免疫熒光法檢測陰道加德納菌的臨床應(yīng)用

摘要：目的 探討免疫熒光法檢測陰道加德納菌對診斷細(xì)菌性陰道病的價值。方法 對來我院婦科門診就診的120例高度疑為細(xì)菌性陰道病患者分別用培養(yǎng)法，格蘭染色法以及免疫熒光法檢測陰道加德納菌，免疫熒光法分別與其他兩種方法作比較。結(jié)果 120例高度疑為細(xì)菌性陰道病患者中免疫熒光法與培養(yǎng)法檢測陰道加德納菌的Kappa（K）值為0.91，表明具有很好的檢測一致性。革蘭染色法與培養(yǎng)法檢測陰道加德納菌的Kappa（K）值為0.51，表明檢測的一致性一般。結(jié)論 免疫熒光法檢測細(xì)菌性陰道病優(yōu)于革蘭染色法，與國際金標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法具有很好的一致性，且其操作簡便，結(jié)果快、準(zhǔn)確、特異性強(qiáng)，且成本較低。

關(guān)鍵詞：免疫熒光；陰道加德納菌應(yīng)用

細(xì)菌性陰道病（BV）是指一類在細(xì)菌學(xué)上表現(xiàn)為生殖道正常菌群，數(shù)量減少，代之以一組厭氧菌群數(shù)量增加的臨床癥候群，其中最為多見的是加德納菌陰道炎。加德納菌（Gardnerella vaginalis，GV）是一類革蘭陰性或陽性短桿菌，厭氧，嗜血，培養(yǎng)困難。陰道加德納菌是女性細(xì)菌性陰道病的主要病原體之一，它不僅引起尿道炎和陰道炎，還可導(dǎo)致早產(chǎn)、低體重兒、絨毛膜炎、羊膜炎、羊水感染、子宮內(nèi)膜炎、急性輸卵管炎、手術(shù)后感染和子宮頸癌等[1]。而男性被感染后，雖被認(rèn)為是無癥狀攜帶者，但國內(nèi)外曾報道GV可與男性尿道感染，男性不育[2]等有關(guān)。如此重要病原菌的檢測主要有涂片革蘭染色找線索細(xì)胞，細(xì)菌分離培養(yǎng)。本文通過對120例高度疑為細(xì)菌性陰道病患者取分泌物分別用培養(yǎng)法，革蘭染色法和免疫熒光法檢測陰道加德納菌，通過比較得出免疫熒光法的臨床應(yīng)用價值。

1資料與方法

1.1一般資料 收集2014年6月～9月來我院就診的120例高度疑為細(xì)菌性陰道病患者標(biāo)本，分批次分別用培養(yǎng)法，革蘭染色法及免疫熒光法進(jìn)行平行測試。

1.2儀器及試劑 珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的快速革蘭氏染液。上海大眾公司DZ一510型免疫熒光儀；陰道加德納菌熒光抗體試劑盒，購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物檢驗中心；

1.3方法

1.3.1培養(yǎng)法 參照文獻(xiàn)[3]及《臨床微生物學(xué)檢驗》[4]進(jìn)行，具體步驟為：2支原體培養(yǎng)宮頸分泌物及時接種到支原體液體培養(yǎng)瓶，置35～37℃孵箱，在24h、48h時分別觀察結(jié)果，培養(yǎng)液無明顯混濁，但顏色由黃色變?yōu)榧t色判斷為支原體培養(yǎng)陽性。

1.3.2革蘭氏染色法 棉拭子直接涂于干凈玻片，按廠家操作說明書染色，普通光學(xué)顯微鏡下找線索細(xì)胞。

1.3.3免疫熒光法 于玻片中央滴加一滴生理鹽水，將無菌棉拭子中的分泌物均勻涂抹于鹽水中充分晾干；用95%乙醇固定5～10min，自然晾干；用移液器吸取GV免疫熒光試劑5ul輕輕均勻滴加在玻片有樣本處，至37。C水浴箱中溫浴30min；用去離子水或蒸餾水沖洗玻片5次后晾干；在玻片中滴加1滴鏡油后蓋上蓋玻片，蓋玻片上滴加1滴鏡油后置于100倍熒光顯微鏡下尋找發(fā)蘋果綠熒光的細(xì)小短桿菌即為GV，發(fā)現(xiàn)10個及以上報GV陽性。

2結(jié)果

見表1，表2。

用spss軟件計算表1的Kappa值為0.91，大于0.75，表明一致性很好；表2的Kappa值為0.51，介于0.4與0.75之間，表明一致性一般。

3討論

細(xì)菌性陰道病（BV）是指一類在細(xì)菌學(xué)上表現(xiàn)為生殖道正常菌群，數(shù)量減少，代之以一組厭氧菌群數(shù)量增加的臨床癥候群，其中最為多見的是加德納菌陰道炎。如此重要病原菌的檢測主要有涂片革蘭染色找線索細(xì)胞，細(xì)菌分離培養(yǎng)。培養(yǎng)法是國際上檢測陰道加德納菌的金標(biāo)準(zhǔn)，但在實際應(yīng)用中其培養(yǎng)率不容易控制，可能與臨床上不規(guī)則使用抗生素，導(dǎo)致部分菌株在一定程度上受到抑制有關(guān)。同時該菌營養(yǎng)要求高，生長緩慢，需要2～3d甚至更長時間，而且勢必會有部分菌株因為培養(yǎng)條件等因素不能生長，再加上微生物培養(yǎng)需要專業(yè)化技術(shù)、試劑和設(shè)備，因此一般實驗室應(yīng)用價值不高。格蘭染色找線索細(xì)胞是一種診斷細(xì)菌性陰道病的常規(guī)方法，但識別線索細(xì)胞受染色質(zhì)量、顯微鏡的質(zhì)量、標(biāo)本的采集以及操作者的經(jīng)驗等諸多因素影響，主觀性強(qiáng)[4，5]。陰道加德納菌是女性細(xì)菌性陰道病的常見病原體，可經(jīng)性接觸傳播，細(xì)菌性陰道病患者中陰道加德納菌檢出率各地報道不一。本實驗室免疫熒光法試劑由深圳麥科龍生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，檢測原理為異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的陰道加德納菌單克隆抗體可與陰道加德納菌表面抗原發(fā)生特異性結(jié)合，所形成的抗原-抗體-熒光素結(jié)合物在熒光顯微鏡495nm波長激發(fā)光照射下可發(fā)出綠色熒光。單克隆抗體為源于單個B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞分裂而產(chǎn)生的細(xì)胞系所分泌的抗體，僅識別抗原分子上特定的抗原決定族，不僅在抗體的特異上是一致的，而且類、亞類和親和力都是均一的[6]。從本次實驗結(jié)果可以看出，免疫熒光法與金標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法在檢測陰道加德納菌中具有很好的一致性，優(yōu)于平常使用的革蘭染色法。因此，免疫熒光法可在臨床應(yīng)用中作為快速、準(zhǔn)確檢測陰道加德納菌的方法，同時可作為診斷細(xì)菌性陰道炎的特異性指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)：

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[5]馬玉楠.細(xì)菌性陰道病及其診斷[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2000，23（5）：303.

[6]劉志昂.男性非淋菌性尿道炎患者陰道加德納菌檢測分析[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6（4）：694.

編輯/孫杰