藥品無菌檢測(cè)中培養(yǎng)基滅菌控溫的方法驗(yàn)證

【摘 要】本文對(duì)藥品無菌檢測(cè)中培養(yǎng)基滅菌控溫驗(yàn)證方法進(jìn)行研究。

【關(guān)鍵詞】藥品；無菌；驗(yàn)證

無菌檢查法系指檢查藥品、敷料、縫合線、無菌器具及適用于藥典要求無菌檢查的其他品種是否無菌的一種方法[1-5]。無菌檢查全過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽（包括微量元素）以及生長(zhǎng)素和水等[6-10]。本文對(duì)藥品無菌檢測(cè)中培養(yǎng)基滅菌控溫驗(yàn)證方法進(jìn)行研究。

1.驗(yàn)證目的

本次驗(yàn)證主要進(jìn)行的運(yùn)行、性能確認(rèn)，以確認(rèn)本設(shè)備能夠達(dá)到工藝技術(shù)要求并滿足GMP要求。

2.驗(yàn)證范圍

適用于化驗(yàn)室立式壓力蒸汽滅菌柜的驗(yàn)證。

3.驗(yàn)證相關(guān)文件及資料

（1）相關(guān)文件及資料：藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）、立式壓力蒸汽滅菌柜使用說明書。

（2）所需儀器、設(shè)備：EBRO無線溫度檢測(cè)儀。

（3）所需試劑：嗜熱脂肪桿菌指示劑。

4.法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)要求

（1）設(shè)備的設(shè)計(jì)與安裝應(yīng)符合藥品生產(chǎn)及工藝的要求，安全、穩(wěn)定、可靠，易于清洗、消毒或滅菌，便于生產(chǎn)操作和維修保養(yǎng)，并能防止差錯(cuò)和交叉污染。

（2）用于生產(chǎn)和檢驗(yàn)的儀器、儀表、量具、衡器等其適用范圍和精密度應(yīng)符合生產(chǎn)和檢驗(yàn)要求，有明顯的合格標(biāo)志，并定期校驗(yàn)。

（3）壓力容器應(yīng)具有法律部門認(rèn)可的各項(xiàng)設(shè)計(jì)、制造、檢測(cè)、使用等許可證和報(bào)告。

5.驗(yàn)證實(shí)施

5.1人員培訓(xùn)

（1）目的：使生產(chǎn)相關(guān)人員掌握相關(guān)操作規(guī)程及工藝規(guī)程。

（2）程序：對(duì)驗(yàn)證實(shí)施有關(guān)人員進(jìn)行滅菌罐驗(yàn)證方案培訓(xùn)、滅菌罐操作規(guī)程培訓(xùn)。

（3）可接受標(biāo)準(zhǔn)：上崗操作人員已經(jīng)接受了方案及操作規(guī)程培訓(xùn)，并經(jīng)考核合格后方可上崗。

5.2運(yùn)行確認(rèn)（OQ）

5.2.1滅菌罐蓋運(yùn)行可控

（1）目的：檢查并確認(rèn)滅菌罐蓋運(yùn)行可控。

（2）程序：抬起滅菌罐蓋，關(guān)閉滅菌罐蓋，此過程重復(fù)三次。

（3）滅菌罐蓋密封圈目測(cè)外觀

（4）可接受標(biāo)準(zhǔn)：滅菌罐蓋開合正常。滅菌罐蓋密封圈目測(cè)外觀無任何可清潔污漬與油漬，應(yīng)無密封圈脫出密封槽、老化、破損現(xiàn)象。

5.2.2滅菌柜PLC手動(dòng)程序測(cè)試

（1）目的：確認(rèn)滅菌罐手動(dòng)操作程序符合設(shè)備要求。

（2）程序：按照滅菌罐標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)入手動(dòng)操作界面，將控制面板上的綠色數(shù)顯溫度設(shè)定為129℃，時(shí)間任意設(shè)定（不為零）。

（3）可接受標(biāo)準(zhǔn)：溫度設(shè)定為130℃時(shí)安全閥跳起，微電腦控制停止。

5.3 性能確認(rèn)（PQ）

5.3.1儀表性能確認(rèn)

（1）目的：對(duì)儀表性能進(jìn)行確認(rèn)，確認(rèn)其能夠達(dá)到使用要求。

（2）程序：確認(rèn)溫度指示、傳感器、溫度記錄儀的讀數(shù)值：空載熱分布測(cè)試時(shí)同時(shí)監(jiān)測(cè)設(shè)備自身控制系統(tǒng)的溫度顯示示數(shù)和驗(yàn)證儀冷點(diǎn)溫度探頭顯示示數(shù)，并記錄3次。確認(rèn)時(shí)間記錄儀：當(dāng)滅菌罐腔室內(nèi)達(dá)到預(yù)置的滅菌溫度時(shí)，用標(biāo)準(zhǔn)秒表計(jì)時(shí)，當(dāng)滅菌罐的滅菌計(jì)時(shí)達(dá)到時(shí)停止標(biāo)準(zhǔn)秒表的計(jì)時(shí)，記錄滅菌時(shí)間設(shè)定值和標(biāo)準(zhǔn)秒表計(jì)時(shí)值，連續(xù)記錄3次。

（3）可接受標(biāo)準(zhǔn)：

溫度探頭符合要求；溫度指示探頭實(shí)際顯示數(shù)值與設(shè)定溫度之間的誤差應(yīng)≤±0.5℃；時(shí)間記錄儀與標(biāo)準(zhǔn)時(shí)間指示裝置之間的誤差應(yīng)≤±1%。

5.3.2熱分布測(cè)試

（1）目的：檢查并確認(rèn)滅菌罐在預(yù)定的滅菌條件下，空載運(yùn)行時(shí)滅菌罐內(nèi)的溫度均勻性，確認(rèn)滅菌罐控制用傳感器位于滅菌室內(nèi)的冷點(diǎn)區(qū)；檢查并確認(rèn)滅菌罐在滿載運(yùn)行時(shí)，滅菌罐的溫度均勻性。

（2）程序：

1）空載熱分布實(shí)驗(yàn)：將12個(gè)溫度探頭均勻分布在腔室內(nèi)的物架上且探頭不與腔室內(nèi)壁及其他金屬接觸，至少有一支探頭位于設(shè)備自身控制系統(tǒng)的溫度傳感器附近。運(yùn)行自動(dòng)滅菌程序，確認(rèn)內(nèi)室溫度為121℃時(shí)開始計(jì)時(shí)，每10秒鐘采集一次各探頭溫度值，30分鐘后結(jié)束，以證明熱分布的均一性，確定最冷點(diǎn)及F0值，以上測(cè)試連續(xù)做三次。

2）負(fù)載熱分布實(shí)驗(yàn)：將腔室內(nèi)放入待滅菌的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基放入1L三角燒瓶中，每瓶最多放1000ml培養(yǎng)基。腔室內(nèi)最多放四瓶，最少放一瓶。其它方法與空載熱分布相同，同樣取得一組數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)4次。分別在放一瓶、兩瓶、三瓶、四瓶情況下做負(fù)載熱分布試驗(yàn)，確認(rèn)最冷點(diǎn)及達(dá)到滅菌條件時(shí)間。

3）熱分布探頭分布圖：

將1支探頭與溫度控制和記錄的傳感器（冷點(diǎn)）旁，其余探頭均勻置于腔室各處，各探頭的測(cè)溫點(diǎn)不得與金屬及其他表面接觸。

4）分別對(duì)照空載熱分布及負(fù)載熱分布測(cè)定記錄進(jìn)行滅菌過程溫度均勻性的分析，主要看滅菌腔室達(dá)到設(shè)定的滅菌溫度并穩(wěn)定后（一般3分鐘后）至滅菌計(jì)時(shí)結(jié)束期間滅菌室的溫度分布情況，在“高低差”欄中找出最大的5個(gè)數(shù)值并將最高、最低與平均值相比較，找出最大誤差。

（3）可接受標(biāo)準(zhǔn)：

確認(rèn)滅菌溫度≥121℃，滅菌時(shí)間：30分鐘，F(xiàn)0>15，各點(diǎn)的溫度在每次滅菌程序運(yùn)行過程中的差值≤1℃。

5.3.3熱穿透試驗(yàn)和生物指示劑挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)

（1）目的：確定裝載中的“最冷點(diǎn)”，并肯定該點(diǎn)在滅菌過程中獲得充分的無菌保證值。

（2）程序：將探頭放入培養(yǎng)基內(nèi)，分別按負(fù)載熱分布裝載方式進(jìn)行熱穿透試驗(yàn)。其他方法與滿載熱分布相同，各得出三組數(shù)據(jù)；生物指示劑挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)隨熱穿透試驗(yàn)同步進(jìn)行，將嗜熱脂肪桿菌指示劑1支放到非冷點(diǎn)培養(yǎng)基燒瓶?jī)?nèi)，另一支放到冷點(diǎn)培養(yǎng)基燒瓶?jī)?nèi)，一起滅菌。

（3）可接受標(biāo)準(zhǔn)：滿載狀態(tài)下，確認(rèn)滅菌溫度121℃，滅菌時(shí)間：30分鐘，F(xiàn)0≥15將指示劑放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天，56-60℃，指示劑應(yīng)呈紫色。另取一支未滅菌的指示劑，一同培養(yǎng)后，應(yīng)呈黃色。

5.3.4滅菌效果驗(yàn)證

微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)合格后，按照滅菌程序連續(xù)滅三批培養(yǎng)基。其中每批包括營(yíng)養(yǎng)瓊脂、玫瑰紅鈉瓊脂、改良馬丁瓊脂。滅菌后將上述培養(yǎng)基鋪成菌碟后進(jìn)行培養(yǎng)。可接受標(biāo)準(zhǔn)：菌碟應(yīng)無菌生長(zhǎng)。 [科]

【參考文獻(xiàn)】

[1]樂正永.無菌檢查方法驗(yàn)證資料分析[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2008（23）.

[2]劉玉軍，徐占鰲，梁毅.藥品無菌過濾驗(yàn)證的缺陷探析[J].中國(guó)藥事，2010（06）.

[3]陳西勇，于淑渤，梁宏.無菌藥品生產(chǎn)發(fā)生微生物污染的因素分析（下）[J].首都醫(yī)藥，2009（08）.

[4]郭紹雄，張祥鳳，謝敬東.實(shí)施藥品生產(chǎn)GMP管理的對(duì)策分析[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2010（02）5（01）.

[5]王新建，王鳳山，王海燕.最終滅菌藥品無菌保證體系和參（下轉(zhuǎn)第328頁）（上接第300頁）數(shù)放行的關(guān)鍵因素探討[J].齊魯藥事，2006（03）.

[6]宋勤，袁林娜.中國(guó)藥典與歐州藥典無菌檢查培養(yǎng)基靈敏度的比較實(shí)驗(yàn)[J].藥物分析雜志，2005（11）.

[7]許華玉，李智勇，王國(guó)榮.2005版《中國(guó)藥典》無菌檢查法修訂內(nèi)容的介紹[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2005（02）.

[8]徐林.GMP的無菌保證[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2000（03）.

[9]趙宏大，謝文，紀(jì)紹梅.我國(guó)微生物培養(yǎng)基用瓊脂的標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥事，2010（06）.

[10]陳西勇，于淑渤，梁宏.無菌藥品生產(chǎn)發(fā)生微生物污染的因素分析（上）[J].首都醫(yī)藥，2009（06）.