八種蒙藥制劑微生物限度檢查方法驗證

鬧鬧爾再

(新疆巴音郭楞蒙古自治州食品藥品檢驗所，新疆 庫爾勒 841000)

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八種蒙藥制劑微生物限度檢查方法驗證

鬧鬧爾再

(新疆巴音郭楞蒙古自治州食品藥品檢驗所，新疆 庫爾勒 841000)

目的：利用驗證試驗，為8種蒙藥制劑制定微生物限度檢查方法。方法：采用常規法和培養基稀釋法對5株陽性菌進行回收率試驗，確定8種蒙藥制劑是否含抑菌成分。結果：根據回收率試驗結果，8種蒙藥制劑試驗菌的回收率均達到70.0%以上，符合驗證要求。結論：經驗證的方法有效去除了8種蒙藥制劑的抑菌成分，可用于制劑的質量控制。

蒙藥制劑；微生物限度檢查；驗證試驗

表5 三七皂苷R1對SW620結腸癌細胞存活的影響

組別藥品濃度(μg·mL-1)吸收值抑制率(%)空白對照--0.801±0.0380100.00.607±0.023**24.1三七皂苷R150.00.597±0.029**25.425.00.565±0.034**29.312.50.648±0.052**18.9

注：與空白對照組比較*P<0.05，**P<0.01。

表6 大黃素、蘆薈大黃素對SW620結腸癌細胞存活的影響

組別藥品濃度(μg·mL-1)吸收值抑制率(%)空白對照--0.866±0.0330100.00.474±0.020**45.3大黃素50.00.486±0.034**43.925.00.788±0.074**9.012.50.871±0.0220100.00.262±0.012**69.7蘆薈大黃素50.00.283±0.021**67.325.00.361±0.035**58.312.50.567±0.057**34.4

注：與空白對照組比較*P<0.05，**P<0.01。

表7 大黃酸對SW620結腸癌細胞存活的影響

組別藥品濃度(μg·mL-1)吸收值抑制率(%)空白對照--0.837±0.0270100.00.537±0.047**35.8大黃酸50.00.606±0.027**27.625.00.624±0.015**25.512.50.639±0.033**23.6

注：與空白對照組比較*P<0.05，**P<0.01。

1 儀器與材料

1.1 儀器(見表1)

表1 儀器

1.2 供試品

調元大補二十五味丸、沉香八味散、消食十味散、楓香脂十味散、白葡萄七味散、杜鵑十六味散、檀香清肺八味散、小兒清肺八味散等,均來自新疆巴音郭楞蒙古自治州第二人民醫院。

1.3 培養基、稀釋劑及試液(見表2)

表2 培養基、稀釋劑及試液

1.4 試驗用菌種(見表3)

表3 實驗用菌種

實驗用菌種來自中國食品藥品檢定研究院。

2 方法學驗證與結果

2.1 菌液制備方法

分別取適量枯草芽孢桿菌、乙型副傷寒沙門菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌標準菌株轉移至10mL滅菌后的營養肉湯中，37℃恒溫培養18～24h；取白色念珠菌適量，接種于改良馬丁培養基中，在25℃下恒溫培養24～48h。分別取1mL上述培養物，分別置于盛有9mL無菌生理鹽水溶液的試管中，使其為10-5～10-7的菌懸液[1]。

將黑曲霉轉移在改良馬丁瓊脂培養基上，25℃培養7天，用3mL無菌生理鹽水洗脫孢子，取1mL加入9mL無菌生理鹽水溶液中，使其為10-5～10-7的孢子懸液[1]。

2.2 供試液制備

取樣品10g，置錐形瓶中，加無菌NaCl-蛋白胨緩沖液(pH7.0)至100mL，2 000r/min振搖10min，即得。

2.3 細菌、霉菌及酵母菌檢查方法驗證[1]

2.3.1 平皿法 取“2.2”項下供試液(1∶10)1mL，及“2.1”中的驗證用試驗菌，分別注入平皿中，按規定培養并測回收率；平行做菌液組、稀釋劑對照組和供試品對照組[2]。結果見表4。

2.3.2 培養基稀釋法 取0.2mL“2.2”項下供試液/皿，加入驗證菌各10-5～10-7，按照“2.3.1”項下方法進行試驗。結果見表5。

2.4 控制菌檢查方法的驗證[1]

2.4.1 大腸埃希菌 取供試液(1∶10)10mL及1mL 10-5～10-7大腸埃希菌，注入100mL膽鹽乳糖培養基(BL)中，于37℃下培養24h，觀察培養基澄清度的變化；之后取渾濁管中的培養物適量做熒光反應與靛基質試驗。另取適量的培養物劃線接種于MacC平板上，37℃培養24h，觀察其菌落的生長形態特征[2]。同時以金黃色葡萄球菌代替大腸埃希菌，照上述方法進行試驗。結果見表6。

表4 平皿法接種陽性對照菌回收率試驗結果 (%)

表5 培養基稀釋法(0.2mL/皿)接種陽性對照菌回收率試驗結果 (%)

表6 大腸埃希菌檢查法驗證

2.4.2 大腸菌群 取供試液(1∶10)1mL及10-5～10-7大腸埃希菌轉移至9mL乳糖膽鹽發酵培養基中，37℃培養24h，取適量發酵管中的培養物劃線接種于MacC平板上，37℃培養18～24h，觀察其菌落的生長形態特征[1]。同時將大腸埃希菌金換成黃色葡萄球菌，按上述方法進行試驗。結果見表7。

表7 大腸菌群檢查法驗證

2.4.3 沙門菌 取供試品10g，加200mL的無菌營養肉湯培養基，2 000r/min，5min混勻，加入預先制備好的沙門菌懸液1mL，培養18～24h，取培養物1mL，接種于10mL TTB中培養18～24h。同時取金黃色葡萄球菌代替沙門菌，同上述方法進行試驗。結果見表8。

3 討論

微生物限度檢查是藥品安全性檢查的重要項目。由于蒙藥制劑是含有多種成分的復方制劑，其成分種類繁多復雜，處方中任一成分均有可能具有抑菌活性，大多數蒙藥還含有生藥原粉或動物藥，可影響蒙藥制劑微生物限度檢查的準確性，因此需按規定進行大腸菌群、沙門菌檢查方法驗證。

從表1中結果可以看出，通過平皿法驗證，白葡萄七味散、杜鵑十六味散、消食十味散、檀香清肺八味散、調元大補二十五味丸等5種藥品用常規平皿法驗證，可使5株試驗菌的回收率均達到70.0%以上，提示以上5種藥品沒有抗菌作用。楓香脂十味散平皿法回收率試驗顯示，采用平皿法可完全回收白色念珠菌、黑曲霉菌和大腸埃希菌，但金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的回收率很低，分別為6.0%、0%；表明這兩株菌的生長幾乎完全被抑制，藥物有明顯的抑菌作用。沉香八味散、小兒清肺八味散等2種藥品除了枯草芽孢桿菌外，其他4株菌的回收率超過70%，而枯草芽孢桿菌無法回收，回收率分別為0%、25.0%，藥物有明顯的抑菌作用。以上結果表明楓香脂十味散、沉香八味散、小兒清肺八味散等3種藥品含抑菌成分，必須采用適當的方法去除抗菌活性，重新進行菌落計數方法的驗證。

從表2中可以看出，為了消除蒙藥制劑中的抑菌成分，本次實驗采用了培養基稀釋法，實驗結果表明每皿0.2mL可消除抑菌成分對細菌生長的影響。沉香八味散、楓香脂十味散、小兒清肺八味散等3種藥品的陽性對照菌的回收率均達到70.0%以上，基本消除抑菌活性。因此培養基稀釋法(每皿0.2mL)可用于以上3種蒙藥制劑的細菌數檢查。

從表3至表5可以看出，以上8種蒙藥制劑對控制菌(大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌)無抑制作用，控制菌檢查可采用常規法。

4 結語

調元大補二十五味丸、消食十味散、白葡萄七味散、杜鵑十六味散和檀香清肺八味散按平皿法進行細菌數檢查；沉香八味散、楓香脂十味散、小兒清肺八味散采用培養基稀釋法(每皿0.2mL)進行細菌數檢查；本試驗中8種藥品的霉菌和酵母菌菌落數須用平皿法進行檢查，而控制菌的檢查按常規法即可。本次試驗結果可供藥品檢驗部門參考。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:人民衛生出版社,2010:附錄79-88.

[2] 中華人民共和國衛生部藥典委員會.衛生部藥品標準·蒙藥分冊[S].1997.

(責任編輯：尹晨茹)

2015-01-30

鬧鬧爾再(1974-)，女，蒙古族，新疆巴音郭楞蒙古自治州食品藥品檢驗所副主任藥師，研究方向為食品藥品檢驗。

R446.5;R915

A

1673-2197(2015)12-0014-03

10.11954/ytctyy.201512006

蒙醫藥學是我國甚至世界傳統醫藥學的重要組成部分；蒙醫藥歷史悠久，療效確切，作用緩和，在民間被廣泛應用。調元大補二十五味丸、沉香八味散、消食十味散、楓香脂十味散、白葡萄七味散、杜鵑十六味散、檀香清肺八味散、