核桃胚培養條件研究

【摘 要】以香玲核桃胚為試材，研究了不同基本培養基、蔗糖和瓊脂濃度對離體胚萌發、生根和成苗的影響，篩選最佳培養條件。結果表明：最適宜的基本培養基為MS+3%蔗糖+（0.6～0.8）%，種胚培養4周后即可成苗，選生長健壯的生根苗（不需要煉苗）移栽到經高壓滅菌的蛭石中，成活率可達91%以上。

【關鍵詞】核桃；離體培養；萌發；生根

1.目的、材料與方法

核桃（Juglans regia L.）屬胡桃科（Juglandaceae）胡桃屬，是世界四大干果之一，以其很高的經濟、生態及社會效益在世界各地廣泛栽培[1，2]。在核桃種胚離體培養方面，前人有劉淑蘭[3]對果實不同發育時期的胚培養研究，結果表明，在受精前兩個月的幼果胚培養效果最好。袁巧平[4]等探索了幼胚的培養基、光照和時間等培養條件。郭洪英[5]等以成熟種胚上胚軸以上部分作外植體材料進行組織培養，獲得了完整幼苗。本文旨在通過以香玲成熟種胚為外植體，找出最適宜其生長發育的培養條件，為今后核桃種胚組織培養提供理論依據。

材料與方法：

1.1材料

河北臨城綠嶺公司基地 香玲核桃成熟果。

1.2方法

果實采收后，用洗潔凈清洗核桃并用自來水沖洗干凈，用單面刀片去掉核桃青皮后移至超凈工作臺，用75%的酒精消毒5min，最后用無菌水沖洗2次，用單面刀片去掉核桃硬殼和子葉剝取胚，胚用鑷子剝下來：a：將胚分別接種在MS、B5、DKW、WPM基本培養基上。B：以MS為基本培養基，設置蔗糖濃度分別為1%、2%、3%、5%、7%五個梯度；以MS為基本培養基，設置瓊脂濃度分別為0、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、1.5%六個梯度。

每瓶接種3個，每處理為3瓶，3次重復。培養溫度（25±1）℃，光照時間為16h/d，自然光。若無特別說明，pH6.0；3%蔗糖，0.6%瓊脂。暗培養1周，后轉入光照培養。每天觀察胚的動態變化，4周后統計萌發率。

2.結果與分析

2.1基本培養基對核桃離體胚培養的影響

本試驗選用了4種不同的基本培養基MS、B5、WPM、DKW、MS，從表1可以看出，DKW和WPM基本培養基的萌發率顯著低于B5、MS、WPM培養基；B5和MS基本培養基之間萌發率無差異，生長勢和萌發率均明顯優于WPM、DKW基本培養基；而 B5基本培養基培養的幼苗生長稍慢于MS基本培養基，說明核桃胚萌發過程中對鉀鹽需求量較高，硝酸鹽雖對萌發率無影響，但影響胚的生長。綜合考慮，以MS做基本培養基為宜。（備注說明：基本培養基MS、B5、WPM、DKW、MS和B5均含有鉀（KNO3）和硝酸根（KNO3和NH4NO3），但B5的硝酸鹽含量較低，而WPM、DKW含有鉀鹽（K2SO4）和硝酸鹽【Ca（NO3）2和NH4NO3】，與MS和B5基本培養基相比，鉀鹽和硝酸鹽的含量稍低。）

2.2蔗糖濃度對核桃胚離體培養的影響

在MS基本培養基的基礎上，添加不同濃度的蔗糖。結果表明：蔗糖濃度為1%、2%、3%、5%、7%的萌發效果均好，萌發率分別為81.2%、84.6%、89.8%、86.6、62.3。但在后期胚的生長發育中，蔗糖3%處理的幼苗生長勢較強。幼苗生長勢由強到弱依次為3%>5%>2%>1%>7%。由此看出， 3%蔗糖是適宜核桃胚萌發的最佳濃度。培養基中不含蔗糖時僅少數胚能萌發；當蔗糖濃度過高（7%），萌發率下降不明顯，但生長勢很弱，這可能是較高的蔗糖濃度引起培養基滲透壓的改變，導致后期幼苗的生長受到抑制。

2.3瓊脂濃度對核桃雜交胚離體培養的影響

在MS培養基的基礎上，添加不同濃度的瓊脂。結果表明：含瓊脂0、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、1.5% 的萌發率分別為0、80%（少數褐死）、100%、84%、67%（細菌感染，試驗失敗）、100%，可以得知，核桃種胚不適于液體培養基培養。在后期生長過程中，含瓊脂1.5%處理生長勢最弱，說明瓊脂濃度增大對核桃胚的生長不利，其原因是瓊脂濃度增大，固體培養基的結實度增大，營養元素被局限于一定的空間范圍內，流動性差，不足以給胚的生長提供營養；而0.4%、0.6%、0.8%和1.0%四個處理幼苗長勢良好，胚根伸長約5.5cm，苗高4cm，葉片5～11片。綜合觀察，含0.6%～0.8%瓊脂是核桃胚生長發育最好的濃度。

3.生根和移栽

培養4周后，選擇苗高3cm、生長健壯的生根苗移栽到經高壓滅菌的蛭石中，1周后長勢良好，移栽后的幼苗成活率達91%。

4.結論

通過試驗可以看出，香玲核桃成熟種胚最適宜的基本培養基為MS基本培養基，最佳蔗糖濃度為3%蔗糖，瓊脂濃度為在0.6～0.8%比較合適；種胚培養4周后即可成苗，并且成活率高。

【參考文獻】

[1]郗榮庭，張毅萍.中國核桃[M].北京：中國林業出版社，1992.

[2]郗榮庭，張毅萍.中國果樹志（核桃卷）[M].北京：中國林業出版社，1996.

[3]劉淑蘭，韓碧文.核桃離體胚的植株再生[J].植物生理與分子生物學學報，1989，15（1）：98-100.

[4]袁巧平，董茂山.離體培養條件下核桃器官發生和體細胞胚胎發生[J].林業科學，1990，26（6）：495-498.

[5]郭洪英，王永清，李玉堂.核桃離體胚的培養[J].四川林業科技，1999，20（1）：53-56.