雞骨草膠囊中梔子提取工藝研究及有效成分含量測定

林 威，覃 葆，劉 泉，梁 悅,韋佩妍

(廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001)

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雞骨草膠囊中梔子提取工藝研究及有效成分含量測定

林 威，覃 葆*，劉 泉，梁 悅,韋佩妍

(廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001)

目的：探討雞骨草膠囊中主要原料藥梔子的含量測定雞骨草膠囊方法及提取工藝。方法：采用高效液相色譜法測定雞骨草膠囊有效成分含量，應用正交設計法優選梔子提取工藝。結果：梔子苷在0.06～1.2μg(r=0.999 8) 范圍內線性關系良好，平均加樣回收率為101.28%(RSD=1.18)。結論：該方法簡便、有效、準確、重復性好，可用于雞骨草膠囊有效成分的提取和測定。

雞骨草膠囊；梔子苷；提取工藝；含量測定

雞骨草膠囊由三七、人工牛黃、豬膽汁、牛至、雞骨草、白芍、大棗、梔子、茵陳、枸杞子等十味中藥組成，具有疏肝利膽、清熱解毒的作用。目前對雞骨草膠囊的研究中，梔子苷含量測定較多[2-4]，而梔子的提取工藝研究較少，在當今中藥工業生產過程中，很多企業不注重原料藥的前處理，藥材未經過合適的處理就進行投料生產，造成藥材不能被最有效地利用。本實驗根據雞骨草膠囊現有的工藝方法，系統分析雞骨草膠囊中的主要原料藥材梔子，通過正交試驗優選該藥材的提取工藝，為企業改進原料藥前處理及藥物規范化生產提供參考。

1 材料

Agilent1100高效液相色譜系統(包括G1311A Quatpunp、G1314A VWD、G1316A Collum)；LG16-WA 高速臺式離心機(北京京立離心機有限公司)；BP211D電子分析天平(德國賽多利斯)；KQ520003型超聲清洗器(昆明市超聲儀器有限公司)；DFY-300 300克搖擺式高速萬能粉碎機(溫嶺市林大機械有限公司)。梔子苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：110749-200714)，梔子藥材(廣西玉林制藥集團有限責任公司，批號：100505)。乙腈(色譜純，美國Fisher公司)，水為純水，其余均為分析純。

2 梔子提取工藝及有效成分測定

2.1 梔子中梔子苷含量測定

2.1.1 供試品溶液制備 精密稱取梔子2.0g，置于100mL錐形瓶中，根據因素水平設計表加不同倍量蒸餾水煎煮，合并煎液，過濾、濃縮至干浸膏。用甲醇定容至25mL，搖勻離心即得供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液制備 精密稱定梔子苷對照品3.01mg，用甲醇定容至50mL，即得。

2.1.3 色譜條件 色譜柱：ODS-2；流動相：乙腈-水(15∶85)；檢測波長：238nm；柱溫：28℃；進樣量：10μL；流速:1.0mL/min。在此條件下，分離度大于1.5，目標峰與其他組分達到基本分離，梔子苷理論塔板數不低于1 500(見圖1、圖2)[1]。

圖1 梔子苷對照品溶液高效液相色譜

圖2 梔子供試品溶液高效液相色譜

2.1.4 線性試驗 分別精密吸取苦梔子苷對照品溶液(0.03mg/mL)1、2、5、10、15、20μL，在“2.1.3”色譜條件下進樣測定，以峰面積y為縱坐標，進樣量x(μg)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程：y=7 477.1x+125.07，R=0.999 8(見圖1),結果表明，梔子苷在0.06～1.2μg范圍內線性關系良好。

圖1 梔子苷對照品線性曲線

2.1.5 精密度試驗 取同一梔子苷對照品溶液，在“2.1.3”色譜條件下重復進樣6次，每次進樣10μL，計算峰面積RSD為0.62%，表明儀器精密度良好。

2.1.6 穩定性試驗 取梔子苷供試品溶液，按照“2.1.3”色譜條件，分別在0、1、2、4、8、16、24h進樣10μL，測定梔子苷的含量，計算 RSD為1.86%，表明梔子苷24h內穩定性良好。

2.1.7 重復性試驗 取同一梔子樣品6份，每份2.0g，精密稱定。按照供試品溶液制備方法制備，在“2.1.3”色譜條件下進樣10μL，記錄色譜圖，計算RSD為1.36%，表明該方法重現性良好。

2.1.8 回收率試驗 取已知含量的梔子樣品6份，每份1.0g，精密稱定，分別精密加入一定量的梔子苷對照品，按照供試品溶液制備方法制備，在“2.1.3”色譜條件下進行測定，并于505nm處進行測定，以外標法計算回收率。試驗結果表明，回收率良好，見表1。

表1 雞骨草回收率結果

2.2 梔子提取工藝正交試驗

2.2.1 因素與水平 梔子為雞骨草膠囊中不可缺少的一味中藥，根據雞骨草膠囊的制作工藝和單味藥的提取工藝進行實驗，確立梔子以適量水煎煮2次，以粉碎度(A)、溶劑用量(B)、煎煮次數(C)為考察因素，梔子苷含量為考察指標進行L9(34)正交試驗，因素水平、正交試驗及方差分析分別見表2、表3、表4。

表2 正交因素水平

表3 正交試驗結果

表4 方差分析

注：F0.05(2,2)=19.00；F0.01(2,2)=99.00。

3 討論

實驗表明，HPLC法測定雞骨草膠囊中梔子苷的含量，在流動相乙腈-水(15∶85)條件下結果顯示，該法操作簡便，方法科學、準確，專屬性強。本次實驗以梔子苷為對照品，根據2010版藥典選擇高效液相色譜條件和雞骨草膠囊的制作工藝，采用正交設計實驗，根據表3中R值及K值的大小，得出各因素影響梔子苷含量的主次關系為C>B>A,最優方案為A3B3C2，即在雞骨草膠囊中，梔子的最佳提取工藝為粉碎至40目，加20倍量水煎煮3次。各組分間梔子苷含量差異較小。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫藥科技出版社,2010:231.

[2] 范全民.HPLC測定雞骨草膠囊中桅子苷的含量[J].現代中藥研究與實踐,2006,20(5):44-45.

[3] 施群，孫桂鴻，付亞平，等.雞骨草膠囊中梔子甙含量測定[J].湖北中醫雜志,2000,22(12):43-44.

[4] 王艷紅，陳獻.雞骨草膠囊中梔子苷的含量測定[J].中國中醫藥信息雜志,2007,14(3):41-42.

(責任編輯：魏 曉)

Research on Extraction Tchnology and Content Detmination of the Main Raw Material Drug of Gardenia in Jigucao Capsule

Lin Wei,Qin Bao*,Liu Quan,Liang Yue,Wei Peiyan

(GuangXi Chinese Medical University,Nanning 530001,China)

Objective:To discuss the method of determination and the extraction techniques of Gardenia in Jigucao capsule.Methods:The main raw material drug of Jigucao capsule was determined by HPLC.Using Orthogonal design experiments to the experiment.Results:Jigucao and Geniposide has a good linear relationship in 0.06～1.2μg.The coefficient of recovery in Geniposide was 101.28% (RSD=1.18%)。It has a good sample recovery.Conclusion:The method is simple,stable accurate and eproductible and can be used as determination and the extraction techniques of Jigucao capsule.

Jigucao Capsule；Geniposide；Extracting Process；Content Determination

2014-12-19

國家科技特派員項目(2009GJE10028)

林威(1989-)，男，廣西中醫藥大學碩士生，研究方向為中藥質量控制。

覃葆(1956-)，男，廣西中醫藥大學教授，碩士生導師，研究方向為中藥炮制及中藥質量標準研究。

R284.2

A

1673-2197(2015)08-0028-02

10.11954/ytctyy.201508014