HPLC法測定三白灌腸液中升麻素苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷含量

李慶杰，王蓮萍 ，李國峰

1.長春中醫藥大學附屬醫院，吉林長春 130021；2.吉林農業大學，吉林長春 130118

“三白灌腸液”是該院肛腸科開發的用于治療腸炎的院內制劑，臨床應用多年，療效顯著，為進一步造福廣大病患，該院決定對該院內制劑進行新藥臨床前研究，在新藥研制過程中，我們對質量標準進行建立，制定了防風中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量測定方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津20AT型液相（日本島津），超聲波清洗機（昆山市超聲波儀器有限公司）。

1.2 試藥

乙腈為色譜純（美國Fisher公司），升麻素苷對照品（111522-201209）、5-O-甲 基 維 斯 阿 米 醇 苷 對 照 品（111523-201208），均購于中國藥品生物制品檢定所。三白灌腸液由長春中醫藥大學附屬醫院實驗研究中心提供。

2 方法與結果

2.1 升麻苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測定[1-10]

2.1.1 色譜條件 迪馬C18色譜柱，規格4.6×250 mm；波長270 nm；流動相：乙腈 -0.1%磷酸溶液（22:78)為流動相；檢測波長為 254 nm；流速：1 mL/min；柱溫：室溫。

表1 回收率試驗

2.1 .2溶液的制備

2.1.2.1 對照品溶液的制備 精稱升麻苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷，用甲醇制成每1 mL分別含升麻苷15μg，含5-O-甲基維斯阿米醇苷30μg的溶液。

2.1.2.2 供試品溶液的制備 精密吸取2 mL本品到10 mL量瓶，甲醇定溶，搖勻，濾過后作為供試品溶液。

2.1.2.3 陰性樣品溶液的制備 依據已確定的制劑成型工藝操作，得到防風陰性樣，并取防風陰性樣，按供試品溶液制備方法制備得到防風陰性樣品溶液。

2.1.3 專屬性實驗 取上述樣品各10μL分別進行分析，結果陰性無干擾，表明分離條件良好。見圖1、2、3。

圖1 對照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性對照色譜圖

2.1.4 線性關系的考察 精密吸取供試品混合液3μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL，分別注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標，對照品進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，升麻素苷回歸方程為y=2000000x-25526，r=0.999；5-O-甲基維斯阿米醇苷回歸方程為y=3000000x-53934，r=0.999。 結果表明升麻素苷在 0.045～0.375μg范圍內線性關系良好，5-O-甲基維斯阿米醇苷在0.09～0.75μg范圍內線性關系良好。

取對照品液 3 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL，進樣分析，記錄峰面積，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，制作標準曲線，升麻素苷回歸方程為y=2000000x-25526，r=0.999；5-O-甲基維斯阿米醇苷回歸方程為 y=3000000x-53934，r=0.999。升麻素苷在0.045～0.375 μg、5-O-甲基維斯阿米醇苷在 0.09～0.75 μg范圍內線性關系良好。

2.1.5 精密度試驗 取制得供試品溶液，連續進行6次，用峰面積計算，升麻素苷RSD為0.67%，5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD為0.88%，表明該方法具有良好的精密度。

2.1.6 穩定性試驗 取制得供試品溶液，分別在第0、2、4、8、12、24 h 進樣分析，用峰面積計算，升麻素苷 RSD為2.23%，5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD為2.27%，供試品溶液在24 h內較穩定。

2.1.7 重現性試驗 取一批樣品，平行制備6份樣品溶液，進樣分析測定，分別以升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷含量計算，RSD分別為1.63%和1.68%，表明該方法具有良好的重現性。

2.1.8 回收率試驗 精密吸取本品6份，每份1 mL(其中升麻素苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷含量按6次測定平均值計算，分別為 0.0741 mg/mL和0.114 mg/mL），置10 mL容量瓶中，精密加入濃度為0.15 mg/mL的升麻素苷0.5 mL，濃度為0.3 mg/mL的5-O-甲基維斯阿米醇苷0.5 mL，按2.1、2.2項下方法操作，得供試品溶液，測定，經計算，升麻素苷回收率為99.87%，RSD為1.38%；5-O-甲基維斯阿米醇苷回收率為99.01%，RSD為0.96%，回收率良好。結果見表1。

2.2 樣品含量測定

取3批中試樣品，按2.1、2.2項下方法操作,測定。結果見表2。

表2 樣品含量測定(mg/mL)

3 討論

在建立升麻素苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷含量測定時，起初我們采用藥典方法，但樣品分離條件不夠理想，陰性有干擾，將色譜條件優化至現有條件后，達到滿意的分離效果。

[1]中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫藥科技出版社.2015：149.

[2]李悅悅，王慧，陳俊.HPLC法測定防風中升麻苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量[J].藥學實踐雜志，2010，28（6）:445-447.

[3]趙博，楊鑫寶，楊秀偉.HPLC法同時測定防風中6個主要成分的含量[J].藥物分析雜志，2013，33（3）:382-387.

[4]姬雪禮，李文烈，張永鋒.辛防通竅片中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測定[J].中國藥業，2013，22（11）:38-39.