桃紅四物湯促進早期閉合性骨折大鼠愈合作用研究

李秀秀，李墨華，張 舸，金福厚

(黑龍江省齊齊哈爾市中醫醫院，黑龍江 齊齊哈爾 161000)

桃紅四物湯促進早期閉合性骨折大鼠愈合作用研究

李秀秀，李墨華，張 舸，金福厚△

(黑龍江省齊齊哈爾市中醫醫院，黑龍江 齊齊哈爾 161000)

目的 探討桃紅四物湯對早期閉合性骨折大鼠愈合的促進作用。方法 60只大鼠隨機分為正常組，骨折對照組和桃紅四物湯骨折治療組。取后2組制成早期閉合性骨折大鼠模型。骨折后第10天對血液流動性和VEGF濃度進行檢測，并作統計學分析。結果 與正常組比較，骨折對照組全血黏度、血漿黏度均明顯增高(P<0.05)；與骨折對照組比較，桃紅四物湯骨折治療組的全血粘度、血漿黏度均明顯減少(P<0.01)。骨折對照組與正常組比較，VEGF濃度在統計學上無顯著性差異(P>0.05)；與骨折對照組和正常組比較，桃紅四物湯骨折治療組VEGF濃度顯著增高(P<0.01)。結論 桃紅四物湯促進大鼠骨折早期愈合的作用途徑與改善早期骨折血液流動性和調節骨折早期VEGF濃度相關。

桃紅四物湯；骨折愈合；實驗研究

桃紅四物湯首見于《醫宗金鑒》，是活血化瘀作用的經典方劑之一，具有補血活血，止痛消腫，化瘀生新之功效，廣泛應用于骨折的治療。臨床研究證實，桃紅四物湯可以通過調節骨折早期炎性指標IL-1、IL-6和TNF-水平[1]，和改善骨折早期血液流動性[2]等，對骨折愈合起到良好的促進作用。本文采用實驗性大鼠早期閉合性骨折模型，探討桃紅四物湯促進骨折愈合的作用機制。

1 材料

1.1 動物 60只SD大鼠，體重260 g～300 g，雌雄各半，由黑龍江中醫藥大學動物實驗中心提供。

1.2 藥物及試劑桃紅四物湯煎劑(藥物由齊齊哈爾中醫院制劑室提供) 其組成為熟地黃12 g，白芍9 g，紅花6 g，桃仁9 g，川芎6 g，當歸9 g。以上藥物經加水侵泡、常規煎煮、過濾以及蒸發，濃縮配置成生藥含量1.0 gmL-1的水煎液備用。大鼠血管內皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒(上海凱博生化試劑有限公司批號：20130510)。生理鹽水(四川科倫大藥廠有限公司，批號：E030520)。

1.3 儀器 LBY-N7500A 全自動血液流變儀(北京普利生儀器有限公司)、RAC-120全自動血凝儀(上海天成科技有限公司)、熒光分光光度計(北京聯合科儀科技有限公司)。

2 方法

2.1 實驗動物模型制作 動物實驗前均在實驗室正常飼養7天。用張連方等的造模方法[3]，使用濃度為3.5%的水合氯醛，按體重10 Lg-1進行麻醉，利用三點受力原理，采用骨折器造成脛骨閉合性骨折。拍X射線片檢驗造模是否成功，術后3d肌肉注射青霉素40萬單位預防感染，每天1次。

2.2 分組與給藥 將大鼠隨機分成3組：正常組，骨折對照組和桃紅四物湯骨折治療組。每組20只。桃紅四物湯組灌胃量：6mlkg-1，正常組和骨折對照組均灌以等容量生理鹽水。每天給藥和生理鹽水均為1次，連續給藥10天。

2.3 指標檢測

2.3.1 對骨折大鼠血液流動性的影響 最后1次給藥1 h后，按前述用法用量，使用水合氯醛腹腔注射麻醉。在腹主動脈取血6 mL，放入肝素抗凝管中，做大鼠全血粘度和血漿粘度檢測。并計算全血黏度/低切(10 s-1)、高切(120 s-1)和血漿粘度含量。

2.3.2 對骨折大鼠血管內皮細胞的生長因子(VEGF)的影響 最后一次給藥1 h后，按前述用法用量，使用水合氯醛腹腔注射麻醉。在腹主動脈取血3 mL，放入一次性試管中，血液離心(3500轉/分)15 min，取上清液存放于冰箱(-20℃)中。嚴格按照大鼠血管內皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒說明書進行操作，檢測各組大鼠血清VEGF濃度。

3 結果

3.1 對骨折大鼠血液流動性的影響與正常組比較，骨折對照組全血黏度、血漿黏度均明顯增高(P<0.05)；與骨折對照組比較，桃紅四物湯骨折治療組的全血粘度、血漿黏度均明顯減少(P<0.01)。結果表明，桃紅四物湯能夠顯著降低大鼠骨折后的血液粘度。見表1。

3.2 對骨折大鼠血管內皮細胞的生長因子(VEGF)的影響骨折對照組與正常組比較，VEGF濃度在統計學上無顯著性差異(P>0.05)；與骨折對照組和正常組比較，桃紅四物湯骨折治療組VEGF濃度顯著增高(P<0.01)。說明桃紅四物湯具有提高骨折大鼠體內VEGF濃度的作用。見表2。

表1 桃紅四物湯對早期閉合性骨折大鼠血液流動性的影響±s，n=20)

注：與正常組比較，*P<0.05，與骨折對照組比較，**P<0.05

表2 桃紅四物湯對骨折大鼠血管內皮細胞的生長因子(VEGF)的影響

注：與正常組比較，*P>0.05，與骨折對照組比較，**P<0.01

4 討論

《圣濟總錄·傷折門》云：“脈者，血之府，血行脈中……若因傷折，內動經絡，血行之道不得宣通，瘀積不散，則為腫為痛，治宜除去惡瘀”?！动冡t大全》曰：“有跌傷骨折，宜活血化瘀為先，血不活則瘀不去，瘀不去則骨不能接也”?？梢妭鹘y中醫理論，對活血化瘀法在骨折早期治療中的重視。桃紅四物湯方中，桃仁、紅花為君，活血化瘀力強；再加上四物湯養血和血，去瘀血，生新血，消腫止痛，切合病機，促進骨折愈合。

VEGF是一種特異性作用于血管內皮細胞的生長因子。文獻報道顯示[4]，VEGF能夠促進骨折早期斷端骨痂新生微血管的增生，特異性增加骨折局部的血流量，增進成骨細胞與軟骨內骨化之間的相互作用，誘導成骨，加快骨折愈合過程。從本實驗結果中可以看出，桃紅四物湯能夠明顯增加骨折大鼠VEGF濃度，從而對早期骨折的愈合產生促進作用。

血液流變學指標是血液循環系統內環境的反映。其中，全血黏度是反映血液流變學基本特征的參數，也是反映血液黏滯程度的重要指標。全血黏度有高切變和低切變兩種黏度：高切變黏度反映紅細胞的變形能力，變形能力低，血液黏度便高；低切變黏度則反映紅細胞的聚集能力，紅細胞相互聚集，血液黏度升高。血漿黏度是血液黏滯性和濃稠性的反映，血漿黏度是影響全血黏度的重要因素之一。任映等的研究顯示[5]，骨折后骨膜微血管損傷、骨內血液系統破壞等因素，引起血液黏度增加，以早期更為明顯。而骨折的愈合需要良好的微循環和充足的血運[6]。從實驗結果看出，桃紅四物湯降低了血液黏度，使血液流動性增加，從而改善了骨折部位血供，促進早期骨折的愈合。

實驗結果表明，桃紅四物湯具有促進早期骨折愈合的作用，其作用途徑與改善早期骨折血液流動性和調節骨折早期VEGF濃度相關。

[1]劉善明.桃紅四物湯對下肢脛腓骨骨折早期炎性指標水平影響分析[J].四川中醫，2014，32(8)：78-80.

[2]王威，廖蘇平，危蕾.桃紅四物湯對上肢閉合性骨折早期血液流變學和炎癥因子水平的影響[J].中藥材，2014，37(2)：361-362.

[3]張連方，齊進，王晉申，等.小鼠閉合性股骨骨折模型的建立與評估[J].中國矯形外科雜志，2010，18(2)：143-146.

[4]鐘剛，裴福興，樊瑜波.血管內皮生長因子基因轉染促進骨折愈合的實驗研究[J].中國矯形外科雜志，2004，12(8)：604-606.

[5]任映，王琨，朱志慧，等.大分子葡萄糖酐血瘀大鼠偶氮藍體表特征與血液流變性的相關性[J].中國實驗方劑學雜志，2010，16(8)：105.

[6]趙志強，王體沛，王俊芳.丹參與川芎嗪對家兔骨折后血液流變學的影響[J].中華中醫學雜志，2005，29(5)：374-375.

李秀秀(1974-)，女，齊齊哈爾，研究方向：中藥方劑。

R285.5

A

1007-2349(2015)08-0066-02

2015-06-01)

△通信作者：金福厚，Tel：15845207022。