HPLC法測定香菊片中沒食子酸的含量

魏紅立 劉俊霞 呂勤芝

香菊片為中藥復方制劑，是國家基本藥物，處方由化香樹果序(除去種子)、夏枯草、野菊花、生黃芪、辛夷、防風、白芷、甘草、川芎水煎煮提取加工制成，方中化香樹果序為君藥，在香菊片現行質量標準中沒有對化香樹果序進行專屬性檢驗項目［1］，文獻未見對香菊片中沒食子酸含量進行報道。化香樹果序是化香樹的干燥果序，具有清熱解毒活血化瘀清腫排膿通竅止痛的功效民間用其治療鼻炎鼻塞，其湯劑治療鼻炎鼻竇炎，效果顯著，的有效成分為總酚、總黃酮、萜類、萘醌等［2－6］，抑制細菌作用較強可用于治療鼻炎、鼻竇炎等［5－7］，根據香菊片質量標準檢驗項目設置，主要檢測黃芪中黃芪甲苷作為質量控制指標，而處方中黃芪并非君藥且臨床主要功效為補氣固表，與香菊片辛散祛風清熱通竅的作用不相符［4］，不能正確體現該藥品確切療效，而沒食子酸為化香樹果序所含主要多酚類成分，因此本研究選擇沒食子酸為目標成分，選專屬性好準確度高的檢驗方法提高香菊片的質量可控性，以期完善該品的質量標準。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Waters e2695)2998型二極管陣列檢測器。沒食子酸對照品(110831-200302)購于中國藥品生物制品鑒定研究院，甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。香菊片(規格:每片重0.32 g)由陜西白云制藥有限公司生產。

1.2 溶液制備

1.2.1 對照品溶液制備:取沒食子酸對照品適量，精密稱定，10.88 mg置50 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取5 ml置50 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，即得(每 1毫升含沒食子酸0.02176 mg/ml)。

1.2.2 供試品溶液制備:取香菊片30片，除去包衣，精密稱定，研細，精密稱取1.5 g，置100 ml錐形瓶中，精密加水100 ml，稱定重量，超聲處理(360 W，50 Hz，40℃)45 min，取出，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量。濾過，取續濾液，即得。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜中采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(250 mm ×4.6 mm，5 μm)。流動相:甲醇 －0.035% 磷酸溶液(5:95)，流速 1.0 ml/min，柱溫30℃，進樣量 10 μl，檢測波長 270 nm。

2.2 專屬性 在上述色譜條件下，分別取對照品溶液，香菊片供試品溶液用0.45 μm濾膜過濾，分別進樣10 μl，記錄色譜圖，結果供試品色譜中，在與沒食子酸對照品相同的保留時間處有吸收峰，并與光譜庫進行匹配。見圖1。

圖1 自動標尺色譜圖;A為對照品，B為樣品

2.3 線性關系 分別精密吸取對照品溶液2、5、10、15、20 μl按2.1 項下的色譜條件進行測定，以峰面積積分值為縱坐標(Y)以進樣量為橫坐標(X)線性回歸，回歸方程為:Y=3000000X+2249.5Y=1.3346X+5.9293，r=1，在 0.04352 ～0.4352 μg 范圍內進樣量的與峰面積線性關系良好。見表1，圖2。

表1 香菊片中沒食子酸線性關系測定結果

圖2 線性關系

2.4 穩定性考察 取同供試品溶液，分別在室溫放置0、1、2、4、8、12 h 后精密吸取 10 μl進樣，測定峰面積值，RSD為0.90%。結果表明，供試品溶液在12 h內基本穩定。見表2。

表2 香菊片中沒食子酸穩定性測定結果 n=6

2.5 精密度考察 取對照品溶液重復進樣5次，按2.1項下的色譜條件測定沒食子酸的峰面積，RSD為0.79%。結果表明儀器精密度良好。見表3。

表3 香菊片中沒食子酸精密度測定結果 n=5

2.6 重復性考察 取同一個批號樣品，按上述方法制備6份供試品溶液，分別測定，結果的RSD為1.9%結果表明本方法具有較好的重復性。見表4。

表4 香菊片中沒食子酸重復性測定結果 n=6

2.7 加樣回收試驗 取已知沒食子酸含量(沒食子酸0.7870 mg/ml)的同一批樣品(批號:130504)適量，研細，取約0.5 g，精密稱定，分別精密加入沒食子酸對照品溶液(0.2176 mg/ml)5 ml。按照 1.2.2 項制備加標樣供試液。精密吸取加標樣供試液10 μl，按照上述測定方法測定其峰面積，計算回收率，平均回收率為91.99%，RSD為1.3%，結果表明本方法回收率良好。見表5。

表5 香菊片中沒食子酸的回收率測定結果 n=6

2.8 耐用性試驗 取同一批號的樣品用三種不同廠家的同類型色譜柱按上述方法進行測定，RSD為1.5%，表明該方法耐用性較好，不同廠家色譜柱均可滿足測定要求。見表6。

表6 香菊片中沒食子酸耐用性測定結果

2.9 樣品測定 取生產廠家為陜西白云制藥有限公司的4批樣品，按上述方法進行含量測定。見表7。

表7 香菊片中沒食子酸含量測定結果

3 討論

提取方法的選擇，根據沒食子酸的理化性質，沒食子酸易溶于水、醇和醚;具有酚及羧酸的性質，比較了以稀乙醇、水和甲醇分別作為溶劑，超聲、加熱回流作為提取方法［8－10］，發現以水作為溶劑，超聲 45 min，沒食子酸提取效果較好，且提取物色譜峰形較好，雜質峰對其無干擾，因此確定上述提取方法。

沒食子酸為多酚類成分，具有抗菌抗病毒的藥理作用，而香菊片質量標準相對比較簡單，專屬性不強，也不夠全面，未對其所含特征性生物活性成分進行色譜法鑒別，也未建立科學、準確、靈敏的光譜，色譜等方法對特征化學成分進行含量測定［11］。因此，測定香菊片中沒食子酸酚含量并對其進行質量評價，為深入研究其藥物作用機制具有重要意義。本文采用高效液相色譜測定香菊片中沒食子酸的含量，方法簡單快捷，重現性好，可作為香菊片沒食子酸這一特征性化學成分或定量檢測的一種方法，從而完善香菊片質量標準，加強香菊片的質量控制。

采用高效液相色譜法檢測香菊片中沒食子酸含量，并與光譜庫進行匹配，結果顯示，表明供試品溶液中相應色譜峰的光譜與沒食子酸光譜庫的光譜非常相似，可認為是同一物質［12］。

1 國家食品藥品監督管理局標準(試行).YBZ12122004.香菊片.

2 楊文慧，趙平，高昂.化香屬藥學研究概況.安徽農業科學，2011，39:19084-19085，19092.

3 王茂義，劉俊田，侯寧.RP-HPLC測定化香樹果序中沒食子酸的含量.中國藥師，2010，13:378-379.

4 梁剛，任紅莉.必士通牌香菊片有效成分的檢測方法CN201310578946.1 2014-03-26 CNKI

5 劉宇，龔漢明，葉吉明.香菊片對NIH小鼠抗炎、鎮痛作用的實驗研究.陜西中醫，2006，27:634-635.

6 李亞萍，雷曉琳.化香樹果序生藥學研究.海峽藥學，2009，21:73-75.7 石會麗，楊志峰.化香樹果序薄層色譜鑒別及相關問題試驗研究.西部中醫藥，2013，26:36-38

8 付煜榮，張萬明，陳桂敏，等.景三七中沒食子酸和總酚酸含量測定.中成藥，2006，28:1016-1018.

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10 鄭玉忠，張振霞，董婷霞，等.余甘子藥材HPLC指紋圖譜及其沒食子酸和鞣花酸含量.中國實驗方劑學雜志，2013，19:94-99.

11 孫立立，江波，袁振海，等.HPLC測定地榆片中沒食子酸的含量.中成藥，2006，28:1144-1147.

12 銀慧慧，劉偉，姜源明，等.桃金娘根中沒食子酸和總多酚含量測定.中國醫藥導報，2015，12:96-99.