資料都是為毒性試驗(yàn)的設(shè)計(jì)和對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合評價(jià)等提供了參考。

2.3 嚴(yán)格全面地進(jìn)行動物試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)計(jì)關(guān)系到試驗(yàn)的各個(gè)方面，因此要仔細(xì)周全地設(shè)計(jì)。主要從以下幾個(gè)方面入手：

2.3.1 試驗(yàn)動物的選擇

（1）物種與品系的選擇 對于中獸藥來說，一般選擇昆明鼠，其他品系的小白鼠也有選擇，大白鼠也可選擇，也可以直接選擇靶動物。具體還要看實(shí)際情況和藥物的特性而定，比如豚鼠對組織胺極敏感，所以很適合作平喘藥和抗組織胺藥的毒性研究。

（2）個(gè)體的選擇 一定要嚴(yán)格選擇健康、生理狀況、營養(yǎng)狀況良好的試驗(yàn)動物，年齡、體重、性別要按標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格控制，同一批試驗(yàn)動物體重變異范圍不得超過所用動物平均體重的10%，否則會影響試驗(yàn)結(jié)果。試驗(yàn)動物的體重是在進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)稱重，如果購買小白鼠時(shí)體重是18-20g，但是為了適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，飼養(yǎng)了3天，反而動物的體重增加的過多，不再適合做試驗(yàn)了。生理狀態(tài)一定要求是沒交配，沒受孕的動物。

（3）動物的數(shù)量及標(biāo)記 動物數(shù)量一般急性要求每組十只，雌雄各半，而且要注意雌雄分籠喂養(yǎng)。動物要進(jìn)行標(biāo)記，也有很多方法，不再贅述。

2.3.2 飼養(yǎng)環(huán)境及條件 動物的飼養(yǎng)一定要在標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下飼養(yǎng)。例如，大白鼠對環(huán)境因素特別敏感，強(qiáng)烈的陽光，噪音都可以引起大白鼠的生化指標(biāo)的變化，影響了試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.3.3 給藥途徑 經(jīng)口的灌胃，飼喂，吞膠囊；經(jīng)皮膚染毒的；其他的如靜脈注射、肌肉注射、皮下注射和腹腔注射等。一般中藥用于灌胃的比較多，其中要注意灌胃體積，小白鼠每只最多一次灌胃0.8ml，可多次灌胃，但是容易灌嗆，從而引起肺部的炎癥，所以要注意灌胃針的制作和灌胃的手法，盡量避免灌嗆。大白鼠一般不會出現(xiàn)灌嗆現(xiàn)象，主要因?yàn)榇蟀资笪傅奶厥饨馄蕵?gòu)造沒有逆嘔現(xiàn)象。中藥一般毒性較小，灌胃條件下多測不到LD50，所以要測最大耐受量實(shí)驗(yàn)，此時(shí)要注意中藥最大濃度，以及最大灌胃量的關(guān)系，避免試驗(yàn)的失敗，一般中藥水提物的最大濃度可達(dá)到3～5g/ml，但需要注意中藥水溶性不一致。

2.3.4 劑量的選擇 首先做急性毒性試驗(yàn)前了解中藥的成分，從而大體了解中藥的毒性，必要時(shí)，可先做預(yù)試驗(yàn)，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)來確定LD50的大體劑量，或根據(jù)預(yù)試驗(yàn)確定中藥無毒來做最大耐受量試驗(yàn)。在做慢性毒性實(shí)驗(yàn)時(shí)，一般確定高、中、低三個(gè)劑量和一個(gè)空白對照組。三個(gè)劑量的確定都都有相關(guān)的規(guī)定。

2.3.5 給藥的時(shí)間 急性毒性試驗(yàn)時(shí)間為7d，慢性毒性試驗(yàn)根據(jù)實(shí)際臨床用藥時(shí)間的不同而不同，臨床用藥期為1～3d，慢性毒性試驗(yàn)時(shí)間為14d；臨床用藥期為7d，臨床用藥期為28d；臨床用藥期為30d，慢性毒性試驗(yàn)時(shí)間為90d；臨床用藥期為30d以上的慢性毒性試驗(yàn)時(shí)間為6個(gè)月。

2.3.6 試驗(yàn)結(jié)果的觀察和試驗(yàn)指標(biāo)的測定 這里要觀察的現(xiàn)象和指標(biāo)的測定在相關(guān)資料上都有具體介紹，注意各種病理現(xiàn)象的觀察，及大體解剖的觀察，慢性試驗(yàn)后的各種指標(biāo)都要認(rèn)真測定，不可遺漏。

3 毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中的幾點(diǎn)思考

筆者在大量毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，獲得了一些啟發(fā)和思考。從毒理學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)角度來分析，新藥臨床前毒理學(xué)研究與評價(jià)，其作用又是有一定局限性，并不是做了一些毒理學(xué)研究工作，尚未發(fā)現(xiàn)明顯毒性，就確定該藥上臨床就一定安全。進(jìn)一步分析，發(fā)現(xiàn)以下幾點(diǎn)問題，值得注意。

（1）實(shí)驗(yàn)動物與靶動物對藥物的反應(yīng)有種屬差異性。有的反應(yīng)只對靶動物出現(xiàn)，有的只對實(shí)驗(yàn)動物出現(xiàn)，而對實(shí)驗(yàn)動物和靶動物共同出現(xiàn)的反應(yīng)僅占較小的比率。因此，以動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果直接推論到靶動物的一致性，也只能是一個(gè)較小的比率。

（2）毒性實(shí)驗(yàn)所用的動物多是在嚴(yán)格管理的條件下繁育出來的，是健康的。而臨床用藥的是靶動物，其病情輕重不同，病的種類不同，個(gè)體體質(zhì)不同，對藥物的敏感性不同。因此，實(shí)驗(yàn)動物與病畜對同一藥物的反應(yīng)也不可能完全相同。

（3）在動物毒性試驗(yàn)中所用藥物劑量較大，它與臨床的用藥量相差懸殊，故兩者的反應(yīng)難得一致。

（4）實(shí)驗(yàn)室設(shè)備條件、實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)水平等，都直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這也是一個(gè)極為重要的環(huán)節(jié)。

由此可見，干擾一般毒理學(xué)研究的因素很多。因此，一般毒理學(xué)研究結(jié)果能反應(yīng)出藥物的毒性，但其反映新藥臨床上的安全性有一定局限；另外提高實(shí)驗(yàn)人員的實(shí)驗(yàn)素質(zhì)也是影響毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的非常重要的一點(diǎn)。

（5）目前獸藥的毒理學(xué)技術(shù)要求就本身來講可以參考的資料也比較多，比如沈建忠主編的《動物毒理學(xué)》，農(nóng)業(yè)部1991年頒布的《新獸藥一般毒性試驗(yàn)技術(shù)要求》和《新獸藥特殊毒性試驗(yàn)技術(shù)要求》，但是很多還是參考人藥的各個(gè)法規(guī)和技術(shù)規(guī)范。在《新藥審批辦法》以及衛(wèi)生部先后制定了一系列的“補(bǔ)充規(guī)定”、“技術(shù)參考資料”，如《新藥（西藥）臨床前研究指導(dǎo)原則匯編》（藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)），《中藥新藥研究指南》（藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)）。1984 年國家科委頒布并實(shí)施《藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)定（試行）》即我國的 GLP 法規(guī)，繼續(xù)指導(dǎo)并推動中藥新藥的開發(fā)研究向科學(xué)化、規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化方向發(fā)展。

最后值得注意的是，一般毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)可靠受到前面介紹的各種環(huán)境因素，人為因素的影響，所以研究工作應(yīng)規(guī)范化、科學(xué)化，做到有法可依，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用數(shù)據(jù)說話。中獸藥的毒理試驗(yàn)不僅要規(guī)范操作，試驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告一定要實(shí)事求是，弄虛作假所造成的不良影響是嚴(yán)重的。要杜絕這類行為，不僅要提高科研人員的素質(zhì)，還要有相應(yīng)的法規(guī)進(jìn)行懲處。

[1] 趙雅靈.中藥新藥毒理學(xué)研究與評價(jià)[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2001，8（2）：48-49.

[2] 張曉玲.淺談中藥毒副作用[J].河南中藥，2002，22（2）：10-71.

[3] 袁何永.由馬兜鈴酸致腎病談中藥對腎的毒副作用[J].廣東藥學(xué)，2003，13（3）：59-61.

[4] 沈建忠.動物毒理學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002，83-113.

[5] 張均田.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1998：1810-1826.

項(xiàng)目來源：山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)控技術(shù)推廣。

薄永恒（1980-），男，獸醫(yī)師，博士，專業(yè)：獸藥藥理與毒理學(xué)，研究方向：獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)與獸藥殘留技術(shù)研究。