紅細胞內神經元特異性烯醇化酶檢測

吳坤芳，蔡玉玲

（海南省人民醫院檢驗科，海南?？?70311）

紅細胞內神經元特異性烯醇化酶檢測

吳坤芳，蔡玉玲

（海南省人民醫院檢驗科，海南海口570311）

神經元特異性烯醇化酶（neuron－specific enolase，NSE）是參與糖酵解途徑的烯醇化酶中的一種，存在于神經組織和神經內分泌組織中。常人血清NSE水平為5－15ng／ml，而紅細胞內NSE及其同工酶的含量測定尚未見報道，我們現將實驗結果分析如下。

1 .材料和方法

1.1 樣本 收集在我院做健康體檢且體檢各項指標均在生物參考區內人員20名，男、女各10名。男性最大年齡81歲，最小29歲，平均44.6歲。女性最大年齡55歲，最小22歲，平均41歲。

1.2 方法 抽取血清2ml和紅細胞懸液10ml（1 ml全血加9ml生理鹽水）。紅細胞懸液用生理鹽水洗滌3次（2 000r／10分鐘），配成一定比例的紅細胞懸液混均在Sysmex－XE2100血球儀測血常規，取紅細胞、血紅蛋白、平均紅細胞體積、血小板數。然后取20μl加380μl蒸餾水溶血后行NSE測定，血清和紅細胞懸液離心（3 000r／5分鐘）取上清液行NSE測定。所有實驗在2小時內完成。

1.3 儀器和試劑 NSE測定使用Roche、cobas－C601電化學發光免疫分析儀，Sysmex－XE2100血球儀檢測血常規，試劑和定標本液均采用原公司產品，質控為伯樂公司提供。

1.4 統計學方法 取均值和標準差。按計算平均紅細胞血紅蛋白濃度和平均紅細胞血紅蛋白含量的方法，計算平均紅細胞內NSE濃度和平均紅細胞內NSE含量。根據男、女平均紅細胞內NSE濃度與血清平均NSE濃度計算其相差倍數。根據紅細胞內NSE平均含量與血紅蛋白平均含量計算溶血每產生1g／L Hb測出多少μg／L的NSE。男、女之間平均紅細胞內NSE濃度與溶血每產生1g／L Hb就可以產生多少μg／L的NSE，采用配對t檢驗。

2 結果

2.1 紅細胞洗滌3次后，90%以上的血小板已被清除，達到洗滌的目的。溶血NSE值為20μl紅細胞懸液加入380μl蒸餾水溶血后所測NSE值減上清液檢測的NSE值再乘上稀釋倍數20。

2.2 平均紅細胞內NSE濃度是血清濃度的817倍，其中男性為726倍、女性為922倍，女性高。但是平均紅細胞內NSE濃度男、女之間差異沒有統計學意義，t值為0.336。平均紅細胞內NSE含量與紅細胞大小有關系，大細胞含量較小細胞多。男性溶血每產生1g／L Hb就可以產生24.84μg／L的NSE，女性溶血每產生1g／L Hb就可以測出27.83 μg／L的NSE，男性比女性低，（t＝1.25），差異沒有統計學意義。

2.3 平均紅細胞內NSE含量為（747.46±115.9）×10－12μg，平均紅細胞內NSE濃度為（8.61± 1.48）×103μg／L。結果見表1。

表1 男、女性血清及紅細胞內NSE含量和濃度檢測結果（x—±s）

3 討論

NSE是烯醇化酶的一種同工酶，其特異地存在于神經元、神經內分泌細胞和少突膠質細胞內，其他臟器及腦脊液中的分布水平不及中樞神經系統的1%。由于NSE是神經元損傷的敏感性和特異性生化標志物，近年來有關顱腦損傷后血清與腦脊液中NSE活性改變的研究受到越來越多的關注，大量動物實驗及臨床研究表明，NSE活性改變與疾病的早期診斷、病情變化、臨床預后密切相關。NSE檢測作為腫瘤標志物可提高肺癌診斷的敏感性、特異性和準確性［1］。血清NSE濃度是反映新生兒HIE嚴重程度的敏感生化指標，NSE濃度變化趨勢是新生兒HIE預后評估的有效指標之一［2］。NSE濃度變化趨勢可預示腦組織損傷程度［3］。

紅細胞和血小板內有其同工酶，與NSE存在部分交叉免疫反應［4］。從實驗結果可見：平均紅細胞內NSE的濃度為8.61±1.48×103μg／L，是正常人群血清平均濃度10.54±2.63μg／L的817倍。女性溶血每產生1g／LHb就可以測出27.83μg／L的NSE，男性溶血每產生1g／L Hb就可以測出24.84 μg／L的NSE，女性高于男性是因為女性紅細胞內血紅蛋白低于男性，（t＝1.25），差異沒有統計學意義。溶血濃度與NSE測定值程正相關。這與鄒自英報道：溶血每產生1g／LHb可以測出34.53μg／L的 NSE［5］，結果相似。NSE測定的生物參考區為0－16.3μg／L，從實驗結果可見稍有溶血NSE檢測值就可能超出測定的生物參考區，如果不注意標本的留取和送檢而造成紅細胞損傷就會造成錯誤的檢測結果，誤導臨床診斷和治療。

紅細胞內NSE濃度是清血濃度的817倍。它比AST（10倍）、ALT（7倍）、K＋（23倍）、CK（69倍）［6］，高很多倍。從檢測平均紅細胞內NSE含量和濃度說明血清NSE檢測對標本的要求極高，紅細胞稍有損傷就可出現假陽性結果，所以應禁止有溶血的標本進行NSE水平測定。

［1］李佩青，周 偉，張喆，等.血清神經元特異性烯醇化酶與圍產兒缺氧缺血性腦病相關性研究［J］.中國婦幼保健，2013、15：2402.

［2］郝立成，張 雙，李樹華.血清BDNF及NSE檢測在驚厥兒童中的臨床應用價值［J］.中國婦幼保健，2013，5：783.

［3］姜艷紅，劉 冰，呂曉嫻.電化學發光檢測神經元特異性烯醇化酶影響因素分析［J］.現代腫瘤醫學，2012，09：1944.

［4］張亞松，肖登巖，麥富巨.溫度、時間及溶血對全血標本中NSE測定的影響［J］.醫學臨床研究，2008，7（25）：1193.

［5］鄒自英，黃 海，袁成良.標本保存時間和溶血對神經元特異性烯醇化酶測定的影響［J］.西南國防醫藥，2006，6：610.

［6］GUDER WG.Thrombocytes as aninterfering factor in chinical chemisty［J］.Clin chem.Clin Biochem，2002，28（6），445.

2014－09－18）

1007－4287（2015）10－1762－02