肝氣郁結對雄性大鼠精瘀影響實驗研究

范 薇，楊芳艷，夏麗娜

(成都中醫藥大學，四川 成都 610075)

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肝氣郁結對雄性大鼠精瘀影響實驗研究

范 薇，楊芳艷，夏麗娜

(成都中醫藥大學，四川 成都 610075)

目的：建立肝郁雄性大鼠模型，探討肝氣郁結對精瘀影響的可能病理改變。方法：采用束縛筒慢性應激法建立肝郁模型，自制電棒刺激法建立電棒精瘀模型，對大鼠進行行為學測定，運用酶聯免疫分析試劑盒檢測大鼠股動脈血清中α-糖甘酶(α-Glu)及雌二醇(E2)含量。結果：曠場實驗中，肝郁組與空白組大鼠在穿格次數、站立次數和理毛次數等指標存在顯著差異(P<0.05)；與空白組比較，肝郁組、電棒精瘀組的血清中α-Glu、E2含量差異有統計學意義(P<0.05)，肝郁組與電棒精瘀組血清中α-Glu 、E2含量差異無統計學意義(P>0.05)。結論：肝氣郁結可導致雄性大鼠精瘀的發生，血清中α-Glu、E2含量水平改變是其病理變化的重要因素。

肝氣郁結；精瘀；基礎研究

中醫理論認為肝主筋，司疏泄，能暢達氣機，調暢情志，其經脈過陰器，使宗筋舉，啟動精門，促進精液排泄，維持男子正常生殖功能。如果肝氣郁結，則可導致精液排出不暢而致精瘀，從而影響男性生殖機能。本實驗通過束縛筒慢性應激法建立大鼠肝郁模型，電棒刺激法建立大鼠精瘀模型，通過大鼠行為學表現，測定血清中α-糖苷酶(α-Glu)、雌二醇(E2)濃度，揭示肝氣郁結對精瘀影響的可能病理改變，為深層次揭示情志—肝郁—精瘀的發生機制，闡釋精液瘀阻的致病機理。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 清潔級SD大鼠24只，雄性，8周齡，體重200～250g(24只雄鼠經過篩選具備性活動能力)，購自成都中醫藥大學動物試驗中心。

1.1.2 試劑 ELISA α-Glu試劑盒， ELISA E2試劑盒，美國R&D公司生產，購于北京中天正商貿有限公司。

1.1.3 儀器 Legend RT+ 230v冷凍離心機，JJT-900/1300型超凈工作臺，Thermo酶標儀。

1.2 方法

1.2.1 分組 大鼠飼養于室溫(22±2)℃，光照周期12h∶12h；自由攝食飲水、相對濕度40%條件下，每籠4只。適應1周后，將大鼠隨機分成3組：空白組8只，肝郁組8只，電棒精瘀組8只。

1.2.2 造模用具 束縛筒(自制)：用硬塑料制成束縛筒，該筒為管狀，其上打滿通氣孔，長約21cm，筒口外徑6cm，內徑5.3cm，筒內前端置一直徑略小于筒內徑并可前后調節的無底圓嘴塑料瓶，其瓶口為通氣口(距離筒口5cm左右)，后端為可開關閘門，調節束縛強度。大鼠頭向通氣口置入后，關閉閘門，可通過調節塑料瓶改變大鼠活動空間。

電動刺激棒：自制鐵棒(棒長6cm)，一端用導線連于電針機(華佗牌電子針療儀 SDZ-II)。

1.2.3 造模 ①肝郁模型組。實驗采用張立俠等[1]方法，建立雄性大鼠肝郁模型。大鼠適應1周后開始造模，將肝郁模型組大鼠束縛于束縛筒內，每天180min，以后每天增加束縛10min，并調節縮小束縛筒空間，逐日加大束縛強度, 通過增強束縛強度和時間消除大鼠對應激的耐受性，造模第31天，束縛時間為480min，并維持此時間與強度，繼續束縛19天，造模時間共計50天。每次束縛時，使大鼠鉆進束縛筒內，平架在木板上，不予進食和水。

②電棒精瘀組 。采用電動刺激棒，插入大鼠肛門2～2.5cm，采取斷續波，1V電流大小電刺激，連續刺激1min，以大鼠陰莖勃起充血，有前列腺液溢出但不射精為度，每日1次，連續刺激50天。

1.2.4 行為學觀察 實驗在無噪音的實驗環境條件下進行。操作者握住大鼠的尾巴根部1/3處，輕輕將大鼠放入開闊箱的中央格，并開始計時。由兩位實驗人員共同觀察記錄大鼠5min內的行為舉動，每只大鼠僅做1次開闊箱行為測定，實驗要求在單盲條件下進行。(每只大鼠在實驗完畢后被取出后，應及時將其排泄物清掃干凈，以免留有氣味而干擾下一只大鼠的觀察結果。)

觀察指標：穿格次數，三爪以上跨入鄰格的次數；直立次數，兩前肢完全離開地面或伏于側壁上的次數；理毛修飾次數，前肢向上抬舉，抓癢、洗臉、舔足的次數。

1.2.5 生化指標檢測 造模第50天，于末次束縛(或電棒刺激)2h后處死大鼠，三組大鼠股動脈取血，采用ELISA法檢測血清中α-Glu及E2含量。

2 結果

2.1 大鼠行為學觀察結果

曠場實驗中，肝郁組與空白組大鼠在穿格次數、站立次數和理毛次數上存在顯著差異(P<0.05)，大鼠行為學觀察結果見表1。

表1 曠場實驗觀察慢性束縛應激模型大鼠行為變化比較 ±s，次)

注：與空白組比較，*P<0.05。

2.2 血清中α-Glu及E2含量檢測結果

與空白組比較，肝郁組、電棒精瘀組小鼠血清中α-Glu、E2含量差異有統計學意義(P<0.05)，肝郁組與電棒精瘀組血清中α-Glu 、E2含量差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

組別α-Glu(U/L)E2(ng/L)空白組(n=8)5.1251±1.09358.7634±1.23280肝郁組(n=8)3.3895±1.4464*12.2655±1.9420*電棒精瘀組(n=8)2.5897±1.0369*13.5084±0.83462*

注：與空白組比較，*P<0.05。

3 討論

臨床流行病學資料顯示，中醫肝臟病證占五臟總體病證的40%，肝郁證為肝臟病證的基本病理變化，是肝病證候核心，為最為常見的中醫證候[2]。精瘀是指生殖之精瘀滯于生殖道或精室所形成的一種腐敗濁邪，由精液排出障礙引起的以疼痛、生殖機能異常為主的病證[3]。精瘀一旦形成，其致病廣泛，以泌尿、生殖系統疾病較為常見，是導致慢性非細菌性前列腺炎病變的主要因素[4]。根據中醫理論，情志—肝郁—精瘀具有相關性，本實驗通過建立肝郁大鼠模型及電棒精瘀模型，檢測相關指標，驗證肝氣郁結對雄性大鼠精瘀的影響。

實驗選擇束縛筒慢性束縛應激法制作肝郁模型，曠場實驗中，肝郁組與空白組大鼠比較在穿格次數、站立次數和理毛次數上存在顯著差異(P<0.05)，肝郁組大鼠行為學顯示與文獻中肝郁證動物模型相一致，提示肝郁模型建立成功。實驗指標檢測中，血清α-Glu含量的測定顯示，與空白組比較，肝郁組、電棒精瘀組的血清中α-Glu、E2含量差異有統計學意義(P<0.05)，肝郁組與電棒精瘀組血清中α-Glu、E2含量差異無統計學意義(P>0.05)。

α-Glu由附睪分泌，可反映附睪的功能，與附睪精子成熟有關。當輸精管和附睪阻塞時，α-Glu量會明顯減少，因此可作為精道阻塞的重要依據。男性不育癥，如精索靜脈曲張、精子缺乏或精子活力下降及輸精管切除后均可見血清中α-Glu活力降低。本試驗中，血清E2水平明顯改變，空白組與肝郁組、空白組與電棒精瘀組有顯著差異。雌激素主要作用在于維持和調控副性器官的功能。大量動物實驗結果顯示，慢性無菌性前列腺炎的發生是由于血清中E2濃度增高所引起的，性激素可調節前列腺的正常生理功能[5]。本試驗顯示，肝氣郁結可致血清E2濃度水平升高，導致精瘀的形成。肝郁組與電棒精瘀組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

4 結論

本實驗結果表明，肝氣郁結可導致雄性大鼠精瘀的發生，血清中α-Glu、E2含量水平改變是其病理變化的重要因素。目前，肝郁精瘀動物實驗研究仍處在探索階段，在肝氣郁結的何種階段、何種程度會導致精瘀及精瘀的病理判定標準有待進一步深入研究。

[1] 張立俠，王慧.肝郁證勃起功能障礙大鼠模型模型建立的實驗研究[J].中國男科學雜志，2006,20(11)：29-31.

[2] 楊文明，程彪，鮑遠程，等.肝郁證實驗研究概覽[J].中國中醫藥信息雜志，2004，11(12)：1125-1127.

[3] 王承平, 徐中環, 周波.“白淫”、“白濁”、“敗精”之內涵辨析[J].河南中醫,2005，25(3)：24-25.

[4] 王承平, 胡卡明, 王永剛.敗精致病性與慢性非細菌性前列腺炎相關性研究[J].四川中醫，2009，27(2)：11-14.

[5] 沈周俊，何竑超.慢性無菌性前列腺炎與性激素[J].中國男科學雜志，2008,22(2):1-6.

(責任編輯：李嵐春)

Research on Effects of Liver Depression of Male Rat Srerm Stasis

Fan Wei ,Yang Fangyan,Xia Lina

(Chengdu Univercity of TCM, Chengdu 610075, China)

Objective:To establish liver qistagnation male rats model and investigate pathological change of sperm stasis by the stagnation of liver qi.Methods:barrel bound chronic irritated method was adopted to establish the model of liver depression, and self-made electric prods stimulation method was adopted to establish the model of sperm stasis. The rats behavior determination and alpha glycoside enzyme (alpha-Glu),estradiol (E2) content detection in femoral artery serum by ELISA kit were processed. Results:In the open field test, there are significant differences between liver depression group and blank control group rats in wear lattice times, stand up times and teddying hair times (P<0.05). It shows big difference in the contents of the serum alpha-Glu, E2 between the groups of liver depression group, sperm stasis group and the control group(P<0.05). While there is some difference between the group of liver depression and sperm stasis with no statistical significance (P>0.05).Conclusion:The liver qi stagnation can lead to the occurrence of male rat sperm stasis, level of alpha-Glu, serum E2 content change is an important factor in the pathological changes.

Liver Depression;Sperm Stasis;Effection

2014-12-17

成都中醫藥大學科技發展基金(ZRYB201143)

范薇(1972—)，女，博士，成都中醫藥大學講師，研究方向為中醫藏象及敗精理論。E-mail:921575069@qq.com

R271.1

A

1673-2197(2015)06-0007-02

10.11954/ytctyy.201506003