酶聯免疫法篩查丙型肝炎病毒抗體的不確定度判定方式探討

摘要：目的 探討酶聯免疫法篩查丙型肝炎病毒抗體的不確定度判定方式，降低假陰性或者假陽性結果判定的風險。方法 應用丙型肝炎病毒抗體酶聯免疫吸附法診斷試劑盒，對樣本中的丙型肝炎病毒抗體檢測結果的不確定性進行評定。結果 1號樣本檢測結果有83.7%的可能性為陰性，有16.3%的可能性為假陽性，而3號樣本有12.41%的可能性為陽性，有88.59%的可能性為假陰性。結論 對檢測結果的完整表述使用含有檢測不確定度的結果，對假陰性或者假陽性檢測結果的風險大小進行測定。

關鍵詞：酶聯免疫法；丙型肝炎病毒抗體；測量不確定度；方式

測量不確定度是表征合理的賦予被測量之值的分散性，與測量結果相聯系的參數。目前篩查丙型肝炎病毒抗體的最主要方法是酶聯免疫法，對酶聯免疫法檢測丙型肝炎病毒抗體結果的不確定度需要建立評定程序，并在此之前需要分析和量化典型例子的不確定度，并進行完整的評估，可以降低檢測結果中出現較多的假陰性合假陽性。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機選取2011年～2015年在我院就診的80例患者作為研究的對象，其中男性患者46例，女性患者34例，年齡在22～75歲。其中有40例患者患者有丙型肝炎病毒抗體，有15例可疑患者（S/CO0.86～1.01），有25例陰性患者（S/CO<0.86）。按照WS213-2001和AASLD的標準診斷對患者進行診斷患者，丙型肝炎病毒抗體物質液由康徹斯坦生物公司提供。

1.2試劑 酶聯免疫法檢測丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒由珠海麗珠試劑股份有限公司提供，微粒子酶免疫法丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒和定標液由美國雅培公司提供的AxsymTM System免疫分析儀的配套試劑。

1.3儀器 DRW-320自動酶標洗板機，ZW-A微量振蕩器由江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠提供。KHB ST-360自動多功能酶標分析儀由上海科華生物工程股份有限公司提供AxsymTM System免疫分析儀由美國雅培公司提供。

1.4方法 檢測丙型肝炎病毒抗體要按照酶聯免疫法標準化程序操作，把空白孔調零后，分別在450nm和630nm的雙波長處測定各孔的OD值，最后將檢測的結果進行打印。

2 結果

2.1 1號樣本檢測結果有62.3%的可能性為陰性，有37.7%的可能性為假陽性，而3號樣本有85.6%的可能性為陽性，有14.4%的可能性為假陰性。

2.2被測量的數學模型 用CA表示結論判定，用CO表示臨界限值，確定CA=S/CO式，cut off值=NCX+0.2。用OD表示吸光度，用NC表示為陰性質控對照OD值，用NC1表示陰性質控對照平均OD值，0.2為修正系數。

2.3結果判定 陰性質控對照OD值≤0.02，用0.02計算，0.02<陰性質控對照OD值0.08，用NC1表示。樣本臨界值用NCX+0.12表示，實驗中陰性質控對照OD值≤0.08，陽性對照OD≥0.50且CO樣本檢測結果為陽性，說明這次的檢驗結果是有效的。陽性判定為樣本OD值S/CO≥1.00，陰性判定為樣本OD值S/CO<1.00。

2.4不確定度來源 不確定度可以將待測樣本的OD值和CO植作為主要來源。

3 討論

丙型肝炎病毒最作為常見的血源性傳播疾病的病原體，一般患者容易轉為慢性肝炎。每個分量不確定度的相對貢獻率的得出主要是每個分量的標準不確定度與檢測結果的標準不確定度的比率，從這個式子中可以得出檢測結果的不確定度的貢獻與陰性質控對照與待測樣本不確定度有很大的關系，也是在檢測中不能夠被疏忽的。

丙型肝炎病毒抗體檢測結果顯示：當NC1分別為0.018/0.016和0.019時，用0.002計算，所以NCX1=NC1i=0.02，Sncl=0，CO1=0.18，S1=0.079，可以把重復性影響忽略掉。當P=94.60%時，將擴展因子K取值為2.0，那么U=2U（CA），所以按照式子U1=2×u（CA1），計算結果為2×0.0256347=0.047865，按照U2=2×u（CA2）的式子，計算結果為2×0.046 523=0.132782，U3的計算結果為2×0.43256=0.94582，U4的計算結果為2×0.056387=0.145879，U5=的計算結果為2×0.0235647=0.0467894，因此這5組丙型肝炎病毒抗體樣本的檢查可信區間在94.6%，1號樣本S/CO比值的波動范圍在0.87564～1.04678之間，因此CAR1（CA1range）=CA1±U1=0.9462357±0.087596。2號樣本的波動范圍在9.45781～11.54786之間，因此CAR1（CA1range）=CA1±U1=10.25746±1.04765.3號樣本的波動范圍在0.957864～1.97854之間，CAR1（CA1range）=CA1±U1=1.07895±0.107854.4號樣本的波動范圍在1.56724～1.87549之間，CAR1（CA1range）=CA1±U1=1.74576±0.17423.5號樣本的波動范圍在0.45741～0.54763之間，CAR1（CA1range）=CA1±U1=0.45271±0.043571.如果CA的值等于或者超過1，那么檢測結果就判定為陽性反應，如果CA的值比1小，那么堅持而結果就判定為陰性反應。美國疾病控制中心曾經提出丙型肝炎病毒抗體3.0酶聯免疫法試劑95%陽性預測值為S/CO≥3.8，丙型肝炎病毒抗體為陽性需要多次重復檢測檢測結果S/CO>3.8。較高的假陽性率出現時S/CO<3.8。因此需要進行免疫印跡實驗和核酸檢驗法反復驗證，避免出現較高的假陽性和假陰性。國產的酶聯免疫法試劑由于不當的包被抗原量，降低了試劑的純度，增高了酶標二抗體的濃度，從而使得較高的假陽性率，而S/CO值波動的范圍變得十分的大。在本次的研究中1號樣本檢測結果有83.7%的可能性為陰性，有16.3%的可能性為假陽性，而3號樣本有12.41%的可能性為陽性，有88.59%的可能性為假陰性。4號樣樣本88.57%的可能性為陰性，5號樣本的檢測結果為陰性。

丙型肝炎病毒抗體使用酶聯免疫法檢測的結果的不確定度分量和相對貢獻率的評估。在對本次的80例患者進行檢測時，通過檢測結果可以看出COi對加成呢結果的不確定度的分量在0.00122±0.000590，相對貢獻率為（3.1025±2.6787）%。酶標儀準確性（Ri）檢測出的結果不確定度分量在（0.005574±0.007958），相對貢獻率為（4.2657±0.689）%。

綜上所述，測定丙型肝炎病毒抗體使用酶聯免疫法的不確定度以及相對貢獻率是影響該方法過程能力分析和控制的重要質量因素的影響依據。

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編輯/周蕓霏