左卡尼汀對(duì)密度梯度離心法處理逆行射精患者尿液內(nèi)精子的效果研究

摘要：目的 研究分析密度梯度離心法處理逆行射精患者尿液內(nèi)精子用于人工授精的臨床效果。方法 選取2011年1月～2013年5月到我院接受不育就診的男性患者8例，經(jīng)患者同意后，將其隨機(jī)分成觀察組（4例）和對(duì)照組（4例），給予對(duì)照組采用密度梯度離心法對(duì)患者尿液內(nèi)精子進(jìn)行處理，觀察組則在離心前加入適當(dāng)濃度的左卡尼汀溶液，對(duì)比兩組梯度離心后提取精子的活動(dòng)參數(shù)。結(jié)果 觀察組4例患者采用左卡尼汀溶液孵育的精子經(jīng)密度梯度離心法處理后，無(wú)論是精子密度、精子活力還是精子存活率方面均優(yōu)于對(duì)照組（4例），組間對(duì)比差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 將左卡尼汀應(yīng)用于密度梯度離心法處理患者尿液中的精子，可有效提高精子密度、精子活力、和精子的存活率，且方法簡(jiǎn)單、快捷。

關(guān)鍵詞：密度梯度離心法；逆行射精；左卡尼汀

為研究分析左卡尼汀對(duì)密度梯度離心法處理逆行射精患者尿液內(nèi)精子的臨床效果，現(xiàn)選取到我院接受不育就診的男性患者8例作為研究對(duì)象進(jìn)行研究，具體研究情況報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2011年1月～2013年5月到我院接受不育就診的男性患者8例，經(jīng)體檢和彩色多普勒超聲檢查均符合逆行射精的診斷標(biāo)準(zhǔn)，除此之外無(wú)其它異常發(fā)現(xiàn)。這8例患者的年齡均在24～30歲，出現(xiàn)婚后不育的年限均在2.5～8年。經(jīng)了解分析，8例患者中有6例屬于原發(fā)性逆行射精（均無(wú)外傷、手術(shù)史，也從未服用過(guò)抗高血壓、抗精神病等類型藥物史）；2例屬于繼發(fā)性逆行射精（患者曾經(jīng)生育過(guò)嬰兒，后由于腰部損傷而造成造成性交后無(wú)法將精液射出）。8例患者出現(xiàn)不育后均有過(guò)在其它醫(yī)院依照遺囑服用丙咪嗪、左旋多巴、鹽酸麻黃素以及中草藥等，但均未取得明顯的治療效果。經(jīng)患者同意后，將其隨機(jī)分成觀察組（4例）和對(duì)照組（4例）。對(duì)兩組患者年齡、逆行射精類型相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2方法

1.2.1對(duì)照組 ①試劑準(zhǔn)備。將3ml Q-HTF精子洗液加入到一個(gè)一次性的圓底試管中，并將其平衡放置在培養(yǎng)箱中（37℃、CO2濃度為5%）；利用受精液和G-IVFTM-plus精子稀釋和處理濃度為90%和45%的SpermGradTM-30精子梯度液，并在進(jìn)行人工受精的當(dāng)天，利用經(jīng)過(guò)消毒的巴士德吸管將1ml且濃度為45%的SpermGradTM-30精子梯度液取出，然后將其放入到一個(gè)經(jīng)過(guò)消毒的一次性尖底離心試管中，再同樣的方法將1ml且濃度為90%的SpermGradTM-30精子梯度液慢慢置于濃度為45%的SpermGradTM-30精子梯度液的下層中，最后將其平衡放置在培養(yǎng)箱中（37℃、CO2濃度為5%）備用[1]。②患者準(zhǔn)備。在進(jìn)行人工受精前，叮囑患者禁煙酒以及辛辣等刺激性食物，注意采取高熱等疾病的預(yù)防措施，避免患上此類疾病，禁欲5～7d，在取精前3d為堿化尿液，開(kāi)始服用小蘇打，1g/次，1次/d，同時(shí)以低蛋白食物為主進(jìn)食。在取精當(dāng)天，要求患者一次性口服3g小蘇打，并要多喝水，服用小蘇打1h后用精密pH試紙條檢測(cè)患者尿液的酸堿度，檢測(cè)1次/30min，直到檢測(cè)出來(lái)的尿液呈堿性為止，在必要時(shí)可讓患者增加小蘇打的服用量[2]。囑咐患者將小便排干凈，并用手淫的方式提取精液，當(dāng)出現(xiàn)性高潮但又無(wú)法將精液射出時(shí)，立即使用經(jīng)過(guò)消毒的一次性杯子，將小便排入其中。③收集精子。根據(jù)取精杯內(nèi)尿液量的多少將其適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)入到1～2個(gè)經(jīng)過(guò)消毒的尖底離心試管中，并采用離心法收集沉淀物，其中離心的轉(zhuǎn)速為1000r/min。將收集到的沉淀物加入到經(jīng)培養(yǎng)箱（37℃、CO2濃度為5%）平衡過(guò)的Q-HTF精子洗液中，混合均勻后將其置于鏡下觀察，詳細(xì)記錄精子的密度、活力和存活率等主要的參數(shù)，然后再將其轉(zhuǎn)移到濃度為45%和濃度為45%的SpermGradTM-30精子梯度離心液的上層中，再一次利用離心法（轉(zhuǎn)速1500r/min）將上層清液過(guò)濾掉，留下沉淀物，將數(shù)滴Q-HTF精子洗液加入到沉淀物中，并混合均勻，使體積保持在0.3～0.5ml，最后再將其置于鏡下觀察，詳細(xì)記錄上述精子參數(shù)。

1.2.2觀察組 觀察組參照對(duì)照組進(jìn)行試劑準(zhǔn)備、患者準(zhǔn)備和精子收集，但在收集精子時(shí)，在離心前加入50μl濃度為8mmol/L的左卡尼汀溶液。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本組研究數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析處理，以t檢驗(yàn)組間數(shù)據(jù)對(duì)比，通過(guò)（%）代表計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)，通過(guò)χ2檢驗(yàn)組間對(duì)比，若P<0.05，則表示組間數(shù)據(jù)對(duì)比差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組4例患者采用左卡尼汀孵育精子經(jīng)密度梯度離心法處理后，無(wú)論是精子密度、精子活力還是精子存活率方面均優(yōu)于在離心前未加入左卡尼汀溶液的對(duì)照組（4例），組間對(duì)比差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。兩組患者精子的主要參數(shù)變化情況如表1所示。

3 討論

導(dǎo)致逆行射精因素很多，治療的方法也多種多樣，逆行射精患者尋求治療的目的主要是解決生育問(wèn)題[3]。曾經(jīng)有學(xué)者采用膀胱沖洗的辦法，希望通過(guò)改變膀胱內(nèi)精子的生長(zhǎng)環(huán)境來(lái)提高精子的質(zhì)量，以此解決逆行射精患者生育問(wèn)題，但是由于操作比較復(fù)雜，且屬于侵入性的操作，與本文探討的密度梯度離心法相比，劣勢(shì)更為突出，因此，不推薦使用膀胱沖洗的辦法來(lái)解決逆行射精患者生育問(wèn)題[4]。

通過(guò)以往研究發(fā)現(xiàn)，將密度梯度離心法應(yīng)用于處理患者尿液中的精子，方法更為有效，且簡(jiǎn)單快捷。人工受精是否成功，在排除了患者配偶因素外，與逆行射精患者尿液中精子的密度、活力和存活率等參數(shù)有很大的關(guān)系。但離心處理也會(huì)誘發(fā)產(chǎn)生過(guò)量的活性氧，用抗氧化劑對(duì)抗活性氧是避免精子受氧化應(yīng)激損傷的最基本思路。近年來(lái)的研究證明，左卡尼汀在男性生殖中具有多種重要作用，如啟動(dòng)精子運(yùn)動(dòng)、促進(jìn)精子成熟和提高精子受精能力，調(diào)節(jié)Sertoli細(xì)胞功能，保護(hù)精子對(duì)抗活性氧（ROS）誘導(dǎo)的氧化損傷，減少生精細(xì)胞凋亡，抑制精子聚集等作用[5]。其既可通過(guò)對(duì)Krebs循環(huán)的作用恢復(fù)ROS的生理性濃度，也可通過(guò)其抗氧化特性而對(duì)抗ROS的以達(dá)到對(duì)精子的保護(hù)作用。因此，左卡尼汀是一種對(duì)精子有多種益處的溫和的生物抗氧化劑，對(duì)減輕離心過(guò)程中精子所受的氧化應(yīng)激損傷具有積極意義。本研究將觀察組患者精子的主要參數(shù)和對(duì)照組患者精子的主要參數(shù)相比，發(fā)現(xiàn)觀察組患者尿液中的精子無(wú)論是在密度、活力還是存活率方面都明顯優(yōu)于對(duì)照組。因此，將左卡尼汀用于密度梯度離心法處理患者尿液中的精子，可有效提高精子密度、精子活力、和精子的存活率，且方法方法簡(jiǎn)單、快捷。

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編輯/王敏