HPLC測定黃連上清片中黃芩苷的含量

【摘 要】建立反相高效液相色譜法測定黃連上清片中黃芩苷的含量。黃芩苷具有抗菌抗病毒、鎮痛、抗腫瘤、清除氧自由基、抗炎、抗氧化、保護心腦血管及神經元、解熱、保肝等作用。方法：采用奧泰公司 C18 色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），水-甲醇-磷酸（50：50：0.01）為流動相，檢測波長為315nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。黃芩苷在5～30μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。黃芩苷平均回收率分別為100.1%。結論：本法簡便、準確，可用于黃連上清片中黃芩苷的含量測定。

【關鍵詞】黃連上清片；含量；測定

黃連上清片由菊花、連翹、蔓荊子（炒）、大黃、梔子（姜制）、黃芩、薄荷、黃柏（酒炒）、防風等組成。黃連上清片常用于內熱火盛引起的頭暈腦脹、口舌生瘡、暴發火眼、大便干燥、小便色黃等。黃芩常用于濕溫發熱、胸悶、口渴不欲飲，以及濕熱瀉痢、黃疸等癥[1-3]。《本經》記載：“主諸熱黃疸，腸僻，泄利，逐水，下血閉，（治）惡瘡，疽蝕，火瘍。”黃芩含黃芩素（baicalein）、黃芩新素（neobaicalein）、漢黃芩素（wogonin）、7-甲氧基黃芩素（7-methoxbaic alein）、2，5，8-三羥基-7-甲氧基黃酮、黃芩苷等成分[4-6]。高效液相色譜法以液體為流動相，將具有不同極性的流動相泵入裝有固定相的色譜柱，從而實現對試樣的分析。文采用高效液相法，又根據本實驗采用高效液相色譜法對黃連上清片中的黃芩苷的進行了含量測定。

1.儀器與試藥

（1）儀器：SY-8100高效液相色譜儀（北京北分瑞利分析儀器（集團）公司）；SPECORD250 PLUS紫外可見分光光度計（德國耶拿分析儀器股份公司）；KQ250DE超聲波清洗器超聲波檢測儀器（煙臺鑫康商貿有限公司）；AE224 全觸屏電子天平（海舜宇恒平科學儀器有限公司）；PH-620高精度實驗室酸度計（上海禾工科學儀器有限公司）。

（2）色譜柱：奧泰公司 C18 色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

（3）對照品：黃芩苷。

（4）試劑：甲醇、乙腈為色譜純；水為純化水，其它試劑均為分析純。

（5）試藥：黃連上清片。

2.測定方法確定

2.1色譜條件

依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下。流動相：水-甲醇-磷酸（50：50：0.01）為流動相，檢測波長：315nm，流速：1.0ml·min-1。柱溫：30℃。理論板數按黃芩苷峰計算應不得低于2000。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1mL含10μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備

取裝量差異項下的供試品精密稱定，研細，精密稱取（相當于黃芩苷100μg），置具塞錐形瓶中，精密加入流動相10mL，密塞，精密稱定重量，超聲處理10分鐘，放冷，精密稱定，用流動相補足重量，搖勻，濾過。取續濾液，即得。

2.4 專屬性試驗

依照處方取除黃芩，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，照2.3.3項下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結果在黃芩苷出峰處陰性液無色譜峰，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 精密度試驗

精密稱取黃芩苷對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為10μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD=0.63%，表明本方法精密度良好。

2.6對照品的線性考察

精密稱取適量黃芩苷對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含5、10、15、20、25、30微克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。結果表明，黃芩苷在5～30μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.7重現性試驗

稱取同一批的黃連上清片樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.81%，結果表明此方法的重現性良好。

2.8準確度試驗

取對照品適量， 按處方比例及工藝規程制備模擬片各20片，含量分別相當于標示量的80%、100%、120%。取模擬片照“含量測定”項下方法試驗， 計算回收率為 100.1%，RSD為0.69%。

2.9 最低檢出限與定量

采用2.1項下色譜條件，對樣品測定，當信噪比為10時，定量限為1.5ng；當信噪比為3時，最低檢出限為0.4ng。

2.10樣品穩定性試驗

取同一批黃連上清片樣品，按2.3項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、1、2、3、4、5、6小時，精密吸取供試品溶液10μl 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定黃連上清片中黃芩苷的RSD=0.53%。結果表明供試品6小時內穩定。

2.11樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定黃連上清片三批樣品中黃芩苷的含量，結果三批樣品的含量分別為0.91毫克/片、0.93毫克/片、0.96毫克/片。

3.討論

3.1流動相的選擇

分別考察甲醇-水-三乙胺（70∶30：0.2），水-甲醇-磷酸（，30：70：0.01），水-甲醇-乙腈（50：20：30），水-甲醇-磷酸（50：50：0.01）不同比例的流動相，結果以水-甲醇-磷酸（50：50：0.01）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用水-甲醇-磷酸（50：50：0.01）為流動相為流動相。

3.2檢測波長的選擇

制備黃芩苷對照品稀釋液照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010版一部 附錄ⅤA），于190～900nm波長范圍內進行全波長光譜掃描，記錄吸收光譜。在315nm處有最大吸收峰，故選用315nm為檢測波長[1]。

本實驗表明此方法分離效果好、方法簡便、快捷、準確，、專屬性好，可用于黃連上清片中黃芩苷的含量測定。

【參考文獻】

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