風濕性心臟病患者外周血細胞因子和Treg細胞檢測的意義

華 杰

（應城市人民醫院檢驗科，湖北孝感432400）

風濕性心臟病患者外周血細胞因子和Treg細胞檢測的意義

華 杰

（應城市人民醫院檢驗科，湖北孝感432400）

風濕性心臟病（rheumatic heart disease，RHD）為一種自身免疫性疾病，由A組乙型溶血性鏈球菌感染導致風濕熱后遺癥，主要病理基礎為受累心臟瓣膜發生彌漫性纖維化，瓣口狹窄，或關閉不全，引發心臟血流動力學紊亂，占心臟外科疾病約30%［1］。RHD患者體內存在有對心肌、心內外膜、血管平滑肌起反應的抗體，發生鏈球菌感染時可激發機體發生自身免疫反應，出現相應病變。RHD患者免疫功能顯著低于正常人［2］。鏈球菌M蛋白為一種超抗原，可大量激活機體內T細胞、自身反應性T細胞，誘發RHD［3］。筆者回顧性分析32例RHD患者的臨床資料，以探討IL－10、TGF－β1等外周血細胞因子的血清濃度與CD4＋、CD25＋、Foxp3＋Treg水平在RHD發生發展中的意義，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年2月－2013年10月我院診治的RHD患者32例，男18例，女14例，年齡39－69歲，平均年齡（45.2±6.3）歲。所有患者均經過超聲心動圖與瓣膜術后病檢確診RHD，紐約心臟病學會心功能分級為Ⅱ－Ⅳ級，排除合并肝腎功能不全、冠心病、急慢性感染、惡性腫瘤、甲狀腺功能亢進、糖尿病、近期使用免疫調節制劑、近期有風濕活動及其他自身免疫性疾病患者。合并單純二尖瓣狹窄患者13例，二尖瓣狹窄并關閉不全患者15例，二尖瓣及主動脈瓣狹窄并關閉不全患者4例。選擇同期健康查體人員32例為對照組，兩組患者在年齡、性別、生活環境等方面比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法 選擇美國BioLegend公司生產的Foxp3－APC單克隆抗體、熒光抗體鼠抗人CD4－FITC、CD25－PE，選擇美國R＆D公司生產的IL－10、TGF－β1的ELISA試劑盒。抽靜脈血10ml，經肝素抗凝。5ml離心后取血清，采用ELISA法檢測IL－10、TGF－β1；5ml用淋巴細胞分離液分離單個核細胞（PBMC），計數細胞后，將細胞濃度調整至1×106／ml。取細胞懸液100μl，加入20μl CD4－FITC、CD25－PE抗體，室溫避光反應20min，離心棄上清，加入固定破膜液1ml，室溫孵育20min，加入20μl Foxp3－APC抗體，避光反應30min，染色緩沖液洗滌離心，流式細胞儀檢測，以CD4設門分析CD4＋CD25＋Foxp3＋細胞亞群，每份計數為104個細胞，以CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細胞占CD4＋T淋病細胞比例表示結果。

1.3 統計學方法 使用SPSS13.0統計軟件，計量資料采用均數±標準差（x—±s）表示，兩樣本均數比較采用t檢驗，以P＜0.05具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者IL－10、TGF－β1濃度比較 經上述檢測分析，觀察組IL－10及TGF－β1濃度均顯著低于對照組（P＜0.01）。詳見表1。

IL－10觀察組組別n TGF－β1 32 25.6±4.5 7.3±2.9對照組32 32.6±4.4 13.2±2.6 T 6.29 8.56 P 0.000.00

2.2 兩組患者Treg細胞比較 經上述檢測及對比分析，觀察組CD4＋CD25＋細胞／淋巴細胞比值及CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg／CD4＋T細胞比值均顯著高于對照組（P＜0.01）。詳見表2。

表2 兩組患者Treg細胞比較

表2 兩組患者Treg細胞比較

細胞觀察組32例組別例數CD4＋CD25＋細胞／淋巴細胞CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg／CD4＋T 5.8±0.6 2.9±0.3對照組32例2.7±0.8 1.4±0.3 T 17.53 20.00 P 0.0000.000

3 討論

風濕性心臟病為一種自身免疫性疾病導致的結果，與多種細胞因子共同作用有關。IL－10是一種抗炎因子，由多種細胞分泌，具有抑制多種炎癥因子與自身抗體合成的作用［4］。本研究中觀察組IL－10顯著低于對照組（P＜0.05）。提示當心臟的瓣膜出現自身免疫炎癥時，因機體內抗炎因子IL－10含量降低使炎性因子持續存在，瓣膜局部長期受炎性因子的侵蝕出現病變，形成心臟瓣膜病。TGF－β主要有TGF－β1、TGF－β2、TGF－β3三種類型。各種淋巴細胞、樹突狀細胞、單核細胞及血小板可分泌合成TGF－β1，有研究發現RHD伴心衰患者心肌中TGF－β1表達顯著增強，與左室大小密切相關［5］。在離體受損瓣膜中內皮基質細胞、浸潤的成纖維細胞、巨噬細胞中均發現有TGF－β增加，對纖維化、鈣化、膠原沉積具有促進作用［6］。本研究表明觀察組患者體內TGF－β1顯著低于對照組（P＜0.01）。提示RHD與血清中TGF－β1含量關系不大，但心臟瓣膜炎癥時，因局部淋巴細胞浸潤，TGF－β1表達增加的淋巴細胞可通過局部旁分泌TGF－β1，到達局部心肌、瓣膜組織中，因此僅表現為局部TGF－β1升高導致瓣膜發生病變。

Treg細胞對自身免疫性疾病的發生具有抑制作用，當CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細胞減少時，機體的細胞免疫功能低下，體液免疫功能增強，此時B細胞被活化，機體產生大量抗體出現自身損害，即發生自身免疫性疾?。?］。同時因致病因子的不斷擴散、長期持續存在，使疾病不斷反復發作［8］。有研究證實［9］類風濕性關節炎、系統性硬化癥、系統性紅斑狼瘡、白塞病、原發性干燥綜合征等風濕性疾病患者體內Treg細胞比例均比健康人低［10］。本研究中進一步證實了RHD患者體內Treg細胞顯著低于健康人（P＜0.05）。提示機體更易發生自身免疫性疾病，RHD患者病程較長，且易反復，可能與Treg細胞減少與致病因子擴散且長期存在有關。患者心臟瓣膜受自身抗體的長期攻擊，持續的免疫炎性反應使瓣膜增厚、攣縮，最終出現心臟瓣膜性疾病［11］。TGF－β可刺激T細胞產生大量Treg，TGF－β1降低［12］，T細胞產生Treg細胞減少，RHD患者體內CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg也相應減少。同時Treg細胞主要通過分泌IL－10、TGF－β1發揮免疫調節作用，RHD患者體內CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細胞減少，同時血清中IL－10、TGF－β1濃度也相應減低。說明RHD患者免疫異常與IL－10、TGF－β1的降低及Treg細胞的減少均有關。

綜上所述，IL－10、TGF－β1等外周血細胞因子血清濃度及CD4＋、CD25＋、Foxp3＋Treg等調節性T細胞的檢測能夠反映RHD患者的免疫功能，對于患者病情的評估及預后的評價均具有重要意義。

［1］范文茂，徐新，袁書國，等.MicroRNA－223及MMP－9在風濕性心瓣膜病合并心房顫動患者中的表達及臨床意義［J］.嶺南心血管病雜志，2014，20（2）：158.

［2］劉文洲，周華富，孫 宇，等.超級化激活環核苷酸調控通道基因家族－2在風濕性心臟病二尖瓣狹窄伴心房顫動患者右心耳組織中的表達［J］.中華實驗外科雜志，2014，31（03）：649.

［3］張加強，張 衛.右美托咪定對風濕性心臟病合并肺高壓患者行瓣膜置換術時血流動力學的影響［J］.中國醫院藥學雜志，2014，34（06）：469.

［4］韓榮霞，蔡 霞，唐勝建.病毒IL－10的研究進展［J］.國際免疫學雜志，2008，31（3）：226.

［5］羅又橋，方海寧，譚 偉，等.風濕性心臟病二尖瓣置換術后三尖瓣返流的再手術治療［J］.中國綜合臨床，2014，30（01）：82.

［6］Moura LM，Rocha－Gon?alves F，Zamorano JL，et al.New cardiovascular biomarkers：clinical implications in patients with valvular heart disease［J］.Expert Rev Cardiovasc Ther，2008，6（7）：945.

［7］鄭紅霞，于健寧，陶筱娟，等.原發性干燥綜合征患者外周血CD4＋CD25＋high調節性T細胞的表達及意義［J］.浙江實用醫學，2010，2（3）：15：3.

［8］趙 元，周新民，廖曉波，等，風濕性心臟病患者致心力衰竭心肌組織中IL－10、TGF－β1和NF－kB／p65的表達及意義［J］.心肺血管病雜志，2009，2（5）：332.

［9］劉 健，萬 磊，馮云霞，等.四種風濕病患者血小板參數變化及外周血BTLA、Treg觀察［J］.中國免疫學雜志，2014，30（4）：508.

［10］Hammad AM，Youssef HM，El－Arman MM.Transforming growth factor beta 1in children with systemic lupus erythematosus：apossible relation with clinical presentation of lupus nephritis.Lupus，2006，15（9）：608.

［11］莫 莉，許禮發.風濕性心臟病患者外周血調節性T細胞與IL－10、TGF－β1的關系及意義［J］.中華臨床醫師雜志（電子版），2012，6（10）：2776.

［12］Gigante M，Ranieri E.TGF－beta promotes immune suppression by inhibiting Treg cell apoptosis［J］.Immunotherapy，2010，2（5）：608.

2014－07－22）

1007－4287（2015）10－1752－02