核酸檢測與酶免檢測平行篩查血液的效果評價

袁國舉 郭兆富 尹以靖

(德宏州中心血站 云南 德宏 678400)

自2010年我國開展血站核酸檢測(NAT)試點工作以來，從酶聯免疫檢測(ELISA)合格的獻血者標本中檢出漏檢的病毒感染者已經多有報道，NAT 與ELISA 已經成為獻血者血液篩查和進一步提高血液安全的重要互補手段。本站于2011年6月開始采用NAT 單檢與ELISA 平行檢測模式篩查血液，現將應用效果報告如下:

1.材料與方法

1.1 標本來源及采集處理2011年6月15 日～2014年6月底本站無償獻血者，共計39236 人次。每位獻血者留取3 ×5ml 血液標本:第1 管為EDTA－ K2 真空抗凝管(用于血清學檢測)，第2 管為帶分離膠的無菌EDTA－ K2 真空抗凝管(BD 管，用于NAT 檢測)，第3 管為帶分離膠的EDTA－ K2 真空抗凝管(用于標本保存)。所有標本采集后置2 ～8℃冰箱保存，其中NAT 管要求采血后4h 內離心(1600g ×5min)，48h 內完成檢測，不能完成檢測的置于﹣20℃保存。

1.2 主要設備與試劑1)設備:STARLET 全自動酶免加樣儀、FAME16/20 全自動酶免檢測分析儀(瑞士HAMILTON 公司)，ProcleixTIGRIS 全自動核酸檢測分析系統(美國諾華公司);2)試劑:HBsAg、抗－HCV試劑盒(上海科華、廈門新創)，抗－HIV 檢測Ⅲ代試劑(上海科華公司)，抗－HIV 檢測Ⅳ代試劑(生物梅里埃)，HBV/HCV/HIV－1 核酸聯檢試劑(TMA－化學發光法)、Assay 鑒別試劑(美國諾華)。

1.3 方法按試劑說明書操作，每份血液標本均采用2 種ELISA 試劑檢測HBsAg、抗－HCV、抗－HIV。同時在Procleix TIGRIS 全自動核酸檢測分析系統上進行單人份核酸檢測。對ELISA(HBsAg、抗－ HCV、抗－HIV)陰性、NAT 聯檢陽性的標本再進行HBV －DNA、HCV －RNA、HIV －RNA 鑒別試驗。

2.結果(表1 ～表3)

表1 39236 份獻血者標本ELISA 與NAT 平行檢測結果

表2 199 份ELISA 陽性標本NAT 聯檢情況

表3 63 份ELISA 陰性NAT 陽性標本鑒別結果

3.討論

云南省德宏州是中國防治艾滋病的重點地區，為了進一步提高輸血安全性，本站作為NAT 檢測試點單位于2011年6月15 日開始采用TMA核酸檢測技術與ELISA 檢測平行篩查獻血者血液。通過平行檢測39236份獻血者標本，共檢出NAT 陽性220 份，陽性率為0.56%(220/39236);ELISA 陽性(HBsAg、抗－ HCV、抗－ HIV 3 項)199 份，陽性率為0.51%(199/39236);其中，NAT 陽性ELISA 陽性占0.40%(157/39236);NAT陽性ELISA 陰性占0.16%(63/39236);NAT 陰性ELISA 陽性占0.11%(42/39236)。ELISA 雙試劑檢測陽性與NAT 陽性符合率為78.9%(157/199)，略高于廣州地區75.28%［1］，其中，HBsAg、抗－HCV、抗－HIV 雙試劑陽性與NAT 陽性符合率分別為80.3%(106/132)、66%(31/47)、100%(20/20)。可見，ELISA 與NAT 2 種檢測結果不一致，這與2 種方法檢測的病毒標志物不同，各標志物在外周血中存在時間不同有關［2］，提示這2種檢測技術均可能出現漏檢和假陽性，二者聯合應用篩查血液更能提高血液安全性。

本研究中，63例ELISA 陰性NAT 陽性標本共鑒別出27例HBV －DNA 和1例HCV－RNA，沒有檢出HIV－RNA，鑒別陰性率為55.6%，高于程衛芳等報道的41%［2］，低于曾勁峰等報道的68.4%［3］。有研究表明，經9.6 倍超濃縮處理后HBV、HCV 病毒含量分別是原有含量的5.92±1.98 倍和4.7 ±1.43 倍，有助于提高NAT 檢測靈敏度和提高NAT 篩查陽性標本的鑒別率［4］。由于條件限制，我們不能利用超濃縮技術對鑒別陰性標本重復鑒別，但基于血液安全考慮，所有NAT 聯檢陽性均視為潛在感染者，相應的血液做報廢處理。本站開展NAT 檢測后至少規避了1/1447(27/39037)輸血感染HBV 和1/39037 的輸血感染HCV 風險。

綜上所述，為了進一步提高血液安全性，在ELISA 檢測的基礎上增加NAT 檢測很有必要，血站應結合實際情況，選擇最適合的檢測模式。本站采用單人份核酸檢測與ELISA 檢測平行篩查獻血者血液模式既能夠防漏互補，同時也能縮短檢測周期，保障血液及時安全的供應。

［1］ 鄭優榮，梁浩堅，李仲平，等.核酸檢測技術在廣州地區獻血者血液篩查中的應用.中國輸血雜志，2013，26(12):1211 －1214.

［2］ 程衛芳，段有紅，周學勇，等.2 種核酸檢測平臺在與EILSA 平行檢測中的應用.中國輸血雜志，2013，26(12):1235 －1237.

［3］ 曾勁峰，鄭欣，許曉絢.ELISA 檢測與NAT 檢測在血液篩查應用中的互補性研究.中國輸血雜志，20012，25(10):1012 －1015.

［4］ 王卓妍，龔曉燕，宋美蘭，等.超速離心濃縮技術富集HBV 和HCV顆粒的效果研究.中國輸血雜志，2012，25(12):1295 －1296.