微囊栓制劑降低尼美舒利豚鼠肝毒性的實驗研究

曲宏烜，陳新梅，徐溢明，趙 元，孫笑蕾

(1.山東中醫藥大學藥學院，山東 濟南 250355;2.山東大學醫學院，山東 濟南 250000;3.山東中醫藥大學實驗中心，山東 濟南 250355)

尼美舒利(nimesulide，NIM)是一種新型的非甾體抗炎藥，其解熱鎮痛抗炎作用顯著，臨床應用比較廣泛。但近年來，其肝損傷不良反應多有報道，具體表現為肝功能異常，天冬氨酸氨基轉移酶(Aspartate transaminase，AST)、丙氨酸氨基轉移酶(Alanine aminotransferase，ALT)含量增高等。為保障用藥安全，故限制了其使用［1，2］。為降低尼美舒利的肝毒性，本課題組將其制成微囊栓。微囊栓具有栓劑和微囊的雙重優勢［3］，與普通栓相比，具有緩釋、降低毒副作用的特點，且具有血藥濃度穩定，維持時間長等優點［4］。本實驗考察了尼美舒利微囊栓對豚鼠肝臟的影響，以期提高NIM臨床用藥的安全性。

1 材料

1.1 儀器 UV－3010紫外分光光度計(日本島津);FA1004N電子天平(上海精密科學儀器有限公司);XSP－2C光學顯微鏡(上海長方光學儀器有限公司);予華SHZ－D(Ⅲ)循環水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司)。

1.2 試藥 ALT試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號:C009－1141103);AST試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號:C010－1141103);尼美舒利原料藥(武漢大華偉業醫藥有限公司，批號:XH201301248002，純度 99%)。

1.3 動物 SPF級豚鼠，355 g左右，由山東魯抗醫藥股份有限公司提供，許可證號:SCXK(魯)2013－0001。

2 方法與結果

2.1 藥物制備 NIM普通栓、NIM微囊栓均由本實驗室制成。每0.5 g栓劑約含 NIM原料藥3.3 mg。

2.2 動物分組 試驗動物隨機分成NIM普通栓組、NIM微囊栓組。飼養于20℃，相對濕度為60%的環境下適應一周，自由進食和飲水。試驗前，禁食1 d，可自由飲水。1天后開始試驗。

2.3 試驗數據的測定 豚鼠每天直腸給藥2次，早晚各1次，每次0.5 g。期間，自由進食和飲水，每天記錄豚鼠的食量和水量。每隔2 d測定豚鼠的體重。給藥15天后，采用空氣栓塞法處死豚鼠。解剖后取肝臟稱重，計算肝指數(肝指數=肝臟重量/豚鼠體重);每組取相同質量相同部位的肝組織，制備肝組織勻漿，來測定肝組織勻漿液中AST、ALT的含量，剩余肝臟留作病理切片［5，6］。試驗數據用統計學軟件SPSS 19.0進行分析，P＜0.05為具有統計學差異，結果見表1、2。

表1 豚鼠每日平均食量、水量及試驗前后體重差值

表2 豚鼠肝指數以及肝組織勻漿液中ALT、AST含量

由表1可知:兩組豚鼠攝食量沒有顯著差異，即是否用藥對豚鼠的飲食沒有影響。雖然NIM普通栓組的每天飲水量明顯偏大，但根據統計學分析，發現兩組豚鼠的飲水量沒有顯著性差異。對于體重，NIM普通栓組為負值，NIM微囊栓組為正值，即NIM普通栓組與NIM微囊栓組有顯著差異。

由表2可以看出，兩組豚鼠的肝指數沒有顯著差異。而對肝組織勻漿液中ALT、AST含量，兩組數據具有顯著性差異。NIM微囊栓組明顯低于NIM普通栓組，即NIM微囊栓與NIM普通栓相比，能減弱肝臟中ALT、AST含量。

2.4 肝臟病理切片 將豚鼠肝臟病理切片，并HE染色，顯微鏡下觀測病理結構，結果見圖1。NIM普通栓組肝索、肝竇結構清晰，且基本完整，肝細胞基本正常，個別細胞發生氣球樣變。NIM微囊栓組肝索、肝竇結構清晰，且大都完整，肝細胞大多正常。NIM普通栓組與NIM微囊栓組有顯著差異。

圖1 各組豚鼠肝臟病理切片圖(HE，×100)

3 討論

本試驗的試驗動物選擇為豚鼠，是綜合豚鼠肛門大小及飼養難易程度的考慮。實驗室常用的動物有小鼠、大鼠、豚鼠、家兔等。重0.5 g栓劑的直徑，在豚鼠肛門直徑大小的承受范圍內，且豚鼠比其它試驗動物溫順，便于飼養和給藥。

本試驗結果表明，NIM微囊栓組豚鼠與NIM普通栓組豚鼠相比，其肝組織勻漿液中AST、ALT含量明顯偏低，且通過觀察豚鼠的肝組織病理切片，可以看出NIM微囊栓組的肝細胞病變偏輕。綜上，進一步表明微囊栓與普通栓相比能夠降低NIM的肝毒性。

微囊栓降低肝臟毒性的機理，可以從兩方面來看。一方面是栓劑，栓劑能夠避免肝臟的首過效應［7］，減少藥物的代謝失活。另一方面是微囊，微囊是一種人工半透膜，采用緩釋、控釋微囊化材料將藥物制成微囊后，藥劑等小分子物質可控地從囊內持久緩慢釋放，并擴散到體內起長期治療的目的［8］。同時，可以使藥物濃度集中于靶區，降低毒副作用［9］。故把原料藥做成微囊栓能夠降低對肝臟的毒性。

本試驗中，通過各組豚鼠肝組織勻漿液的數值大小來判定它們的肝臟受損情況大小。肝組織勻漿液中ALT、AST含量雖說可以表明結果，但血液中AST、ALT卻是目前最常用的反應肝損傷的生化指標。具體血液中AST、ALT含量，今后還有待試驗驗證。之前有試驗驗證普通栓與微囊栓的體外釋放情況［10］。結果顯示，微囊栓和普通栓相比，具有較好的體外緩釋效果。也有試驗通過測定NIM栓劑血藥濃度，得出以市售NIM普通片為參比制劑，NIM直腸栓的相對生物利用度為84.75%的結論［11］。NIM栓劑和微囊栓的體內釋放情況，還有待試驗進一步深入驗證。

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