高效液相色譜法測(cè)定清熱止瀉片中黃芩苷含量

李玉英，彭海英

（1.廣東省河源市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 河源 517000； 2.廣東醫(yī)學(xué)院，廣東 東莞 523808）

清熱止瀉片由葛根、黃芩、甘草（炙）、魚(yú)腥草、山芝麻、黃連6味中藥組方，具有解肌清熱、止瀉止痢的作用，適用于泄瀉痢疾、身熱煩渴、下身臭穢等癥，其現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有定性檢查而無(wú)定量檢測(cè)［廣東省食品藥品監(jiān)督管理局《醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)》（粵ZB2011097）］。為更好地控制和保證清熱止瀉片的質(zhì)量，根據(jù)處方中黃芩含黃芩苷及其在280 nm波長(zhǎng)處有吸收峰［1］，筆者建立了測(cè)定清熱止瀉片中黃芩苷含量的反相高效液相色譜法，用于控制產(chǎn)品質(zhì)量。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

CP225D型電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）；安捷倫1200型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）；KQ-250D型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。清熱止瀉片（河源市中醫(yī)院，批號(hào)分別為130501，130601，131001）；黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110715-201117）；甲醇（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）為分析純；甲醇、磷酸（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)，均為色譜純），水（自制）為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse plus C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇 -水 - 磷酸（45 ∶55 ∶0.2）；流速：1 mL ／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。

2.2 溶液制備

取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含25 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取本品20片，除去包衣，精密稱(chēng)定，研細(xì)，取約6片，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2 mL，置20 mL量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方比例和工藝，同法制成缺黃芩的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性對(duì)照試驗(yàn)：分別精密吸取2.2項(xiàng)下3種溶液各20 μL，注入液相色譜儀測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置處無(wú)干擾峰出現(xiàn)，說(shuō)明處方中其他成分對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響。色譜圖見(jiàn)圖1。

線(xiàn)性關(guān)系考察：取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL約含0.5 mg的對(duì)照品貯備液，精密吸取上述貯備液，分別稀釋成每 1 mL 含黃芩苷 7.5，15，30，60，90，120 μg 的溶液，即得對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸。得回歸方程 Y＝3 087.2 X+25.652，r＝0.999 9（n ＝6）。結(jié)果表明，黃芩苷進(jìn)樣量在 0.077 ～1.220 μg范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

回收率試驗(yàn)：取批號(hào)為130601的樣品60片，研細(xì)，取約2，3，6片，各3份共9份，精密稱(chēng)定，分置具塞錐形瓶中，分別加入等量的黃芩苷對(duì)照品，按2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備所需溶液，按色譜條件測(cè)定黃芩苷的峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.5%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取批號(hào)為131001的樣品50片，研細(xì)，取約6片，精密稱(chēng)定6份，分別置具塞錐形瓶中，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定黃芩苷的峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果每片平均含量為 0.80 mg，RSD 為 1.0%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，10，12，16 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的 RSD為1.5%（n＝8），表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 樣品含量測(cè)定

按擬訂方法，測(cè)定3批樣品，結(jié)果3批樣品中黃芩苷的含量為每片 0.77，0.81，0.80 mg，平均 0.79 mg。

3 討論

清熱止瀉片是療效確切的醫(yī)院制劑，但其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一直只有簡(jiǎn)單的鑒別和檢查項(xiàng)目，缺乏所含中藥成分的定量方法。本研究所建立的測(cè)定清熱止瀉片中黃芩苷含量的高效液相色譜法，方法操作簡(jiǎn)單易行，具有準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性好、回收率高等優(yōu)點(diǎn)，是清熱止瀉片質(zhì)量控制的有效方法。

參考文獻(xiàn)：

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：282-283.