復發緩解型多發性硬化患者腦脊液及血清中非髓鞘神經相關蛋白的檢測及臨床意義

何 佳，何進宇，宋曉征，張麗雅，黃 睿

(1.成都363醫院神經內科，四川 成都 610041；2.四川省人民醫院神經內科，四川 成都 610041)

復發緩解型多發性硬化患者腦脊液及血清中非髓鞘神經相關蛋白的檢測及臨床意義

何 佳1，何進宇1，宋曉征1，張麗雅1，黃 睿2

(1.成都363醫院神經內科，四川 成都 610041；2.四川省人民醫院神經內科，四川 成都 610041)

目的探討復發緩解型多發性硬化(RRMS)患者腦脊液及血清中非髓鞘神經相關蛋白的水平及其臨床意義。方法選擇2010年1月至2014年12月我院收治的70例RRMS患者作為觀察組，同期來我院體檢的70例健康體檢者作為對照組，分別比較兩組受試者的腦脊液與血清中的非髓鞘神經相關蛋白水平(包括14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白)。結果觀察組患者腦脊液中的14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平均較對照組高，兩組比較差異均有統計學意義(P＜0.05)；觀察組患者血清中的14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平分別與對照組比較，差異均無統計學意義(P＞0.05)。結論復發緩解型多發性硬化患者腦脊液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白非髓鞘神經相關蛋白均有明顯升高現象，可以作為該病的檢查指標，而血清中非髓鞘神經相關蛋白則無明顯變化。

多發性硬化；腦脊液；血清；非髓鞘神經相關蛋白

多發性硬化(Multiple sclerosis，MS)屬于自身免疫性疾病，其主要特點為中樞神經系統(Central nervus system，CNS)炎性脫髓鞘[1]。近年來有相關研究顯示，MS患者不僅存在脫髓鞘損傷，還會出現非髓鞘神經損傷，其中包括膠質細胞、軸索及神經元的損傷[2]。能夠反應膠質細胞、軸索及神經元的損傷的非髓鞘神經相關蛋白主要有神經元內的14-3-3蛋白、軸索內的tau蛋白及膠質細胞內的S100蛋白[3]。為了探討復發緩解型多發性硬化(Relapsing-remitting multiple sclerosis，RRMS)患者腦脊液及血清中非髓鞘神經相關蛋白的臨床意義，本文選擇近年來我院收治的RRMS患者和同期健康體檢者作為研究對象進行對照研究，現將結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年1月至2014年12月我院收治的70例RRMS患者作為觀察組，同期來我院體檢的70例健康體檢者作為對照組，全部RRMS患者均經2005年McDonald診斷標準[4]進行確診，全部研究對象簽署知情同意書。其中對照組男性47例，女性23例，年齡16～59歲，平均(37.13±11.68)歲。觀察組男性45例，女性25例，年齡15～60歲，平均(36.91±12.04)歲；病程4個月至10年，平均(3.62±2.11)年，全部研究對象排除感染性疾病及其他自身免疫性疾病，進行第一次檢查前3個月內均未使用免疫抑制劑及糖皮質激素。兩組受試者的性別、年齡等一般資料比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究上報醫院倫理委員會，研究同意后實施。

1.2 觀察指標 兩組受試者腦脊液及血清中的14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白。

1.3 檢測方法

1.3.1 收集樣本 全部研究對象均抽取5ml靜脈血，進行離心獲取血清樣本，且均行腰椎穿刺術，收集腦脊液樣本，各2ml，全部樣品于-80℃冰箱保存。

1.3.2 腦脊液及血清中非髓鞘神經相關蛋白檢測 采用ELISA法分別檢測腦脊液及血清中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白，嚴格按照試劑盒(由武漢華美生物工程公司生產)說明書進行操作，且再反應結束15min之內采用酶聯儀測量各孔光密度(OD)值。

1.4 統計學方法 應用SPSS19.0醫學統計軟件對所得數據進行分析，計數資料采用χ2檢驗，計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者腦脊液的非髓鞘神經相關蛋白水平比較 觀察組患者腦脊液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平均較對照組高，兩組比較差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者腦脊液的非髓鞘神經相關蛋白水平比較(±s,pg/ml)

表1 兩組患者腦脊液的非髓鞘神經相關蛋白水平比較(±s,pg/ml)

組別14-3-3蛋白S100蛋白tau蛋白觀察組(n=70)對照組(n=70)t值P值113246.5±8634.9 96671.4±8632.8 4.368＜0.05 743.6±33.9 651.7±39.5 5.747＜0.05 114.6±11.7 74.6±12.1 8.255＜0.05

2.2 兩組患者血清中的非髓鞘神經相關蛋白水平比較 觀察組患者血液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平與對照組比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，見表2。

表2 兩組患者血清中的非髓鞘神經相關蛋白水平比較(±s，pg/ml)

表2 兩組患者血清中的非髓鞘神經相關蛋白水平比較(±s，pg/ml)

組別觀察組(n=70)對照組(n=70) 24114.5±4297.6 22964.1±3954.8 622.4±97.2 581.6±86.7 61.3±10.3 54.6±9.4t值P值14-3-3蛋白1.953＞0.05 S100蛋白1.647＞0.05 tau蛋白1.553＞0.05

3 討 論

多發性硬化是一種主要以中樞神經系統炎性脫髓鞘為特點的疾病，屬于自身免疫性疾病。MS患者不僅存在脫髓鞘損傷，同時存在非髓鞘神經損傷，其中包括膠質細胞、軸索、神經元等的損傷。反應膠質細胞、軸索及神經元的損傷的非髓鞘神經相關蛋白主要包括神經元內的14-3-3、軸索內的tau及膠質細胞內的S100等[5-6]。研究提示，非髓鞘神經損害出現于多發性硬化的早期階段，且為是多發性硬化功能障礙進展的關鍵因素[7]。

有關神經退行性疾病研究[8]顯示，14-3-3蛋白可作為神經元急性損傷的標志物，該蛋白主要存在于在神經元內細胞核及細胞漿內，主要功能為調節蛋白跨膜轉運、細胞分裂、細胞凋亡等[9]。本研究結果顯示，觀察組患者腦脊液中14-3-3蛋白水平較對照組高，兩組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

S100蛋白屬于一種神經營養因子，在中樞神經系統中，其主要存在于少突神經膠質細胞與星形細胞內[10]。腦組織出現損傷時，神經膠質細胞能夠自分泌及旁分泌S100蛋白，作用于神經元及神經膠質細胞，進一步促進神經的修復。然而膠質細胞出現壞死現象后，S100蛋白則會釋放到腦脊液中提高其在腦脊液中的水平[11]。本研究結果顯示，觀察組患者腦脊液中S100蛋白水平較對照組高，兩組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

tau蛋白主要位于神經細胞的軸突內，屬于一種微管相關蛋白，其主要參與細胞內物質轉運、細胞有絲分裂等多種生命活動，維持軸突的形態及微管的穩定，并促進神經元的生長發育[12]。本研究結果顯示，觀察組患者腦脊液中tau蛋白水平較對照組高，兩組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

本研究顯示，觀察組患者腦脊液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白水平均較對照組高，但血液中以上非髓鞘神經相關蛋白均無明顯差異。此結果表明，與血液相比，腦脊液中非髓鞘神經相關蛋白更能顯示中樞神經系統的損害狀況，與相關研究[13]結果一致。

綜上所述，RRMS患者腦脊液中14-3-3蛋白、S100蛋白及tau蛋白非髓鞘神經相關蛋白均有明顯升高現象，可以作為該病的檢查指標，而血液中非髓鞘神經相關蛋白則無明顯變化。

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Detection and clinical significance of non-myelinated nerve associated proteins in cerebrospinal fluid and serum of patients with relapsing-remitting multiple sclerosis.

HE Jia1,HE Jin-yu1,SONG Xiao-zheng1,ZHANG Li-ya1,HUANG Rui2.1.Department of Neurology,Chengdu 363 Hospital,Chengdu 610041,Sichuan,CHINA;2. Department of Neurology,Sichuan Provincial People's Hospital,Chengdu 610041,Sichuan,CHINA

ObjectiveTo investigate the detection and clinical significance of non-myelinated nerve associated proteins in cerebrospinal fluid(CSF)and serum of patients with relapsing-remitting multiple sclerosis(RRMS).MethodsSeventy patients with RRMS in our hospital from January 2010 to December 2014 were enrolled as the observation group,and 70 healthy people in our hospital for health examination at the same period were considered as the control group.The levels of non-myelinated nerve associated proteins(including 14-3-3 protein,S100 protein and tau protein)were analyzed and compared between the two groups.ResultsThe levels of 14-3-3 protein,S100 protein and tau protein in cerebrospinal fluid in the observation group were significantly higher than those in the control group(P＜0.05),but the levels of the proteins in serum showed no statistically significant difference between the two groups(P＞0.05).ConclusionThe levels of non-myelinated nerve associated proteins in cerebrospinal fluid are significantly increased in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis,which can be used as indicators of the disease.However,the levels showed no significant change in serum of the patients.

Multiple sclerosis;Cerebrospinal fluid;Serum;Non-myelinated nerve associated proteins

R744.5+1

A

1003—6350（2015）21—3165—03

2015-05-05)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.21.1151

四川省衛生廳自然基金(編號：110104)

何 佳。E-mail：jiajiabaobei2005@163.com