標本久置對ELISA法檢測乙型肝炎表面抗原結果的影響分析

摘要：目的 探討標本久置對ELISA法檢測乙型肝炎表面抗原的影響。方法 篩選強陽性、弱陽性及陰性標本若干份，用ELISA法對同一標本進行當天和隔日檢測。 結果 強陽性及陰性標本放置前后，乙型肝炎表面抗原檢測結果相同，無明顯差異，而弱陽性標本放置后，出現假陰性。 結論 標本久置會使乙型肝炎表面抗原的免疫活性減弱，從而遺漏乙型肝炎表面抗原弱陽性者。

關鍵詞：標本久置；ELISA；乙型肝炎表面抗原

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是20世紀70年代發展起來的一種酶免疫測定技術。因其敏感、特異、操作簡便、重復性好等優點，已在疾病診斷、科研等醫學領域中得到廣泛的應用。目前，各實驗室多采用ELISA法檢測乙型肝炎表面抗原（HBsAg），其測定過程中受影響的因素較多[1]，主要有標本、試劑及操作等因素，本文旨在探討標本久置對ELISA法檢測乙型肝炎表面抗原（HBsAg）結果的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 乙型肝炎表面抗原（HBsAg）強陽性血清標本45例，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱陽性血清標本45例，均來自當天門診及住院患者，30例健康者血清來自大學生自愿者。將每份已分離的血清均分成兩份，一份當日測定，一份置于冰箱4℃保存，第2d取出平衡至室溫待測。

1.2 試劑及儀器 ELISA法測定HBsAg試劑盒購自珠海麗珠試劑有限公司；ELM-3000酶標儀。

1.3 方法 參照《全國臨床檢驗操作規程》ELISA雙抗體夾心法，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，用酶標儀單波長（450nm），空白孔校零后，測定各標本OD值。

1.4 統計學處理 采用SPSS 11.5統計軟件分析，運用配對設計t檢驗。

2 結果

30例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陰性標本和45例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）強陽性標本，當天和隔日血清檢測結果（陰性或陽性）全部一致；45例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱陽性標本，隔日檢測出現2例假陰性（見表1）。

30例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陰性標本和45例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）強陽性標本，當天和隔日血清OD值比較，差異無顯著性（P>0.05）。

45例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱陽性標本，當天和隔日血清OD值比較，差異有顯著性（P<0.05）。

3 討論

本組實驗顯示30例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）陰性標本和45例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）強陽性標本，當天和隔日血清檢測結果（陰性或陽性）全部一致，當天和隔日血清的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的OD值差異無顯著性；45例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱陽性標本，隔日血清檢測出現假陰性率為4.4%（2/45），當天和隔日血清的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）OD值差異有顯著性。本實驗結果表明標本在冰箱中放置時間過長（如1d以上），有可能造成抗原免疫活性減弱，致使OD值明顯降低，從而導致乙型肝炎表面抗原（HBsAg）假陰性出現。

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是診斷和治療乙型病毒性肝炎的一個重要的指標，在臨床實驗中，發現影響ELISA試驗的因素很多[2]，由于標本放置過久而造成乙型肝炎表面抗原（HBsAg）假陰性，若不能及時對該病做出早期診斷，從而延誤了治療時間，就會給患者帶來不必要的痛苦。故在ELISA檢測時，應克服標本久置等干擾因素，標本要做到及時檢測，盡可能當天檢測，并且每一步操作都要嚴格按照說明書，嚴格控制影響因素，保證測定結果準確、可靠，為臨床出具一份有價值的檢驗報告單。

參考文獻：

[1]王葉芳，密輝，王霞.ELISA法檢測乙型肝炎表面抗原影響因素的探討[J].淮海醫藥，2000，18（4）：290.

[2]李俊峰.造成HBsAg假陽性結果分析[J].山西預防醫學，2002，11（11）：318.

[3]王葉芳，密輝，王霞.ELISA法檢測乙型肝炎表面抗原影響因素的探討[J].淮海醫藥，2000，18（4）：290.

編輯/成森