半夏炮制前后高效液相圖譜變化

周華春，周仲霞

(高郵市第三人民醫院 藥劑科，江蘇 高郵 225631)

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半夏炮制前后高效液相圖譜變化

周華春，周仲霞

(高郵市第三人民醫院 藥劑科，江蘇 高郵 225631)

目的：采用HPLC法比較半夏炮制前后藥材的化學成分，為尋找毒性成分提供依據。方法：采用HPLC法，色譜柱為VP-ODS C18(150mm×4.6mm,5μm)，流動相以0.01%磷酸水-乙腈線性梯度(100%～50%)洗脫，流速1.0mL/min，檢測波長260nm，進樣量10μL，柱溫30℃。結果：半夏炮制前后高效液相圖譜有明顯區別。結論：半夏、法半夏高效液相圖譜存在差異，可為評價半夏、法半夏的成分及質量控制提供參考依據。

半夏；法半夏；炮制；高效液相色譜

半夏屬于天南星科半夏屬植物，入藥為塊莖，在我國長江流域及東北、華北等地區分布廣泛[1]。該藥首次出現于《神農本草經》，迄今為止已有幾千年歷史。該藥物味辛且性溫，小毒，可有效消痰散結、燥濕化痰及降逆止咳。現代藥理學研究表明，半夏還具有明顯的護肝、抗生育與腫瘤及促血脂下降等作用[2]，同時可用于治療冠心病，效果明顯。半夏中含有諸多化學成分，如半夏淀粉、膽堿、半夏蛋白、腺苷、胡蘿卜苷、膽堿、無機元素、草酸鈣、葡萄糖及半夏脂蛋白酶等[3-5]。生半夏炮制后會降低其毒性與刺激性，導致成分結構出現變化，進而降低毒性與刺激性成分含量，達到降低或消除刺激性、毒性作用。目前，臨床尚未明確其具體毒性與刺激性成分。為分析半夏炮制前后高效液相圖譜的變化，現采用HPLC法對其化學成分進行分析，并為臨床研究其毒性與刺激性成分提供理論依據。

1 材料

1.1 儀器

采用高效液相色譜儀，型號為Agilent 1200；KQ5200型超聲清洗器；濾膜為微孔(0.54μm)；電子天平。

1.2 試劑

乙腈、甲醇為色譜純，重蒸水。

1.3 材料

生半夏(湖南中醫藥大學中藥鑒定教研室)；半夏干燥塊莖。

2 方法與結果

2.1 炮制法半夏

分開大小不一的半夏，浸泡于水中，待其無干心即可，凈半夏100kg。適量甘草(15kg)加水煎煮，2次，將煎液合并，用水對石灰液(生石灰10kg)予以制作，倒入合并煎液攪拌至均勻；添加半夏浸泡，攪拌(2次/天)，確保浸泡液pH大于12。當剖面變為均勻黃色且嘗后舌微麻時，取出并充分洗凈，烘干或陰干即可[6]。

2.2 樣品溶液制備

半夏藥材行干燥、粉碎處理后，過60目篩，精密稱量，取1.0g半夏于50mL錐形瓶放置，添加30%甲醇30mL，行超聲提取，持續時間30min，待冷卻后彌補失重重量，過濾取濾液5mL，微孔濾膜(0.45μm)過濾；萃取主要使用25mL乙酸乙酯與正丁醇，數次后濃縮為浸膏，溶解時主要添加30%甲醇，再次過濾即可。

2.3 色譜條件

色譜柱型號為VP-ODS C18，參數為：內徑為5μm，規格為150×4.6mm；0.01%磷酸水：乙腈線性梯度洗脫從100∶0(0min)至50∶50(45min)，流速為1.0mL/min，檢測波長260nm，進樣量為10μL，柱溫30℃。

2.4 精密度試驗

檢測供試品溶液，進樣，連續5次，測定HPLC圖譜。結果表明：該方法精密度優良，RSD(相對保留時間)小于0.2%，RSD(相對峰面積)小于2%。

2.5 穩定性試驗

精密稱量1.0g半夏粉末，依據“2.2”項方法制備，進樣檢測，分別于0、4、8、12、24h開展。結果表明，試驗穩定性良好，RSD小于0.2%，RSD小于2%。

2.6 重復性試驗

取5份批號相同的半夏藥材，制備供試品溶液，經檢測后發現該方法重復性較好，RSD小于0.2%，RSD小于2%。

2.7 測定不同類型供試品HPLC圖譜

將各供試品分別取出并進樣，可得到HPLC譜圖。生半夏炮制后其化學成分含量與內在成分均出現變化，見圖1、圖2、圖3。

圖1 半夏與法半夏30%甲醇總提液HPLC色譜

圖2 生半夏與法半夏正丁醇萃取層HPLC色譜

圖3 法半夏與生半夏乙酸乙酯萃取層HPLC色譜

3 討論

3.1 樣品處理方法考察

本研究，主要考察回流提取、超聲等方法，超聲提取樣品圖譜有較少的雜質干擾與分離較好的色譜峰基線，且該方法易于操作，提取時間少，省時省力，值得借鑒。

3.2 色譜條件選擇

研究[7-8]認為，半夏指紋圖譜檢測波長為260nm或254nm。本研究中主要開展雙波長檢測，結果發現260nm有較好的色譜峰峰形及較豐富色譜信息，且分離度優良。因此，檢測波長主要選擇260nm。流動相選擇主要對類型不一的流動相梯度洗脫進行考察，如0.01%磷酸水-乙腈、甲醇-水及乙腈-水，其中選擇第一種有較好的峰形。

3.3 法半夏與生半夏HPLC圖譜分析

本研究，主要采用HPLC法檢測半夏炮制前后藥材圖譜，方法重復性較好且易于操作，有利于分析半夏藥材炮制前后化學成分的改變情況。炮制在一定程度上影響藥材的成分與質量，與中醫藥理論中半夏炮制的增效和減毒存在聯系[9]，臨床需深入研究藥材炮制后新型組分化學結構與功效變化之間存在的關系。

[1] 中國醫學科學院藥物研究所.中藥志[M]．第2版.北京：人民衛生出版社,1993．

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].2010版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：110-111.

[3] 汪蕾,張繼振.天南星屬植物研究進展[J].延邊大學學報：自然科學版,2004,30(1):66-73.

[4] 文燕,張玉琴,屈玲,等.清半夏炮制過程中化學物質及刺激性變化[J].中國保健營養:上旬刊,2013,23(3):1435.

[5] 高昌琨，吳瓊，張陸軍．半夏及炮制品對動物黏膜刺激性比[J].安徽中醫學院學報，2001，20(6)：49-50．

[6] 戎其月,伍慶,童紅,等.半夏的HPLC指紋圖譜研究[J].中國中藥雜志，2008，3(11)：1342-1343.

[7] 文燕,張明,廖志華,等.半夏藥材HPLC指紋圖譜研究[J].中藥材，2008，31(4)：503-506.

[8] 鄒菊英,陳勝璜,雷昌,等.半夏炮制前后HPLC圖譜的比較[J].湖南中醫藥大學學報,2010,30(9):127-129.

[9] 羅俊萍.半夏炮制解毒的研究[J].臨床合理用藥雜志,2014(29):61.

(責任編輯：李嵐春)

2014-12-21

周華春(1973-)，江蘇省高郵市第三人民醫院副主任中藥師，研究方向為中藥藥理與中藥炮制臨床應用。

R283;R284

A

1673-2197(2015)08-0024-02

10.11954/ytctyy.201508012