巨細胞病毒感染的檢測及其研究

臨床上常規的巨細胞病毒（cytomegalovirus，CMV）檢測目前多數都是孕早期的TORCH四項或五項篩查，通過酶聯免疫法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）或免疫熒光法（immunofluorescence assay，IFA）檢測血清中的IgG、IgM抗體。人巨細胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）感染可造成孕婦的宮內感染并引起母嬰間的傳播感染，表現為胎兒的流產、畸形、死胎、早產或新生兒的身心缺陷和器官功能的發育異常等，因此，開展巨細胞病毒檢測對于優生尤為重要，但實際檢測效果及臨床意義卻不盡如人意，國內外學者對是否應進行這種篩查或是否應將TORCH項目全部檢測出現了許多不同的觀點，現報道如下。

1 巨細胞病毒現狀

人巨細胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）是皰疹病毒科B亞科的一種，巨細胞病毒含有約235kb，與其他皰疹病毒比較而言是其中最大的一種[1]。人群中HCMV的感染率很高，在歐美等發達國家HCMV的感染率約為60%；而在發展中國家或在社會經濟較低的團體及某些特殊的人群中，HCMV的抗體檢出率約50%～80%[2，3]。HCMV在自然界中廣泛存在，人是它的唯一宿主，正常人群中的自然感染也非常普遍。HCMV一旦感染可在體內長期潛伏。孕期婦女的HMCV感染是引發宮內感染，造成胎兒損害的最常見病原體，HCMV感染可以影響胎兒神經系統的發育，是引發智力遲鈍的重要原因之一，僅次于唐氏綜合征，研究發現先天性耳聾患者中是有一半是巨細胞病毒感染引起的，且原發性感染較繼發性感染，其對胎兒的損害及引發的臨床癥狀更為嚴重。在正常健康人中可引起單核細胞增多癥；也有學者研究發現，巨細胞病毒感染與人群發生高血壓存在相關性[4]。HCMV也是器官移植失敗和艾滋病患者并發感染死亡的主要原因之一。對非免疫缺陷者常導致長期隱性感染，甚至引起感染細胞的轉化、畸變或癌變等。目前對于HCMV感染的實驗室診斷研究主要集中于孕婦的篩查、產前診斷、新生兒的早期診斷、患者免疫狀態評價及器官移植受者感染的檢測等。

2 巨細胞病毒的免疫原性物質

HcMV呈球形，直徑約200nm，由核心DNA、衣殼、被膜和包膜等幾部分組成.基因全長約為240kb，由一個短的單一序列US和一個長的單一序列UL，以及二者之間和兩端的重復序列組成，可編碼200多種蛋白質，包括超過65種糖蛋白，其中至少有10種包膜糖蛋白。

pp65是HCMV被膜蛋白中最主要的一種，主要參與病毒基因調節以及改變宿主細胞的代謝，pp65具有高度的保守性[5]，含有IgM結合表位，對判斷急性感染具有重要的意義。Rolf等的實驗表明pp150的495～691aa片段是確診HCMV既往感染的最適抗原（IgG結合表位），在檢測HCMV原發及急性期感染中起著極其重要的作用。

gB（glycoproteill B，gB）糖蛋白是其中一種，免疫原性最強，與病毒穿入宿主細胞、在細胞間傳播和誘導宿主的免疫應答等密切相關.gB糖蛋白免疫原性強，有多種免疫原性表位，其中包括一些中和抗體結合表位.gB是抗HcMV中和抗體最主要的靶蛋白，40%～70%的自然感染人群血清中和抗體針對gB。AD-1是gB免疫優勢的中和抗體表位，50%的gB中和抗體針對AD-1 gB。AD-2也是gB的中和抗體表位，但免疫原性弱。

gH在病毒膜蛋白中的作用主要是通過與細胞膜上的αγβ3受體結合，該復合物與gB-EGFR共同作用進一步促進病毒囊膜與細胞的融合。gH同樣具有三個中和性抗原表位區段，但這些抗原表位區具有明顯的病毒株特異性。抗原區段A含有三個表位，區段B含有2個表位，區段AB只有一個表位。抗原區段A中的2個表位和區段B中的一個表位具有多變性，而抗原區段A中的另一個表位和區段B中的另一表位及區段AB的表位具有保守性。

gM或gM/gN復合物的中和性作用是最近才研究證實。gN的作用一方面與gM構成復合物在病毒感染過程中產生中和性抗體，另一方面與病毒的復制有關。gM是病毒的第三類膜蛋白，分子量約為42～45kDa，經計算機預測gM蛋白含有7個跨膜區段。在病毒外膜上gM與gN形成異源二聚體而存在。盡管其中和性抗原的性質已經得到確認，但到目前為止有關gM的表位研究還未見報道。

3 HCMV抗體檢測

病毒感染后機體產生體液免疫，特異性IgG、IgM抗體迅速升高，IgG抗體可維持終生，一般在感染后4d產生，IgM抗體，持續6～12w，偶有持續一年之多的報道。目前抗體檢測的方法按所用抗原的不同大致分為3類，即基于病毒裂解物抗原、基因工程重組蛋白抗原及化學合成多肽抗原的檢測方法。

傳統的抗體檢測以病毒裂解物作為抗原，存在的缺點有：①包含許多病毒抗原，抗原表位不確定，難以標準化；②需要在成纖維細胞中進行病毒培養，可導致潛在細胞蛋白的污染，出現假陽性；③與皰疹病毒科其他病毒感染所產生的抗體存在交叉反應，出現假陽性。

重組蛋白及合成肽其敏感性和特異性高，但也存在其局限性。重組蛋白經蛋白純化后，可能會造成部分甚至全部抗原反應性的喪失。合成肽因為片段較短，雖可以同時包含多個抗原表位，但由于肽段的空間結構與天然蛋白的空間結構存在差異性，多表現為線性表位，故可影響檢測效果。合成肽與重組蛋白混合使用，可提高檢出率。

4 HCMV抗體檢測的意義

IgM抗體陽性提示活動性感染。機體感染病毒3個月以后IgM抗體已基本消失，所以只有活動性感染時才可能檢出IgM抗體。

IgM抗體陰性，IgG抗體陽性多提示既往感染。機體一旦感染病毒即會有IgG產生而且會終生保持，所以檢出IgG抗體即表明曾經感染過。

IgG抗體親和指數（AI）判斷區分原發與非原發感染。在原發感染和非原發感染中及其感染的不同階段IgG-AI是變化的，在原發感染中IgG的親和力相比較低，因此母體也更容易將病毒傳染給胎兒，而且孕婦的原發感染對胎兒的影響更為嚴重。

檢測IgG抗體滴度變化指示急性感染。由于急性感染后IgG效價由低升高，所以檢測兩次血清IgG抗體效價，若第二次較第一次的血IgG抗體效價有明顯升高（如4倍）也可作急性感染的診斷指標（兩次采血應有2w左右的間隔時間）。

參考文獻：

[1]劉剛，李書琴，胡恩赑，等.人巨細胞病毒的定量檢驗和臨床意義[J].現代生物醫學進展，2012，12（33）：6597-6600.

[2]張健，李雪麗.無償獻血者巨細胞病毒感染標志物的檢測[J].中國輸血雜志，2002，15（3）：187.

[3]呂靜娟，胡文勝，余堅.溫州市區育齡婦女孕前巨細胞病毒感染現狀調查[J].中國優生與遺傳雜志，2011，19（2）：100-101.

[4]馬晨蕓，王克翔.巨細胞病毒對人群發生高血壓的影響[J].海南醫學，2015，26（12）：1786-1788.

[5]邱玉紅.人巨細胞病毒PP65的基礎及應用研究[J].國外醫學婦保健分冊，2003，14（2）：92.

編輯/趙恒德