吡喹酮抗體內(nèi)培養(yǎng)歐猬迭宮絳蟲(chóng)裂頭蚴的作用與評(píng)價(jià)

黃金妹，張 強(qiáng)，陳澤威，邱明衛(wèi)，高雨靜，鐘賽鳳，甘秀鳳，呂 剛，蘆亞君

(海南醫(yī)學(xué)院熱帶醫(yī)學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院，海南 海口 571199)

吡喹酮抗體內(nèi)培養(yǎng)歐猬迭宮絳蟲(chóng)裂頭蚴的作用與評(píng)價(jià)

黃金妹，張 強(qiáng)，陳澤威，邱明衛(wèi)，高雨靜，鐘賽鳳，甘秀鳳，呂 剛，蘆亞君

(海南醫(yī)學(xué)院熱帶醫(yī)學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院，海南 海口 571199)

目的 探討吡喹酮經(jīng)灌胃及注射兩種方式抗SD大鼠體內(nèi)歐猬迭宮絳蟲(chóng)裂頭蚴的效果。方法將50只SD大鼠每只感染5條歐猬迭宮絳蟲(chóng)裂頭蚴，培養(yǎng)兩周后隨機(jī)分組進(jìn)行藥物治療。灌胃治療組：使用吡喹酮藥物濃度分別為600 mg/kg、1 200 mg/kg、1 800 mg/kg及2 400 mg/kg進(jìn)行灌胃治療7 d，灌腸對(duì)照組以單純植物油灌腸；注射治療組：配制30%吡喹酮注射液以注射劑量分別為0.2 ml和0.5 ml進(jìn)行注射治療3 d及6 d，注射對(duì)照組以無(wú)菌生理鹽水注射。療程結(jié)束后剖殺大鼠，計(jì)算減蟲(chóng)率，如大鼠體內(nèi)剩余蟲(chóng)體則進(jìn)行切片及HE染色。結(jié)果吡喹酮作用于大鼠體內(nèi)裂頭蚴，各用藥組減蟲(chóng)率與對(duì)照組減蟲(chóng)率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中灌胃法以1 800 mg/kg劑量組減蟲(chóng)率最高，注射法以0.5 ml 6 d組減蟲(chóng)率最高。蟲(chóng)體切片染色后觀察，體壁有明顯的斷裂，甚至深入基質(zhì)區(qū)。結(jié)論吡喹酮抗體內(nèi)裂頭蚴蟲(chóng)體有良好的效果，其抗蟲(chóng)機(jī)制可能與吡喹酮對(duì)裂頭蚴組織結(jié)構(gòu)的破壞而致蟲(chóng)體死亡有關(guān)。

歐猬迭宮絳蟲(chóng)裂頭蚴；吡喹酮；灌胃；注射

歐猬迭宮絳蟲(chóng)(Spirometra erinaceieuropaei)又稱曼氏迭宮絳蟲(chóng)(Sparganum mansoni)，其中絳期幼蟲(chóng)裂頭蚴可寄生在人體引起裂頭蚴病[1]。裂頭蚴病是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病[2-3]，呈世界性分布，其中我國(guó)有1 000多例裂頭蚴病，分布于27個(gè)省、市和自治區(qū)[4]。

歐猬迭宮絳蟲(chóng)裂頭蚴可侵犯人體多個(gè)組織和器官，如眼、皮下、腹壁、腦等[5]，蟲(chóng)體能破壞組織、導(dǎo)致失明或癱瘓，甚至死亡[6-7]。目前裂頭蚴病治療方案主要為手術(shù)取出蟲(chóng)體，對(duì)于淺表寄生部位者較為常用及有效，但對(duì)于腦部寄生或深部寄生者，如能采用有效的保守治療則更易為患者接受。本文主要探討吡喹酮藥物對(duì)SD大鼠體內(nèi)歐猬迭宮絳蟲(chóng)裂頭蚴的作用，為保守治療裂頭蚴病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 歐猬迭宮絳蟲(chóng)裂頭蚴 裂頭蚴蟲(chóng)體采自于海南省海口市秀英區(qū)及定安縣的野生青蛙體內(nèi)，選取體長(zhǎng)為4～13 cm、蟲(chóng)體完整、伸縮活動(dòng)劇烈的裂頭蚴作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD大鼠(體重200～220 g)購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司。

1.3 試劑 吡喹酮原粉購(gòu)自Sigma公司，植物油、苯甲醇、乳酸乙酯、苯甲酸芐酯、叔丁基對(duì)羥基茴香醚(BHA)、二特丁基羥基甲苯(BHT)購(gòu)自海南詣高儀器有限公司。

1.4 治療藥物 吡喹酮原粉溶于植物油配制不同濃度的吡喹酮-植物油溶液作為灌胃藥物；配制高濃度吡喹酮注射液即30%吡喹酮注射液[8]作為注射藥物。

1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染與治療 將50只SD大鼠隨機(jī)分為10組，每只大鼠經(jīng)口飼5條完整裂頭蚴蟲(chóng)體，感染兩周后進(jìn)行治療。(1)灌胃治療組：吡喹酮藥物濃度分別為600 mg/kg、1 200 mg/kg、1 800 mg/kg、2 400 mg/kg，每次灌胃2 ml，1次/d，治療7 d，灌腸對(duì)照組以單純植物油灌胃；(2)注射治療組：30%吡喹酮注射液劑量分別為0.2 ml、0.5 ml，腹腔注射2次/d、治療3 d及7 d，注射對(duì)照組以無(wú)菌生理鹽水注射。

1.6 吡喹酮藥物作用觀察 各組感染裂頭蚴的SD大鼠在治療結(jié)束后處死解剖，于體內(nèi)查找裂頭蚴，進(jìn)行蟲(chóng)體計(jì)數(shù)并計(jì)算減蟲(chóng)率，減蟲(chóng)率=(對(duì)照組蟲(chóng)數(shù)-治療組蟲(chóng)數(shù))/對(duì)照組蟲(chóng)數(shù)×100%。如獲得裂頭蚴蟲(chóng)體，則取出蟲(chóng)體做切片及HE染色。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行描述性分析，減蟲(chóng)率的比較進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 吡喹酮對(duì)大鼠體內(nèi)裂頭蚴作用效果 吡喹酮-植物油溶液經(jīng)灌胃作用于受染大鼠7 d后，各用藥組減蟲(chóng)率與對(duì)照組減蟲(chóng)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中1 800 mg/kg劑量組減蟲(chóng)率最高(96%)，600 mg/kg劑量組最低(80%)，但各用藥組間減蟲(chóng)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表1。30%吡喹酮注射液經(jīng)腹腔注射作用于受染大鼠3 d和6 d后，各用藥組減蟲(chóng)率與對(duì)照組減蟲(chóng)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中注射0.5 ml 6 d組減蟲(chóng)率最高(96%)，0.2 ml 3 d組最低(84%)，但各用藥組間減蟲(chóng)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表2。?

表1 吡喹酮-植物油溶液對(duì)大鼠體內(nèi)裂頭蚴蟲(chóng)體的作用效果

表1 30%吡喹酮注射液對(duì)大鼠體內(nèi)裂頭蚴蟲(chóng)體的作用效果

2.2 SD大鼠死亡情況 在治療過(guò)程中，灌胃法給藥大鼠均無(wú)死亡，30%吡喹酮注射液0.2 ml劑量注射大鼠無(wú)死亡，0.5 ml劑量注射2 d后大鼠死亡1只，5 d后死亡2只，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)以補(bǔ)充數(shù)據(jù)。

2.3 裂頭蚴蟲(chóng)體HE染色 將裂頭蚴蟲(chóng)體切片及HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，裂頭蚴蟲(chóng)體經(jīng)吡喹酮作用后，有明顯的體壁皮層斷裂(見(jiàn)圖1A、1B)，斷裂處甚至深入基質(zhì)區(qū)(見(jiàn)圖1C)。

圖1 裂頭蚴蟲(chóng)體HE染色標(biāo)本

3 討論

吡喹酮是一種高效、低毒的抗血吸蟲(chóng)病首選藥物[9]，而其對(duì)裂頭蚴的作用研究尚少[10-11]。目前裂頭蚴病的治療以手術(shù)方法居多，術(shù)中取蟲(chóng)務(wù)必保證蟲(chóng)體完整取出方能根治，對(duì)于裂頭蚴寄生人體深部不便手術(shù)的患者，可用40%酒精與2%普魯卡因局部封閉殺蟲(chóng)[12]，但效果不佳。

本文探討吡喹酮作用于體內(nèi)裂頭蚴的效果，腹腔注射30%吡喹酮注射液及灌胃法減蟲(chóng)率均達(dá)到80%以上。本實(shí)驗(yàn)用高濃度吡喹酮注射液最大劑量為0.5 ml，藥量遠(yuǎn)低于吡喹酮對(duì)大鼠腹腔注射的LD50(LD50=0.8 g/kg)[13]，但仍有少數(shù)大鼠死亡，可見(jiàn)吡喹酮注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物毒性作用大于灌胃法，口服吡喹酮藥物安全性要高于注射用藥。

經(jīng)藥物作用后獲得的裂頭蚴切片染后發(fā)現(xiàn)，蟲(chóng)體體壁有明顯的斷裂，斷裂較深處則深入基質(zhì)區(qū)，表明吡喹酮對(duì)裂頭蚴蟲(chóng)體毒性作用可能是對(duì)體壁損傷、改變細(xì)胞通透性，影響生理功能、代謝吸收而致蟲(chóng)體死亡[14-15]；吡喹酮抗裂頭蚴的分子機(jī)制尚不明了，需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究闡明。

[1]Bai J,He ZY,Liu GN,et al.BronchialSparganosis mansoniaccompanied by abnormal hyperplasia diagnosed by bronchoscopy[J]. Chin Med J(Engl),2012,125(17):3183-3187.

[2]Huang F,Gong HY,Lu MH.PulmonarySparganosis mansoni:A case report[J].Trop Biomed,2012,29(2):220-223.

[3]Lee JH,Kim GH,Kim SM,et al.A case ofSparganosisthat presented as a recurrent pericardial effusion[J].Korean Circ J,2011,41 (1):38-42.

[4]Li MW,Song HQ,Li C,et al.Sparganosisin mainland China[J].Int J Infect Dis,2011,15(3):e154-156.

[5]Wiwanitkit V.A review of humanSparganosisin Thailand[J].Int J Infect Dis,2005,9(6):312-316.

[6]Chiba T,Yasukochi Y,Moroi Y,et al.A case ofSparganosis mansoniin the thigh:serological validation of cure following surgery[J]. Iran J Parasitol,2012,7(3):103-106.

[7]Mentz MB,Procianoy F,Maestri MK,et al.Human ocular Sparganosisin southern Brazil[J].Rev Inst Med Trop Sao Paulo,2011,53 (1):51-53.

[8]房春林,胡金芝.30%吡喹酮注射液的研制及穩(wěn)定性研究[J].獸藥導(dǎo)刊,2009,2:34-36.

[9]郭 儉,郭家鋼.血吸蟲(chóng)對(duì)吡喹酮抗藥性評(píng)價(jià)方法的研究進(jìn)展[J].中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志,2005,23(3):182-184.

[10]李 楠,藺西萌,崔 晶,等.不同劑量吡喹酮治療曼氏裂頭蚴感染小鼠的療效觀察[J].中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志,2010,22(1): 51-55.

[11]鄭新生,姚寶安,王艷蕊,等.高濃度吡喹酮注射劑的研制及對(duì)小鼠日本血吸蟲(chóng)病的治療試驗(yàn)[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2006,25(1): 68-70.

[12]王仁輝,胡甲豐,柳建發(fā).曼氏裂頭蚴病研究進(jìn)展[J].地方病通報(bào), 2005,20(2):83-84.

[13]黃一心,肖樹(shù)華.抗蠕蟲(chóng)藥吡喹酮的研究與應(yīng)用[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:23-24.

[14]鄭時(shí)春,張敏如.吡喹酮影響體外培養(yǎng)的斯氏貍殖吸蟲(chóng)活力及表皮超微結(jié)構(gòu)的觀察[J].中國(guó)人獸共患病雜志,1987,3(4):55.

[15]嚴(yán)亞軍,王文林,宋精玲,等.三氯苯達(dá)唑、吡喹酮對(duì)斯氏貍殖吸蟲(chóng)作用的透射電鏡觀察[J].中國(guó)病原生物學(xué)雜志,2010,5(1):32-33.

Effect and evaluation of praziquantel on Sparganum erinaceieuropaei in vivo.

HUANG Jin-mei,ZHANG Qiang, CHEN Ze-wei,QIU Ming-wei,GAO Yu-jing,ZHONG Sai-feng,GAN Xiu-feng,LV Gang,LU Ya-jun.Tropical and Laboratory Medical College,Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan CHINA

ObjectiveTo explore the effect of praziquantel onSparganum erinaceieuropaeiin SD rats by gastric perfusion and injection.MethodsFifty SD rats were selected and infected with five plerocercoids each.After two weeks,the 50 SD rats were randomly divided into 10 groups for drug treatment:perfusion treatment groups with the concentrations of praziquantel of 600 mg/kg,1 200 mg/kg,1 800 mg/kg,2 400 mg/kg,0 mg/kg(vegetable oil instead,the perfusion control group)for 7 d;injection treatment groups with 30%praziquantel of 0.2 ml,0.5 ml for 3 d and 6 d,normal saline(the injection control group).After the treatment,rats were sacrificed.The reduction rate of plerocercoid was calculated.The remaining plerocercoid in rat was sliced and stained by HE.ResultsThe reduction rate showed statistically significant difference in the treatment group and the corresponding control groups(P＜0.05).The reduction rate of 1 800 mg/kg group was the highest in perfusion treatment groups.The reduction rate of 0.5 ml for 6 d group was the highest in injection treatment groups.The plerocercoid was stained and the body wall has obvious fracture,even deep into matrix area.ConclusionThe effect of praziquantel on plerocercoid is significant.The mechanism may be related to that praziquantel causes damage in organizational structure of plerocercoid and then thus results in death.

Sparganum erinaceieuropaei;Praziquantel;Gastric perfusion;Injection

R-332

A

1003—6350（2015）10—1409—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.10.0505

2014-12-05)

國(guó)家級(jí)創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：201211810057)

蘆亞君。E-mail：luyajuncc@163.com