HPLC法測定林芝地區(qū)丹參中丹參酮IIA含量研究

張小紅，梁 潔，肖 雪,*，史慶龍

(1.廣東省食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)校，廣東 廣州 510663；2.廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；3.中山大學(xué) 南沙研究院，廣東 廣州 511458)

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HPLC法測定林芝地區(qū)丹參中丹參酮IIA含量研究

張小紅1，梁 潔2，肖 雪2,3*，史慶龍3

(1.廣東省食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)校，廣東 廣州 510663；2.廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；3.中山大學(xué) 南沙研究院，廣東 廣州 511458)

目的：采用高效液相色譜(HPLC)法測定不同采收期丹參不同部位丹參酮IIA的含量。方法：采用HPLC法測定，色譜柱為Phenomenex C18柱(4.60mm×250mm，5μm)；流動相為水(A)—甲醇(B)(75∶25)等度洗脫，流速為1mL/min；檢測波長為270nm，柱溫25°C。結(jié)果：丹參酮IIA含量測定線性范圍為3.24～97.2μg/mL，R2=0.999 9，平均加樣回收率為99.1%。結(jié)論：不同采收期丹參不同部位丹參酮IIA含量有差異。

丹參；丹參酮IIA；含量測定

丹參為唇形科植物(SalviamiltiorrhizaBge.)的干燥根和根莖，具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消癰等功效，廣泛用于各種痹證、痛證的臨床治療[1]。丹參是目前國內(nèi)用量極大的一味中藥材，諸多治療心腦血管疾病中成藥制劑均以丹參為主藥[2-4]。丹參主要成分為：一類是脂溶性成分，以丹參酮類成分為主[5-8]；一類是水溶性成分，以丹參酚酸類成分為主[9-12]。本文主要研究不同產(chǎn)收期丹參原植物不同部位中丹參酮類主要指標(biāo)丹參酮IIA的含量變化，現(xiàn)具體報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260 Series LC液相色譜系統(tǒng)(美國安捷倫科技有限公司，包括二元梯度泵、二極管陣列檢測器、柱溫箱、Chemstation化學(xué)工作站等)；XS105型電子天平(d=0.01 mg，梅特勒—托利多國際貿(mào)易(上海)有限公司)；SL300N型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；XJD250B型微型高速粉碎機(jī)(姜堰市銀河儀器廠)；Milli-Q超純水儀(默克密理博公司)。

1.2 材料

丹參酮IIA(批號110766-200619)對照品，購于中國食品藥品檢定研究院；甲醇(色譜純，德國默克集團(tuán)公司)；其他試劑為分析純(北京現(xiàn)代東方精細(xì)化工有限公司)。

丹參全草于2014年9月和10月采自西藏自治區(qū)林芝地區(qū)，經(jīng)鑒定為唇形科植物丹參(SalviamiltiorrhizaBge.)。按炮制方法，分別得到含水量≤13%的丹參藥材(根莖)[1]、丹參莖、丹參葉，其中莖、葉為丹參根莖剩余部分的混合樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱：Phenomenex C18柱(4.60mm×250mm，5μm)；流動相條件：水(A)-甲醇(B)(75∶25)；洗脫時(shí)間：25min；流速：1.0mL/min；檢測波長270nm，柱溫25°C，進(jìn)樣量為5μL。

2.2 丹參酮IIA對照品溶液制備

精密稱取丹參酮IIA對照品1.62mg，置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品母液。各取標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量置于10mL量瓶中，加入甲醇溶液至刻度，搖勻配制一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.3 供試品溶液制備

精密稱取丹參粉末(過3號篩)0.3g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，用甲醇補(bǔ)足缺失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 空白干擾試驗(yàn)

取供試品溶液、丹參酮IIA對照品溶液和缺丹參空白液，各進(jìn)樣5μL，結(jié)果表明丹參酮IIA對照品溶液和供試品溶液均呈現(xiàn)吸收峰，而缺丹參空白液在與對照品相應(yīng)位置無色譜峰出現(xiàn)，表明該測定無干擾。見圖1。

圖1 丹參色譜

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取丹參酮IIA對照品溶液，分別進(jìn)樣5μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積積分值。以丹參酮IIA對照品濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為：Y=31.501X-16.653，R2=0.999 9。結(jié)果表明，丹參酮IIA在3.24～97.2μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一批對照品，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果顯示丹參酮IIA含量的RSD(%)為0.4，說明該方法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取丹參藥材(根)按供試品制備方法平行制備供試品6份，結(jié)果丹參酮IIA含量RSD(%)為0.5，說明該方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按供試品溶液制備方法制備供試品，分別于0、2、4、6、8、12、24h進(jìn)樣，結(jié)果顯示丹參酮IIA含量RSD(%)為0.4，說明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的同一組丹參藥材，加入各成分對照品適量，按“2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，丹參酮IIA平均加樣回收率分別為99.0%、99.4%、98.7%。見表1。

表1 加樣回收率考察結(jié)果 (%)

2.10 樣品測定

按供試品溶液制備方法制備丹參根、莖葉樣品，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測定，計(jì)算含量。見表2。

表2 丹參不同部位丹參酮IIA含量 (%)

3 討論

本試驗(yàn)按藥典方法提取丹參藥材、丹參莖、丹參葉中丹參酮IIA成分，按藥典方法對丹參酮IIA進(jìn)行色譜分析，所選方法經(jīng)典。由表2可知，同處于林芝地區(qū)所采集的丹參藥材(丹參根)中丹參酮IIA差別較大，兩次采集含量差異較大，其RSD(%)高達(dá)54.3和10.3；不同采收期丹參酮IIA的含量并不相同，可能由于10月份丹參葉落，丹參酮IIA得以蓄積，含量上升。9月份采集的丹參莖和丹參葉中也含有少量丹參酮IIA，但其含量較低；10月份由于葉落，未能采集理想狀態(tài)的丹參葉，故僅檢測丹參莖。本試驗(yàn)結(jié)果表明丹參莖葉存在一定的開發(fā)價(jià)值。

本試驗(yàn)檢測林芝地區(qū)處于采收期的丹參多個部位，為后期丹參的深入研究，如不同生長期丹參不同部位(花、葉、莖、根、種子)中丹參酮IIA含量測定，提供研究基礎(chǔ)，也為丹參植物資源的綜合開發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。

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(責(zé)任編輯：李嵐春)

Determination of Tanshinone IIA ofSalviaMiltiorrhizaBge.Collected from Nyingchi Prefecture by HPLC

Zhang Xiaohong1,Liang Jie2,Xiao Xue2,3,Shi Qinglong3

(1.Guangdong Food and Drug Vocational-Technical School,Guangzhou 510663,China;2.Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510006,China;3.Nansha Research Institute,Sun Yat-sen University,Guangzhou 511458,China)

Objective:To establish a method for Tanshinone IIA for Salvia miltiorrhiza Bge.Methods:The Phenomenex C18analytical column (4.60mm×250mm,5μm) was used.The mobile phases comsisted of H2O and MeOH with isocratic elution.The flow rate was 1 mL/min,the detection wavelength was at 270 nm and the column temperature was at 25°C.Results:The method had good linear relationship within the range 3.24～97.2μg/mL of Tanshinone IIA,with the correlation coefficent higher as 0.999 9.The average recovery was 99.1% of Tanshinone IIA.Conclusion:There were certain concentrations of Tanshinone IIA in different parts of Salvia miltiorrhiza Bge in different harvest.

SalviamiltiorrhizaBge.;Tanshinone IIA;Content Determination

2015-02-15

張小紅(1979-)，女，廣東省食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)校講師，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制。E-mail：57388664@qq.com

肖雪(1985-)，男，博士，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制。E-mail：erxiaohappy@163.com

R284

A

1673-2197(2015)12-0017-02

10.11954/ytctyy.201512007