腸腹寧顆粒止瀉作用及其有效成分研究

賴岳曉，劉佩沂，田素英 ，陳文秀

(1.中山市黃圃人民醫院，廣東 中山 528429；2.廣東藥學院，廣東 廣州 510006；3.中山巿寶元制鞋廠職工醫院，廣東 中山 528463)

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腸腹寧顆粒止瀉作用及其有效成分研究

賴岳曉1，劉佩沂1，田素英2*，陳文秀3

(1.中山市黃圃人民醫院，廣東 中山 528429；2.廣東藥學院，廣東 廣州 510006；3.中山巿寶元制鞋廠職工醫院，廣東 中山 528463)

目的：研究腸腹寧顆粒組成藥物白頭翁、木槿花及其醇、水提取物的止瀉作用，篩選其有效成分。方法：建立小鼠腹瀉模型，通過觀察小鼠小腸的推進作用研究腸腹寧顆粒、白頭翁、木槿花及其提取物的止瀉作用，篩選有效成分。結果：腸腹寧顆粒(中、高劑量)、白頭翁、木槿花及其提取物均可明顯抑制番瀉葉引起的小鼠腹瀉，且高劑量腸腹寧顆粒的止瀉效果優于中劑量，醇提取物的止瀉效果優于水提取物，腸腹寧顆粒的止瀉效果優于白頭翁、木槿花；腸腹寧顆粒、白頭翁、木槿花及其提取物均可明顯降低小腸推進率，且醇提取物抑制作用最強，腸腹寧顆粒的腸推進抑制作用優于白頭翁、木槿花。結論：腸腹寧顆粒具有較好的止瀉作用，且止瀉效果與劑量呈正相關，白頭翁與木槿花配伍止瀉效果優于單味藥，且醇提取物止瀉效果優于水提物。

腸腹寧顆粒；醇提取物；止瀉作用；有效成分

腸腹寧顆粒是由中山市黃圃人民醫院根據名老中醫的經驗方和臨床醫療需求自擬的醫院制劑，主要由白頭翁和木槿花等組成，臨床上用于急慢性腸炎的治療，尤其對慢性結腸炎有獨特療效[1]，但其有效成分尚不明確。方中主藥白頭翁可清熱解毒、涼血止痢，木槿花可涼血活血、清熱除煩，用于腸風下血、赤白下痢等癥的治療[2]。為此，本研究對腸腹寧顆粒、白頭翁、木槿花及其不同溶劑提取物的止瀉作用進行研究，分析其有效成分，現報道如下。

1 材料與試劑

1.1 藥品與試劑

白頭翁(玉林市華濟中藥飲片有限公司，批號：14020118)，木槿花(康圣醫藥有限公司，批號：20140321)，番瀉葉(廣西玉林市西草堂中藥飲片有限公司，批號：20140201)，以上藥材均經田素英副教授鑒定符合《中國藥典2010版(一部)》規定。腸腹寧顆粒(中山黃圃人民醫院，批號：20140319)，甲硫酸新斯的明(四川精尖動物藥業有限公司，批號：20141028)，硫酸阿托品(天津藥業集團新鄭股份有限公司，批號：1403135)，鹽酸小檗堿(東北制藥集團沈陽第一制藥有限公司，批號：140329)，95%乙醇(AR級，天津市富宇精細化工有限公司，批號：130110)。

醇提物[3-4]：稱取白頭翁-木槿花(1∶1)粉末45g，置于1 000mL錐形瓶眾，加8倍量70%乙醇，在40℃ 40kHz下超聲40min，濾液回收至無醇味，加蒸餾水定容至100mL，搖勻，得生藥濃度為0.45g·mL-1的醇提液。

水提物：稱取白頭翁-木槿花(1∶1)粉末45g，加8倍蒸餾水，浸泡20min，煎煮40min，濾液加熱濃縮至干，加蒸餾水定容至100mL，搖勻，得生藥濃度為0.45g·mL-1的水提液。

白頭翁和木槿花提取液的制備方法同水提物制備方法，生藥濃度均為0.34g·mL-1。

1.2 動物與分組

昆明(KM)種小鼠，SPF級，由廣東藥學院實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(粵) 2008-0002，體重18～22g，飼養環境溫度為20～25℃，濕度為50%～70%。

將小鼠分為以下幾組，具體用藥方法為：水提物組(水提組，9.00g·kg-1)、醇提物組(醇提組，9.00g·kg-1)、腸腹寧顆粒高劑量組(高劑量，13.50g·kg-1)、腸腹寧顆粒中劑量組(中劑量，6.75g·kg-1)、腸腹寧顆粒低劑量組(低劑量，3.38g·kg-1)、白頭翁組(6.80g·kg-1)、木槿花組(6.80g·kg-1)、鹽酸小檗堿組(陽性組，0.15g·kg-1)、止瀉模型組(番瀉葉，6.00g·kg-1)、硫酸阿托品組(陽性組，0.01g·kg-1)、腸功能模型組(甲硫酸新斯的明，0.15mg·kg-1)，空白組(等體積生理鹽水)。

2 方法

2.1 止瀉實驗

取小鼠100只，體重18～22g，雌雄各半，隨機分為10組(水提組、醇提組、高劑量、中劑量、低劑量、白頭翁組、木槿花組、陽性組、空白組、模型組)，灌胃給予相應藥物，1次/天，連續給藥7 天，空白組和模型組小鼠予以等量生理鹽水。末次給藥前18h禁食不禁水，末次給藥1h后，除空白組外，其他各組小鼠灌胃番瀉葉水煎液，然后每籠放置1只小鼠，籠下鋪中速濾紙進行濕糞計數(濕糞：顆粒濕潤完整、成型、水樣)，造模30min后，開始計時，每隔1h換1次濾紙，連續記錄4h[5]。觀察小鼠總便數、稀便數和稀便級，計算腹瀉指數[6]。稀便級確定方法：糞便污跡直徑<1cm為1；1～1.9cm為2；2～3cm為3；>3cm為4。腹瀉指數為稀便率(每只動物所排稀便數/總便數)與稀便級的乘積，即腹瀉指數=稀便率×平均直徑。

2.2 對小鼠腸功能的影響[7]

2.2.1 對小鼠小腸推進作用的影響 取小鼠90只，體重18～22g，雌雄各半，隨機分為9組(水提組、醇提組、高劑量、中劑量、低劑量、白頭翁組、木槿花組、陽性組、空白組)。灌胃給藥，1次/天，連續給藥7天，空白組、模型組小鼠予以等量生理鹽水，末次給藥前20h禁食不禁水，末次給藥30min后，灌胃10%炭末懸浮液，0.4mL/只，30min后處死小鼠，打開腹腔，分離腸系膜，剪取自幽門至回盲部的小腸，測量小腸長度、推進距離(幽門到炭末推進前沿距離)。炭末推進率=(炭末推進距離∕小腸長度)×100%。

2.2.2 對甲硫酸新斯的明致小鼠小腸功能亢進的影響 取小鼠100只，體重18～22g，雌雄各半，隨機分為10組(水提組、醇提組、高劑量、中劑量、低劑量、白頭翁組、木槿花組、陽性組、空白組、模型組)，灌胃給藥，1次/天，連續給藥7天。空白組、模型組小鼠予以等量生理鹽水，末次給藥前20h禁食不禁水，末次給藥30min后，除空白組外，其余各組小鼠皮下注射甲硫酸新斯的明0.15mg·kg-1，20min后，按“2.2.1”項下方法測量計算炭末推進率。

2.3 統計學方法

3 結果

3.1 止瀉實驗

與模型組相比，各給藥組小鼠腹瀉指數均明顯降低，差異具有統計學意義(P<0.05)；陽性組、醇提物組小鼠止瀉作用最強，但二者比較差異無統計學意義(P>0.05)；水提物組與腸腹寧顆粒中劑量組止瀉作用相當，木槿花組第1小時止瀉作用不明顯;給藥2h后，木槿花、白頭翁組的止瀉作用與腸腹寧顆粒低劑量組相當。結果見表1。

表1 腸腹寧顆粒、不同提取物及方中各藥對小鼠腹瀉的影響 ±s)

注：與模型組比較，*P<0.05，▼P<0.01；與醇提組比較，#P<0.05；與高劑量組比較，★P<0.05；與中劑量組比較，●P<0.05。

3.2 對小鼠小腸功能的作用

3.2.1 對正常小鼠小腸功能的作用 在小腸功能正常的情況下，水提組、醇提組、高劑量、中劑量、白頭翁組、陽性組小鼠的小腸推進率與空白組比較差異具有統計學意義(P<0.05)，其中醇提組、高劑量組小鼠小腸推進率與空白組比較差異極顯著(P<0.01)；木槿花組小鼠腸推進率與腸腹寧低劑量組比較差異無統計學意義(P>0.05)；醇提組小鼠腸推進率與高劑量組比較差異具有統計學意義(P<0.05)；腸腹寧高劑量組小鼠腸推進率與中劑量組比較差異具有統計學意義(P<0.05)；腸腹寧高劑量、中劑量組小鼠腸推進率與白頭翁組比較差異具有統計學意義(P<0.05)。結果見表2。

表2 腸腹寧顆粒、不同提取物及方中各藥對

注：與模型組比較，*P<0.05，▼P<0.01；與醇提組比較，#P<0.05；與高劑量組比較，★P<0.05；與中劑量組比較，●P<0.05。

3.2.2 對甲硫酸新斯的明致小鼠小腸功能亢進的影響 水提組、醇提組、高劑量、中劑量、陽性組藥物對新斯的明導致的小鼠小腸亢進均有拮抗作用，但醇提組、腸腹寧高劑量組拮抗作用比較差異無統計學意義(P>0.05)，且二者作用均強于白頭翁組、木槿花組、中劑量組、低劑量組。醇提組小鼠小腸拮抗作用與水提組比較差異具有統計學意義(P<0.05)，但白頭翁組、木槿花組、低劑量組小鼠小腸拮抗作用比較差異無統計學意義(P>0.05)；腸腹寧高劑量組小鼠小腸拮抗作用與中劑量組比較差異具有統計學意義(P<0.05)。結果見表3。

表3 腸腹寧顆粒、不同提取物及方中各藥對新斯

注：與模型組比較，*P<0.05，▼P<0.01；與醇提組比較，#P<0.05；與高劑量組比較，★P<0.05；與中劑量組比較，●P<0.05。

4 討論

腹瀉是急慢性腸炎、過敏性腸炎、潰瘍性結腸炎的主要癥狀，可由多種原因引起。當胃腸腔內水分、電解質與腸上皮接觸時間縮短時，可導致水分吸收減少，形成胃腸運動功能異常性腹瀉。中醫認為濕盛是導致腹瀉的重要因素之一。我院自創的中成藥腸腹寧顆粒中白頭翁具有清熱解毒、涼血止痢的功效[2]，主治濕熱痢疾等癥；木槿花具有清熱涼血、解毒消腫的功效，主治痢疾、腹瀉等癥[3]，該藥針對腹瀉病機，療效顯著。

本研究結果表明，醇提液的止瀉效果優于水提液，可能是由于70%乙醇更有利于生物堿和苷類的溶出[9-10]，而水提液中則含有較多的糖類成分。高劑量腸腹寧的止瀉效果弱于醇提液，主要是由于腸腹寧顆粒是由水提物制備而成。

本研究結果表明，腸腹寧顆粒(中、高劑量)、白頭翁、木槿花及其提取物均可明顯抑制番瀉葉引起的小鼠腹瀉，且高劑量腸腹寧顆粒止瀉效果優于中劑量，醇提取物止瀉效果優于水提取物，腸腹寧顆粒止瀉效果優于白頭翁、木槿花；腸腹寧顆粒、白頭翁、木槿花及其提取物均可明顯降低小腸推進率，且醇提取物抑制作用最強，腸腹寧顆粒的腸推進抑制作用優于白頭翁、木槿花。水提組、醇提組、高劑量、中劑量、陽性組藥物對新斯的明導致的小鼠小腸亢進均有拮抗作用。腸腹寧顆粒具有較好的止瀉作用，且止瀉效果與劑量呈正相關，白頭翁與木槿花配伍止瀉效果優于單味藥，且醇提取物止瀉效果優于水提物。

綜上所述，腸腹寧顆粒是治療急慢性結腸炎的有效藥物，其含有的白頭翁和木槿花均具有較好的止瀉作用，但其分子作用機制仍需進一步深入研究。

[1] 劉佩沂,賴岳曉,田素英.腸腹寧顆粒及其主要成分總皂苷體外抗菌實驗研究[J].亞太傳統醫藥,2011,7(4):13-14.

[2] 賴岳曉,劉佩沂,田素英,等.木槿花研究概況及存在問題[J].海峽藥學,2010,22(1):78-80.

[3] 劉佩沂,賴岳曉,田素英.腸腹寧顆粒中總黃酮的最佳提取工藝[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17(11):39-40.

[4] 呂惠卿,吳曉莉.木槿花總黃酮超聲提取工藝的優化[J].中國中醫藥科技,2009,16(6):461-463.

[5] 陳奇.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛生出版社,2000:332.

[6] 曹玲芝,馬利芹,王麗葉,等.建立動物腹瀉模型的研究進展[J].安徽農業科學,2008,36(26):11383-11385.

[7] 茹麗,郭起岳,許常輝.保濟丸粉對小鼠腹瀉及腸運動的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(4):235-237.

[8] 賴岳曉,劉佩沂,王嵩,等.腸腹寧顆粒及其主要成分總皂苷鎮痛與止瀉作用研究[J].中國中醫藥咨訊,2011(10):52-53.

[9] 丁秀娟.中藥白頭翁化學成分研究[D].蘇州:蘇州大學,2010.

[10] 莫少紅.白頭翁的化學成分及藥理作用研究進展[J].中藥材,2001,24(5):385-387.

(責任編輯：尹晨茹)

Study on the Anti-Diarrhea of Changfuning Granules and Effective Part

Lai Yuexiao1,Liu Peiyi1,Tian Suying2*,Chen Wenxiu3

(1.Guangdong Zhongshan Huangpu People’s Hospital，Zhongshan，Guangdong 528429,China;2.Dept. of Pharmacy,Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou，Guangdong 510006,China;3.Workers' Hospital of Baoyuan Shoe Factory of Zhongshan,Zhongshan 528463,China)

Objective:Objective:Study the Anti-Diarrhea effects of Changfuning Granules(CFNG),and it,s Radix Pulsatillae(RP),Flos Hibiscus(FH),the different extracts(water,alcohol),Screening effective parts.Methods:Diarrhea in mice model was established，observed the small intestine propulsion,so study the Anti-Diarrhea effects about CFNG,RP,FH and the extracts.Results:CFNG(middle and high doses),RP,FH and the extracts inhibited significantly the mice diarrhea caused by senna leaf，the high dose is better than the mi-ddle dose，the alcohol extract is better than the water extract，CFNG is better than RP and FH.CFNG,RP,FH and the extracts lo-wer significantly rate of small intestine propulsion，the alcohol extract is best,CFNG is better than RP and FH.Conclusion:CFNG has good anti-diarrhea effect，the effect is proportional to the dosage，the effect of the compatibility is better than that of sing-le medicine，the alcohol extract is best.

Changfuning Granules;Extract;Anti-diarrhea;Effective Component

2015-02-02

廣東省中山市科技局科研項目( 20122A162)

賴岳曉(1976-)，男，廣東省中山市黃圃人民醫院副主任中藥師，研究方向為醫院藥劑學。

田素英(1968-)，女，廣東藥學院副教授，研究方向為中藥開發應用。E-mail:zsxqtsy@126.com

R285

A

1673-2197(2015)06-0009-03

10.11954/ytctyy.201506004