AKA、CCP、RA33、RF聯合檢測對類風濕關節炎的臨床診斷價值

[摘要] 目的 探討血清抗角蛋白抗體（AKA）、抗環瓜氨酸抗體（anti-CCP）、抗RA33抗體及類風濕因子（RF）聯合檢測對類風濕關節炎（RA）的診斷意義。 方法 利用間接免疫熒光法檢測RA組、非RA自身免疫性疾病組以及正常對照組患者血清AKA；酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測抗CCP抗體和抗RA33抗體；免疫散射比濁法檢測RF因子。 結果 RA組中AKA、anti-CCP、抗RA33抗體、RF的陽性率分別為54.45%、81.12%、44.44%、75.56%，顯著高于非RA組（5.61%、3.74%、8.41%、50.47%）及正常對照組（2.50%、2.50%、2.50%、7.50%，P<0.01）；AKA、anti-CCP、抗RA33抗體和RF聯合檢測診斷RA的靈敏度為100.0%，特異性為84.11%，敏感性分別高于AKA的54.45%、anti-CCP的81.12%、抗RA33抗體的44.44%和RF的75.56%。 結論 AKA、抗CCP抗體、抗RA33抗體、RF四者聯合檢測有助于提高臨床對RA的診斷。

[關鍵詞] 類風濕因子；抗角蛋白抗體；抗環瓜氨酸肽抗體；抗RA33抗體；類風濕關節炎

[中圖分類號] R593.22 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2015）20-0096-03

Diagnostic value of combined detection of AKA antibody， anti CCP antibody，anti RA33 antibody and RF for rheumatoid arthritis

WANG Ting HE Yanxia

Clinical Laboratory， the Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University， Zhengzhou 450014， China

[Abstract] Objective To investigate the diagnostic value of combinational test of anti-keratin antibody （AKA）， anti cyclic citrullinated peptide antibodies （anti-CCP）， anti RA33 antibody and rheumatoid factor（RF） in serum for RA （Rheumatoid Arthritis）. Methods Serum AKA was detected by indirect immunofluorescence，anti CCP antibody and anti RA33 antibody by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） and RF factor by immune scattering turbidimetric method for patients of RA case group，non RA group and normal control group. Results The positive rate of AKA， anti-CCP， anti RA33 antibody and RF in RA group were 54.45%， 81.12%， 44.44%， 75.56%， which was significantly higher than that of non RA group of 5.61%， 3.74%， 8.41%， 50.47%， as well as that of control group of 2.50%， 2.50%， 2.50%， 7.50% （P<0.01）. The combined detection of AKA， anti-CCP， anti RA33 and RF was 100.0% of sensitivity and 84.11% of specificity. This sensitivity was higher than that of AKA 54.45%， anti-CCP 81.12%， anti RA33 antibodies 44.44% and 75.56% of RF. Conclusion The combined detection of AKA， anti-CCP， anti RA33 antibody and RF is proposed to be a valuable diagnostic tool for RA.

[Key words] Rheumatoid factor； Antikeratin antibody； Anti cyclic citrullinated peptide antibody； Anti RA33 antibody； Rheumatoid arthritis

類風濕關節炎（rheumatoid arthritis，RA）是以對稱性多關節炎為主要臨床表現的異質性、系統性、自身免疫性疾病，患病率為0.18%～1.07%，30～50歲左右高發，一般女性發病率高于男性[1]。RA確切發病機制不明，可能與內分泌、代謝、營養、職業、心理和社會環境的差異、細菌和病毒感染及遺傳因素等方面有關系[2，3]。從病理改變上來說是滑膜炎和由滑膜炎造成的關節軟骨及骨質進行性破壞，導致關節畸形，最后發展為關節功能的喪失，如果不經過正規的治療，大約75%的患者會在3年內出現殘疾[4]。RA早期診斷及時治療可以減少骨關節破壞，延緩病情進展，提高患者的生存質量[5]。本研究選取RA相關血清學標志物抗角蛋白抗體（anti-keratinantibody，AKA）、抗環瓜氨酸抗體（anti-cycliccitrulinated peptid，anti-CCP）、抗RA33抗體及類風濕因子（rheumatoid factor，RF），并探討四者聯合檢測在診斷類風濕關節炎中的臨床價值及應用。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2013～2014年鄭州大學第二附屬醫院就診的RA患者90例，年齡18～69歲，平均（31.0±3.5）歲，男40例，女50例；非RA的自身免疫性疾病患者107例，年齡17～68歲，平均（33.5±5.9）歲，男45例，女62例。同期來院的健康體檢者40例為正常對照組，年齡23～69歲，平均（33.9±8.7）歲，男21例，女19例。疾病組診斷符合2009年ACR和歐洲抗風濕病聯盟（EULAR）提出的新的RA分類標準和評分系統及中華醫學會風濕病學分會《風濕病學診斷和治療指南》。正常對照組排除相關疾病，三組的性別及年齡均具可比性。本實驗經鄭州大學第二附屬醫院醫學倫理學委員會批準，所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 儀器與試劑

7600全自動生化分析儀（日本日立公司）；歐蒙熒光顯微鏡（德國歐盟公司）；酶標儀ELX-800（美國，BIO-TEKINSTRMENT.IN）。AKA試劑為德國歐蒙公司生產的原裝試劑盒，anti-CCP試劑為德國歐蒙公司生產的原裝試劑盒，抗RA33抗體試劑購于德國HUMAN公司，RF試劑由德國西門子醫學診斷產品有限公司生產。

1.3 檢測方法

采集患者外周靜脈血3 mL于無抗凝劑的普通管中，3000 r/min 離心10 min，收集血清，-20℃冰箱凍存，分批檢測。AKA采用間接免疫熒光法（IIF）測定；anti-CCP采用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定；抗RA33抗體采用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定；RF采用免疫散射比濁法測定。所有試劑均嚴格按照試劑盒說明進行操作，抗AKA抗體1∶10稀釋有熒光即為陽性，抗CCP抗體測定值>5 RU/mL陽性，抗RA33抗體測定值> 20 RU/mL為陽性，RF>20 IU/mL為陽性。

1.4 統計學分析

卡方檢驗或四格表精確檢驗用于兩組間率的差異性比較，P<0.05為差異有統計學意義，統計軟件為IBM SPSS Statistics for Mac， 22.0版本（國際商業機器公司，紐約州，美國）。

2 結果

2.1 四種抗體AKA、CCP、抗RA33抗體和RF單獨檢測的比較

2.1.1 AKA的比較 RA組中AKA的陽性率為54.45%，非RA組為5.61%，與正常對照組比較差異均有高度統計學意義（χ2=31.57，P<0.01；χ2=57.93，P<0.01）。見表1。AKA的敏感性為54.45%，特異性為94.39%。

表1 AKA的比較[n（%）]

注：*與RA組陽性率比較，χ2=31.57，P<0.01；**與RA組陽性率比較，χ2=57.93，P<0.01

2.1.2 CCP比較 RA組中anti-CCP的陽性率為81.12%，與正常對照組比較差異有高度統計學意義（χ2=69.79，P<0.01）；同時RA組顯著高于非RA組（χ2=122.91，P<0.01）。見表2。AKA的敏感性為81.12%，特異性為96.26%。

表2 anti-CCP的比較[n（%）]

注：*與RA組陽性率比較，χ2=69.79，P<0.01；** 與RA組陽性率比較，χ2=122.91，P<0.01

2.1.3 RA33的比較 RA組中抗RA33的陽性率為44.44%，顯著高于非RA組的8.41%（χ2=33.97，P<0.01），見表3。同時RA組顯著高于正常對照組（χ2=22.56，P<0.01）。見表3。AKA的敏感性為44.44%，特異性為91.59%。

表3 抗RA33抗體的比較[n（%）]

注：*與RA組陽性率比較，χ2=22.56，P<0.01；**與RA組陽性率比較，χ2=33.97，P<0.01

2.1.4 RF的比較 RA組中抗RF的陽性率為75.56%，高于正常對照組（χ2=51.74，P<0.01），非RA組為50.47%，低于RA組（χ2=13.05，P<0.01）。見表4。RF的敏感性為75.56%，特異性為49.53%。

表4 RF的比較[n（%）]

注：*與RA組陽性率比較，χ2=51.74，P<0.01；** 與RA組陽性率比較，χ2=13.05，P<0.01

2.2 四種抗體AKA、CCP、抗RA33抗體和RF的聯合檢測

四種抗體聯合檢測的靈敏度為100.0%，特異性為84.11%，敏感性分別高于AKA的54.45%、anti-CCP的81.12%、抗RA33抗體的44.44%和RF的75.56%，經過率的標準化后，差異均有高度統計學意義（χ2=54.86，P<0.01），見表5。

表5 四種抗體聯合檢測的比較[n（%）]

注：聯合檢測在RA組和非RA組陽性率比較，χ2=54.86，P<0.01；*四種抗體聯合檢測陽性為四種抗體檢測結果中，至少一種抗體檢測為陽性；**四種抗體聯合檢測陰性為四種抗體檢測

3 討論

我國RA的患病率0.32%～0.36%左右，是造成社會勞動力喪失的主要原因之一[6]，因此對RA 進行早期、可靠的診斷，并采取適當的治療控制病情的發展、避免不可逆的關節損壞是十分重要的。

RF主要存在于類風濕性關節炎患者的血清和關節液中，是診斷RA的主要血清學指標之一[7]。RA患者RF陽性率為52%～92%，一般RF陽性者療效差，并伴有其他并發癥，如周圍神經炎及動脈炎等；RF陰性者病情較輕，并發癥較少，療效較好[8]。RF陰轉或含量降低，可作為評價藥物療效及病情緩解的一個指標。但因其在正常人（正常人RF多數為陰性，陽性率2%～5%，隨年齡增長可呈增高趨勢）及非RA的其他自身免疫疾病患者體中也可呈陽性，尤其在非RA的其他自身免疫疾病中，陽性率保持較高水平，所以臨床診斷的價值有一定局限性[9]。本研究中RF在RA組的敏感性和特異性分別為75.56%和49.53%，因此RF是RA的一個敏感但不十分特異的指標。因此，對于RF檢測結果，應結合臨床病情和其他指標綜合分析。隨著以臨床為導向的基礎研究日益深入，越來越多的相關血清學標記物出現在學者面前，當前AKA、anti-CCP、抗RA33抗體等指標的檢測越來越廣泛地應用到臨床當中來。

AKA能與鼠食管角質層反應，稱之為抗角蛋白抗體，是抗絲集蛋白抗體之一，而且是RA的一個特異的指標。多項研究表明在RA早期檢測到的抗絲集蛋白抗體是臨床癥狀發展的標志。RA患者的晨僵時間以及關節壓痛數都與AKA有關，有報道說AKA的持續陽性提示RA的預后不良[10]。本研究RA組患者AKA顯著高于非RA組和對照組，表明AKA對于診斷RA具有一定價值。1998年Scheliehens發現瓜氨酸是RA病人血清中抗絲集蛋白相關抗體的共同抗原決定簇，并人工合成環絲氨酸多肽（CCP），以此為抗原建立了ELISA方法用于檢測RA患者血清中的CCP抗體[11]。anti-CCP抗體與RF具有相同的靈敏度（anti-CCP抗體：80%，RF：79%），但特異性更高（anti-CCP抗體：96%～100%，RF：63%），而且抗CCP抗體的滴度還與疾病的活動度有很高的相關性，因而具有更為重要的臨床意義[12]。本研究RA組患者anti-CCP顯著高于其它組，而且單項檢測CCP診斷RA的靈敏度最高，說明CCP可作為診斷依據之一。RA33是異質性核糖核蛋白的核心蛋白A2，與分子量33KD的核酸蛋白發生反應，因而定名為抗RA33抗體，研究發現該抗體除在RA患者中呈陽性外，在SLE和混合性結締組織病中也有較低陽性率[13]。本研究RA組患者RA33高于其它兩組，但單項檢測RA33診斷RA的敏感度最低，表明RA33單項檢測用于診斷RA會有較多漏檢，但通過聯合檢測AKA、anti-CCP、抗RA33抗體和RF四個指標，能綜合各自的優點，提高對RA的準確診斷，更大程度地防止漏診和誤診，使患者得到準確和及時的治療，減少致殘率。

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（收稿日期：2015-04-20）