葆青口服液抗D-半乳糖致大鼠皮膚衰老的實(shí)驗(yàn)

王蒙蒙，翟曉翔

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210046；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬徐州市中醫(yī)院，江蘇徐州221000)

葆青口服液抗D-半乳糖致大鼠皮膚衰老的實(shí)驗(yàn)

王蒙蒙1，2，翟曉翔2

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210046；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬徐州市中醫(yī)院，江蘇徐州221000)

目的 探討葆青口服液抗皮膚衰老的作用機(jī)制。 方法 清潔級(jí)成年SD雌性大鼠每日頸背部皮下注射20%的D-半乳糖1000 mg/(kg/d)造成大鼠衰老模型，2周后治療組分別灌服葆青口服液0.01 mL/(g/d)、戊酸雌二醇0.01 mL/(g/d)、當(dāng)歸芍藥散水煎劑0.01 mL/(g/d)，42 d后測(cè)定大鼠皮膚組織含水量、羥脯氨酸、大鼠血清雌二醇(E2)含量，考察其對(duì)大鼠子宮指數(shù)及卵巢指數(shù)的影響。 結(jié)果 與模型組比較，治療組大鼠皮膚組織含水量、羥脯氨酸、雌二醇含量明顯升高(P<0.01)，各指標(biāo)改善程度葆青口服液組明顯優(yōu)于當(dāng)歸芍藥散水煎劑組，對(duì)大鼠子宮指數(shù)、卵巢指數(shù)有明顯提高作用(P<0.01)。 結(jié)論 葆青口服液對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠皮膚有明顯的抗衰老作用，其作用與延緩卵巢衰老有關(guān)。

葆青口服液；當(dāng)歸芍藥散；皮膚衰老；D-半乳糖；抗皮膚衰老；作用機(jī)制

葆青口服液以張仲景《金匱要略》中的當(dāng)歸芍藥散為基礎(chǔ)方，經(jīng)現(xiàn)代工藝改良，添加膠原蛋白等功能性輔料制成。當(dāng)歸芍藥散養(yǎng)血調(diào)肝，健脾滲濕，為調(diào)和肝脾方。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的深入，當(dāng)歸芍藥散逐漸被用于治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心系疾病、消化系統(tǒng)疾病、外科雜癥、皮膚病等。20世紀(jì)80年代，日本學(xué)者首次用當(dāng)歸芍藥散治療老年癡呆癥療效顯著，此后其抗衰老的機(jī)制及應(yīng)用得到重視。為探討葆青口服液抗皮膚衰老的作用機(jī)制，我們采用D-半乳糖制作皮膚衰老大鼠模型，觀察其對(duì)皮膚衰老的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)，8～12周齡，雌性，SD大鼠40只，體質(zhì)量180～220 g，徐州醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK蘇2011-0003。飼養(yǎng)于徐州醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室，溫度23～25℃，相對(duì)濕度50%～60%，自由進(jìn)水、進(jìn)食。

1.2 藥物和試劑 葆青口服液(當(dāng)歸9 g，白芍30 g，茯苓12 g，白術(shù)12 g，澤瀉15 g，川芎9 g，膠原蛋白多肽)，由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院加工。當(dāng)歸芍藥散常規(guī)煎服的水煎劑(當(dāng)歸9 g，白芍30 g，茯苓12 g，白術(shù)12 g，澤瀉15 g，川芎9g)，徐州中醫(yī)院藥劑科提供。戊酸雌二醇片(DELPHARM Lille S.A.S.，批號(hào)：國藥準(zhǔn)字J20130009)，1 mg/片，溶于100 mL生理鹽水中制成濃度為0.01 mg/mL的溶液；D-半乳糖(上海源葉生物科技有限公司)；血清雌二醇放免測(cè)定試劑盒(北京華英生物技術(shù)研究所)；羥脯氨酸(hydroxyproline，HPY)試劑盒(南京建成生物有限公司)。

1.3 主要器材和儀器 JA2003N電子天平(上海佑科儀器儀表有限公司)；ZW-A微量振蕩器(蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司)；KDC-40低速離心機(jī)(安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司)；Bio Tek全自動(dòng)酶標(biāo)儀、DHG-9246A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、DK-8D電熱恒溫水槽(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；Thermo Scientific Forma 900 Series超低溫冰箱、立鶴牌電熱恒溫培養(yǎng)箱(山東濰坊精鷹醫(yī)療器械有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組 將篩選合格的大鼠隨機(jī)分為5組，每組8只，空白對(duì)照組按1 mL/(200 g/d)頸背部皮下注射生理鹽水，其它4組用20%的D-半乳糖生理鹽水溶液，按1 000 mg/(kg/d)頸背部皮下注射，每日1次，2周后空白組及模型組灌服生理鹽水0.01 mL/ (g/d)，葆青口服液組按0.01 mL/ (g/d)給大鼠灌服。戊酸雌二醇溶液按0.01 mL/(g/d)給大鼠灌服，當(dāng)歸芍藥散水煎劑組按0.01 mL/ (g/d)，連續(xù)42 d，注射按無菌操作進(jìn)行。

2.2 取材及指標(biāo)測(cè)定 實(shí)驗(yàn)結(jié)束前1天，4組大鼠禁食1 d，并選取大鼠背部脫毛，先用剪刀剪去鼠背上的粗毛，再用一次性備皮刀將剩余的絨毛剃除干凈，使背部皮膚充分暴露，面積2 cm×3 cm。

2.2.1 取材 用10%水合氯醛3～4 mL/kg腹腔注射麻醉，用采血針和真空采血試管在腹主動(dòng)脈處取全血3～5 mL，將血液迅速放入37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱，4℃、3 000 r/min離心10 min，提取血清，放入-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩２裳Y(jié)束后，立即解剖大鼠，取出雙側(cè)卵巢及子宮，剔除附著的脂肪組織，用濾紙擦拭，吸取表面的血液，保證卵巢及子宮的完整和清潔，并迅速剪取大鼠背部脫毛處的全層皮膚適量(不含皮下脂肪)，分2份，1份1 cm×1 cm待測(cè)皮膚濕重，1份精確稱取皮膚組織濕重30～50 mg，按試劑盒說明書要求用堿水樣法測(cè)羥脯氨酸含量。

2.2.2 雌二醇測(cè)定 采用放射免疫法測(cè)定大鼠血清E2的水平。

2.2.3 子宮、卵巢指數(shù)測(cè)定 用電子天平精密稱取各大鼠剔除脂肪后的兩側(cè)子宮和卵巢的濕重，并記錄，按以下公式計(jì)算子宮指數(shù)和卵巢指數(shù)。

子宮指數(shù)=子宮濕重/體重×100%

卵巢指數(shù)=卵巢濕重/體重×100%

2.2.4 對(duì)皮膚組織含水量的影響 用電子天平精密稱取每只大鼠背部全層皮膚的濕重，記錄并標(biāo)號(hào)，隨即將其放入烘箱中，于80℃烘干24 h，再稱取其干重。計(jì)算皮膚含水百分率。

含水百分率=(濕重-干重)/濕重×100%

3 結(jié) 果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見表1、表2。

表1 葆青口服液對(duì)大鼠血清E2、子宮指數(shù)、卵巢指數(shù)的影響

注：與模型組比較，1)P<0.01；與當(dāng)歸芍藥散組比較，2)P<0.01，3)P<0.05。

表2 葆青口服液對(duì)大鼠皮膚組織含水量及羥脯氨酸的影響

注：與模型組比較，1)P<0.01；與當(dāng)歸芍藥散組比較，2)P<0.01，3)P<0.05；與雌二醇組比較，4)P<0.05。

4 討 論

4.1 雌激素能促進(jìn)表皮增殖，抑制角質(zhì)細(xì)胞凋亡；增加膠原蛋白含量，抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，減少膠原的降解，增加透明質(zhì)酸和酸性黏多糖含量，保持皮膚厚度、彈性、水分及屏障功能[1]；并參與機(jī)體抗氧化反應(yīng)，通過多種途徑達(dá)到抗皮膚衰老的作用。然而，雌激素替代療法能增加宮內(nèi)膜癌、乳腺癌等的發(fā)病率，有較大的副作用[2-5]，不作為延緩皮膚衰老的首選。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸芍藥散除了具有清除自由基、抗氧化、調(diào)節(jié)血液及免疫系統(tǒng)等功能外，還具備良好的雌激素作用，能調(diào)控下丘腦-垂體-卵巢軸，抗皮膚衰老。

4.2 葆青口服液組與當(dāng)歸芍藥散組比較，對(duì)于大鼠血清E2、卵巢指數(shù)、子宮指數(shù)、皮膚組織含水量、羥脯氨酸含量的改善更明顯。說明葆青口服液能調(diào)節(jié)卵巢衰老大鼠模型的性激素水平，明顯升高血清E2水平，提高卵巢及子宮指數(shù)，延緩卵巢衰老，從而達(dá)到抗皮膚衰老的作用。

4.3 葆青口服液以當(dāng)歸芍藥散為基礎(chǔ)，添加功能性輔料，采取現(xiàn)代工藝提取中藥的活性成分，濃縮藥物，過濾雜質(zhì)，矯正苦澀味，是口感良好、攜帶方便的中藥復(fù)方制劑。當(dāng)歸芍藥散組方嚴(yán)謹(jǐn)，重用芍藥，養(yǎng)血柔肝，緩急止痛，配當(dāng)歸、川芎助其養(yǎng)血活血以調(diào)肝，三藥配合達(dá)到養(yǎng)肝、柔肝、疏肝之目的，防止皮膚衰老。另一方面白術(shù)健脾益氣，配茯苓、澤瀉滲濕力強(qiáng)，助其健脾祛濕，達(dá)到脾胃健運(yùn)而充養(yǎng)肌膚。本方養(yǎng)血疏肝與健脾滲濕同行，肝脾共調(diào)，使氣血運(yùn)行流暢，則可延年悅面，益顏展皺，乃駐顏美容、延緩皮膚衰老之要方。另外，葆青口服液中增加的膠原蛋白多肽，可以有效地提高角質(zhì)層含水量、透明質(zhì)酸的合成、防止皮膚干燥、改善面部膚質(zhì)等。

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2015-05-10

R285.5

A

1000-338X(2015)03-0052-02