板藍(lán)根口服液制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

強(qiáng)永在

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑部 內(nèi)蒙古 呼和浩特 010050）

板藍(lán)根口服液由板藍(lán)根單味藥組成，具有清熱解毒、涼血功效。臨床上常用于治療流感、扁桃體炎、腮腺炎等。文獻(xiàn)有用HPLC法測(cè)定靛藍(lán)、靛玉紅的報(bào)道[1-2]，但靛藍(lán)、靛玉紅為脂溶性成分，而本制劑采用水提醇沉工藝，難于客觀表征其內(nèi)在質(zhì)量，腺苷是板藍(lán)根所含的一種天然成分，具有抗凝血、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、松弛支氣管平滑肌、鎮(zhèn)靜中樞神經(jīng)和抗心率不齊的作用[3]。腺苷性質(zhì)比較穩(wěn)定，具水溶性。因此，參照有關(guān)文獻(xiàn)[4-5]，試采用高效液相色譜法測(cè)定板藍(lán)根口服液中腺苷的含量，結(jié)果準(zhǔn)確，操作方便，可用于該制劑的質(zhì)量控制。現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)開展情況及結(jié)果作一介紹。

1.儀器與試藥

島津SCL-10Avp 高效液相色譜儀；甲醇（色譜純，天津市康科德科技有限公司）；其他試劑均為分析純；水為蒸餾水；腺苷對(duì)照品（批號(hào)為110879-200202，含量測(cè)定）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；板藍(lán)根對(duì)照藥材（產(chǎn)地：河北，批號(hào)：140311）。

2.板藍(lán)根口服液的制備

將板藍(lán)根飲片500g，加8～10倍量水，煎煮2次，第一次2h，第二次1h，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1.1，放冷至室溫，加入乙醇至含醇量為60%，靜置12h，取上清液過濾，濾液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.10的清膏，加甜菊素0.4g，攪勻，加水調(diào)整總量至1000ml，過濾，灌裝（10mL/支），滅菌，罐裝，即得。按此工藝制備3批板藍(lán)根口服液。

3.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

3.1 定性分析

3.1.1 供試液的制備 板藍(lán)根口服液成品液，作為供試液。

3.1.2 對(duì)照藥材液的制備 取板藍(lán)根對(duì)照藥材5g，加水50ml，煎煮1h，濾過，濾液加乙醇使含乙醇量為60%，靜置。取上清液，回收乙醇，濃縮至10ml，作為對(duì)照藥材溶液。

3.1.3 薄層鑒別 按照薄層色譜法（中國(guó)藥典2015年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取供試品溶液2～6μL，對(duì)照藥材溶液2～4μL，分別點(diǎn)于同一含0.5%羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇-醋酸-水（4:1:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴2%茚三酮乙醇溶液，于105℃烘約數(shù)分鐘。結(jié)果供試品與對(duì)照藥材色譜在相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。

3.2 相對(duì)密度及pH測(cè)定

相對(duì)密度按相對(duì)密度法（中國(guó)藥典2015年版一部附錄Ⅶ A比重瓶法）測(cè)定，每批口服液平行測(cè)定3次，記錄結(jié)果。pH測(cè)定使用酸度計(jì)對(duì)口服液進(jìn)行pH 測(cè)定， 每批口服液平行測(cè)定3次，結(jié)果見表1。

表1 3批板藍(lán)根口服液的相對(duì)密度和pH值

3.3 定量分析

3.3.1 色譜條件

色譜柱：DiamonsidT M C18柱（5μm，4.6mm×200mm）；流動(dòng)相：硫酸鹽緩沖液（pH6.5）{取0.01mol/L硫酸二氫鈉68.5ml與0.01mol/L硫酸氫二鈉31.5ml混合}—甲醇（17:3）；流速：1mL/min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL。理論塔板數(shù)按腺苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

3.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取腺苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1ml含50μg的溶液，取上述溶液適量加流動(dòng)相制成每1ml含20μg的溶液，搖勻，即得。

3.3.3 供試品溶液的制備 精密吸取本品1ml，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取腺苷對(duì)照品10.6mg，置50mL量瓶中，加50%甲醇適量，超聲溶解并稀釋至刻度，遙勻，分別精密吸取1、2、3、4、6、8mL，置50mL量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，得腺苷對(duì)照品系列標(biāo)準(zhǔn)濃度的溶液，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣20μL，測(cè)定峰面積，以峰面積積分值（y）為縱坐標(biāo)、腺苷量（x）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算，得回歸方程。結(jié)果表明腺苷溶液在4.14～33.12μg/mL之間有良好的線性關(guān)系。回歸方程：Y=915006X-326170，R2=0.9991。

3.3.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取腺苷對(duì)照品溶液20μL在同一實(shí)驗(yàn)條件下，重復(fù)進(jìn)樣5次，RSD值為0.47%（n=5）。結(jié)果表明本方法精密度好。

3.3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品，精密稱取6份，按3.3.3項(xiàng)制備方法制備，按3.3.1項(xiàng)的色譜條件測(cè)定，結(jié)果：腺苷的峰面積的RSD為1.82%（n=6）。說明本方法重現(xiàn)性良好。

3.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)供試樣品5份，按上述（3.3.3供試品溶液的制備方法），在常溫下制備成供試液，在常溫下放置12h，每間隔2h測(cè)定1次，連續(xù)共測(cè)定6次，RSD為1.5%， 結(jié)果表明樣品溶液中的腺苷，在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.3.8 回收率試驗(yàn) 取已知含量的板藍(lán)根口服液共6份，分別精密加入一定量的腺苷對(duì)照品，混勻，按（3.3.3樣品溶液的制備）項(xiàng)下制備方法，在腺苷的線性范圍內(nèi)分別制成低、中、高3種不同濃度的溶液。（每一種濃度2份）分別進(jìn)樣，測(cè)定腺苷的回收率，其結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.3.9 樣品含量測(cè)定

取3批板藍(lán)根口服液，按供試品溶液制備方法制備，測(cè)定腺苷含量，結(jié)果見表3。

表3 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果

4.討論

目前，板藍(lán)根及其制劑的質(zhì)量控制多以靛藍(lán)、靛玉紅的含量測(cè)定為指標(biāo)，而靛藍(lán)、靛玉紅是脂溶性成分，不能被現(xiàn)行水提醇沉工藝提取出來，從而影響板藍(lán)根口服液的臨床療效。故我們選擇了含量較高、化學(xué)穩(wěn)定性較好的腺苷作為板藍(lán)根口服液的含量測(cè)定指標(biāo)。

本文建立了板藍(lán)根口服液中腺苷的定量分析方法，方法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，準(zhǔn)確性高。為板藍(lán)根口服液的質(zhì)量控制提供了一個(gè)準(zhǔn)確而可靠的方法。