HPLC法測定牛黃滲透泵片中膽酸含量

趙 紅，陳懷明，黃 艷，劉文文，鐘 磊，張超云，羅再剛

(安徽理工大學(xué) 化工學(xué)院，安徽 淮南 232001)

?

HPLC法測定牛黃滲透泵片中膽酸含量

趙 紅，陳懷明，黃 艷，劉文文，鐘 磊，張超云，羅再剛

(安徽理工大學(xué) 化工學(xué)院，安徽 淮南 232001)

目的：采用HPLC法測定自制牛黃滲透泵片中膽酸含量。方法：用冰醋酸溶解自制牛黃滲透泵片，經(jīng)硫酸-水混合溶液70℃水浴處理后，采用HPLC法測定，色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.15%磷酸水溶液(40∶60)為流動(dòng)相，檢測波長為387nm。結(jié)果：膽酸在48μg/mL～240μg/mL(r=0.999 2，n=3)濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均回收率為99.60%，RSD=0.87%。結(jié)論：該方法可用于測定牛黃滲透泵片中膽酸含量，快速簡便，準(zhǔn)確有效。

牛黃滲透泵片；HPLC；膽酸；含量測定

牛黃是牛科動(dòng)物牛的膽結(jié)石，為名貴中藥材，具有極高的藥用價(jià)值，中醫(yī)可用于治療口舌生瘡、咽喉腫痛、高熱神昏、驚厥抽搐等病癥[1]。隨著現(xiàn)代快節(jié)奏的生活，多數(shù)人群處于亞健康狀態(tài)，易導(dǎo)致口舌生瘡，又因工作忙碌，常忘記按時(shí)吃藥。為適應(yīng)現(xiàn)代生活節(jié)奏的改變，本文研制了牛黃滲透泵片，將每天服藥3次的普通片制備成每天服藥1次的緩釋片。大量藥理實(shí)驗(yàn)表明，牛黃的藥理作用是由膽酸發(fā)揮[2]，因此以膽酸為待測物，采用HPLC法測定自制牛黃滲透泵片中膽酸的含量[3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DP-120單沖式壓片機(jī)(江蘇泰州市制藥機(jī)械二廠)，片劑硬度測定儀(上海恒勤儀器設(shè)備有限公司)，BY300A型小型包衣機(jī)(南京天利制藥設(shè)備有限公司)，島津LC-20A高效液相色譜儀(日本島津公司),ODS(250mm×4.6mm,25μm)色譜柱。

1.2 試藥

膽酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100078-201014)，天然牛黃(北京同仁堂)。

2 方法與結(jié)果

2.1 牛黃滲透泵片的制備

片芯的制備：將處方量的牛黃原料藥與輔料過100目篩，混合均勻，加入適量的無水乙醇制軟材，用16目篩子制粒，50℃下干燥2h，30目篩子整粒，再加入適量的潤滑劑硬脂酸鎂，用單沖頭壓片機(jī)壓片得到每片含牛黃約30mg、片重約為210mg的單層片芯。

包衣液的制備：將乙基纖維素、適量PEG4 000溶于丙酮溶液(丙酮∶水= 95∶5)中，用磁力攪拌器攪拌至完全溶解，即得包衣液。

包衣與打孔：將制得的片芯置于包衣鍋中，包衣鍋轉(zhuǎn)速為40r·min-1，包衣溫度為50～55℃。包衣過后在55℃條件下干燥12h，用機(jī)械方法打孔，制得牛黃滲透泵片。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 C18柱，流動(dòng)相為乙腈-0.15%H3PO4水溶液(40∶60)，檢測波長為387nm。

2.2.2 供試品溶液的制備 取牛黃滲透泵1片，去包衣層，碾碎，緊密稱定約10mg，加60%的冰醋酸數(shù)滴，研磨，全部移入100mL量瓶中，用60%的冰醋酸定容，搖勻，過濾，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1mL，至帶塞試管中，加硫酸-水(50∶65)混合溶液14.0mL，70℃水浴10min，迅速移至冰浴中放置2min。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密稱取膽酸對照品30.0mg，放置100mL量瓶中，加60%的冰醋酸溶解定容作為母液。

2.2.4 線性關(guān)系 分別用移液管精密移取母液4、6、8、12、15、20mL至25mL容量瓶中，均加硫酸-水(50:65)混合溶液14.0mL，70℃水浴10min，迅速移至冰浴中放置2min，進(jìn)樣。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：在48μg/mL～240μg/mL范圍內(nèi)，膽酸的線性回歸方程為Y=87.189X-24.465(r=0.999 2,n=3)，線性關(guān)系良好。

2.2.5 專屬性試驗(yàn) 取牛黃滲透泵片的陰性對照品，按“2.2.2”項(xiàng)方法操作，進(jìn)樣。結(jié)果顯示：在陰性對照品中，未出現(xiàn)與膽酸相同保留時(shí)間的色譜峰，表明滲透泵片中輔料對膽酸測定無干擾。見圖1。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 去膽酸對照品，按“2.2.3”項(xiàng)方法制備溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果表明：其RSD值小于1.5%，符合精密度要求。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取牛黃粉末，按“2.2.2”項(xiàng)方法制備溶液，分別于0、2、4、8、12h進(jìn)樣測定含量。結(jié)果表明：不同時(shí)間點(diǎn)RSD值小于1.5%。符合穩(wěn)定性要求。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取牛黃滲透泵片6片，按“2.2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣。結(jié)果表明：各峰面積RSD值小于1.5%，符合重復(fù)性要求。

2.2.9 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取牛黃供試品適量(相當(dāng)于膽酸約5mg)，置于100mL量瓶中，再精密稱取膽酸對照品約5mg，加入60%的冰醋酸數(shù)滴，研磨，定容，搖勻，過濾，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1mL，至帶塞試管中，加硫酸-水(50∶65)混合溶液14.0mL，70℃水浴10min，迅速移至冰浴中放置2min，平行進(jìn)樣3次，測定含量。結(jié)果顯示：膽酸回收率為99.60%，RSD為0.87%。見表1。

表1 牛黃供試品加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.2.10 樣品含量測定 取牛黃滲透泵片，按“2.2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)條件進(jìn)樣，測定其中膽酸含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定

3 討論

目前，牛黃的標(biāo)準(zhǔn)測定方法為糠醛比色法，該方法受反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間影響較大，重現(xiàn)性較差。在192nm波長處測定膽酸含量，多種溶劑有吸收，會干擾測定結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)用60%的冰醋酸溶解后，以一定濃度的硫酸溶液水浴方法對膽酸進(jìn)行處理，膽酸在387nm處有吸收峰。通過專屬性試驗(yàn)證明，該輔料和溶劑無干擾作用，可準(zhǔn)確測定膽酸含量，為本實(shí)驗(yàn)室自制的牛黃滲透泵片含量測定及后期釋放度測定提供了方法學(xué)依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015:53.

[2] 許珍珍，黃一平，余晶晶，等.不同提取方法對人工牛黃中膽酸含量的影響[J].中國藥房,2009,20(9):664-665.

[3] 王志強(qiáng)，劉海津.薄層掃描法測定天然牛黃與人工牛黃膽酸含量比較[J].中醫(yī)學(xué)報(bào),2011,26(10):161-162.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

Determination of Cholalic Acid in Calculus Bovis Osmotic Pump Tablets

Zhao Hong,Cheng Huaiming,Huang Yan,Liu Wenwen,Zhong Lei,Zhang Chaoyun, Luo Zaigang

(Chemical Engineering College ,Anhui University of Science and Technology,Huainan 230001,China)

Objective:Determinate the homemade cholalic acid in calculus bovis osmotic pump tablets.Methods:The tablets were dissolved by glacial acetic acid, 70℃ sulfuric acid- water curing treated, and then measured by HPLC in which C18was used as filler, acetonitrile-0.15% phosphate acid solution(40∶60)was used as mobile phase, the detective wavelength was at 387nm.Results:The cholalic acid fell in the range of 48～240μg/mL(r=0.999 2,n=3), the average recoveries were 99.60%(RSD=0.87%，n=3).Conclusion:This method can be used for the determination of bezoar osmotic pump in bile acid content, it is quick and easy, accurate and effective.

Calculus Bovis Osmotic Pump;HPLC;Cholic Acid;Content Determination

2015-07-07

大學(xué)生創(chuàng)新基金項(xiàng)目(AH201410361213)；安徽理工大學(xué)青年教師基金項(xiàng)目(QN201311)；國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目(21102003)

趙紅(1980-)，女，碩士，安徽理工大學(xué)講師，研究方向?yàn)樗巹W(xué)。

R284.2

A

1673-2197(2015)22-00011-02

10.11954/ytctyy.201522005